1消癌解毒方抗肿瘤作用的实验研究【摘要】 目的观察周仲瑛教授“癌毒”理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药消癌解毒方的抗肿瘤作用。方法采用体内试验以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率为实验指标评价消癌解毒方对 S180移植性肉瘤的抑制作用;以荷瘤小鼠存活时间为实验指标评价消癌解毒方对 H22 移植性腹水癌的抑制作用。结果消癌解毒方能明显抑制实体瘤重，并延长荷瘤小鼠存活时间。结论消癌解毒方对S180、H22 诱发的移植性肿瘤具有一定的抑制作用。 【关键词】 消癌解毒方; 抗肿瘤; S180 肿瘤细胞株; H22 肿瘤细胞株Abstract：ObjectiveTo investigate the anti-tumor effect of long-term clinical practice as effective anti-cancer drugsJiedu Xiaoai Prescription, by Professor Zhou Zhongying.MethodsThe inhibitory effect of the Jiedu Xiaoai Prescription on S180 cells in vivo was evaluated by the tumor weight of tumor-beating mice and the tumor inhibition rate.The inhibition effect on the H22 cells in vivo was evaluated by the survival time of tumor-bearing mice.ResultsJiedu Xiaoai Prescription could obviously inhibit 2the tumor weight of tumor-bearing mice，and prolong the survival time.ConclusionJiedu Xiaoai Prescription has the inhibitve effect on the S180 cells and H22 cells.Key words： Jiedu Xiaoai Prescription; Anti-tumor; S180; H22消癌解毒方是在国医大师周仲瑛先生“癌毒”理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药。采用消癌解毒方中药汤剂配合化疗药物治疗中晚期恶性肿瘤患者，该方能提高中晚期恶性肿瘤患者近期临床疗效、生活质量及机体免疫功能，减少化疗药物毒副反应(另文报道)。但该方抗癌机理还不清楚，本研究以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率为实验指标评价消癌解毒方对 S180 移植性肉瘤的抑制作用，以荷瘤小鼠存活时间为实验指标评价消癌解毒方对 H22 移植性腹水癌的抑制作用，为揭示其抗肿瘤作用提供参考。1 材料与仪器1.1 仪器 二氧化碳培养箱(美国 Thermo Forma 公司);DLF560 型超净工作台(荷兰 clear Air Techniek bv 公司);细胞培养瓶(加拿大 BIOFIL 公司);倒置显微镜(德国 Leica BMIRB 公司);SUNRISE 自动酶标仪(奥地利 TECAN 公司 );十万分之一电子天平(德3国赛多利斯)。1.2 细胞系 S180 肿瘤细胞株和 H22 肿瘤细胞株购自南京医科大学细胞库。1.3 动物昆明种小鼠(普通级) ，由南京中医药大学实验动物中心购自上海斯莱克实验动物责任有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(沪)2003-0003; 实验动物使用许可证：SYXK( 苏)2002-0123。1.4 药品与试剂 消癌解毒方：白花蛇舌草、漏芦、半枝莲等常规煎药，合并滤液，浓缩即成，保存备用。新生牛血清(杭州四季青公司，批号 031801);四甲基二氮唑蓝(MTT，北京拜尔迪生物公司，Amresco 0993); 二甲基亚砜(DMSO，博大泰克公司);0.25%胰蛋白酶(美国 Hyclone Lab 公司);环磷酰胺 (上海华联制药有限公司，批号 050936);注射用生理盐水(徐州莱思药业公司，批号 051922)。2 方法2.1 消癌解毒方对肉瘤 S180 细胞体内作用 取昆明种小鼠60 只，雄性，体质量 1822g，分为 5 组，每组 12 只，即模型对4照组(生理盐水灌胃 )，阳性对照组 (环磷酰胺)，药物高、中、低剂量组(消癌解毒中药灌胃) 。给药 1 次/d，连续给药 14 d，于给药后第4 天，每鼠右腋下接种 S180 细胞悬液 0.2 ml。第 15 天剥取实体瘤并称重，按以下公式计算瘤重系数及抑瘤率，并进行组间 t 检验：瘤重系数= 瘤重/ 体重抑瘤率(%)=(模型组瘤重系数均数-药物组瘤重系数均数)/ 模型组瘤重系数均数100%2.2 消癌解毒方对肝癌 H22 细胞体内作用取昆明种小鼠 60只，雄性，体质量 1822 g，分为 5 组 ，每组 12 只，即模型对照组(ig NS)，阳性对照组(ip 环磷酰胺 )，药物高、中、低剂量组(ig消癌解毒方)。给药 1 次/d ，连续给药 14 d，于给药后第 4 天，每鼠腹腔接种 H22 细胞悬液 0.2 ml。接种的 H22 细胞悬液为转种第8 天的 H22 瘤源动物腹水用生理盐水按体积比 13 稀释。观察用药后荷瘤小鼠存活时间，按以下公式计算生存延长率，并进行组间t 检验。生存延长率(%)=(用药组存活天数均数-模型组存活天数均数)/模型组存活天数均数100%2.3 统计学方法所有数据均输入计算机，采用 SPSSI2.0 统计5软件，实验数据以s 表示，采用 t 检验。3 结果3.1 消癌解毒方对 S180 肉瘤的抑制作用结果显示：消癌解毒方高剂量组的抑制率达到 40%以上，提示消癌解毒方灌胃给予对移植性 S180 肉瘤具有一定的抑制作用。见表 1。3.2 消癌解毒方对 H22 腹水癌的抑制作用结果表明，消癌解毒方高、中、低剂量组荷瘤小鼠的存活时间均有一定的延长，其中，高、中剂量组的生命延长率达 30%以上。见表 2。表 1 消癌解毒方对 S180 肉瘤小鼠实体瘤重的影响与模型组比较，P 0.0 1，P 0.0 5;n=12 表 2 消癌解毒方对 H22 腹水癌小鼠存活时间的影响与模型组比较，P 0.0 1，P 0.0 5;n=124 讨论恶性肿瘤是目前危害人类健康的主要疾病之一。目前对恶性肿瘤的治疗手段以手术、放疗、化疗为主，手术多适用于早期癌症患者，放疗和化疗只对敏感瘤种有效，但同时又会出现严重的毒副反应和后遗症，甚至造成严重的医源性疾病而危及生命。而以中医理论为基础治疗肿瘤则是对机体整体调节，发挥多层次、多环节、6多靶点的综合作用，无论是在抑制、杀伤肿瘤细胞，调节机体免疫功能，还是改善症状和体征，减轻放化疗毒副反应方面都发挥着重要作用，因此中医药的抗癌作用越来越受到重视1，2 。“癌毒”理论是国医大师周仲瑛教授根据近六十年临床实践提出的创新性中医学理论，该理论认为癌毒是肿瘤发生发展的关键，是在肿瘤发病过程中体内产生的一种特殊的病理因素，可能由多种物质、多种因素复合而成;癌毒是肿瘤患者在正虚的基础上，因体内邪盛而生毒，癌毒与痰浊、淤血、湿浊、热毒等病理因素同时胶结存在、互为因果，亦可兼夹转化、共同为病;癌毒一旦形成，阻滞体内，则病变乖戾，一方面大量耗伤人体气血津液，一方面导致脏腑气血功能失调，诱生痰浊、淤血、湿浊、热毒等多种病理因素，并耗气伤阴，发生各种复杂证候，表现出邪毒嚣张、难以消除、易于传变、病情笃重、病势凶险、正气虚败、预后极差等证候特点3，4 。消癌解毒方正是在“癌毒”理论指导下，在辨证与辨病相结合的基础上，根据恶性肿瘤“痰淤郁毒、阴伤气耗”这一基本病机，以“消癌解毒，益气养阴”为法，选择白花蛇舌草、半枝莲、漏芦、僵蚕、蜈蚣、八月扎、太子参、麦冬、炙甘草等按特定比例组成，全方扶正祛邪，攻补兼施，临床应用多年，已证实具有非常好的抗肿瘤疗效5，6。白花蛇舌草、半枝莲、漏芦等是临床常用抗癌药79，现代药理研究具有明显抗肿瘤作用，如逆转肿瘤多药耐药10、诱导肿瘤细胞凋亡11及下调肿瘤细胞端粒酶活性等作用12。7前期临床研究结果证明，与化疗同步应用消癌解毒方与单纯化疗相比，可提高肿瘤患者近期临床疗效及化疗完成率，明显提高化疗患者的生活质量及免疫功能，减轻化疗毒副反应(P0.01 或P0.05)(另文报道)。临床研究提示该方是恶性肿瘤患者安全、有效的治疗用药。本研究以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率为指标评价消癌解毒方对 S180 移植性肉瘤的抑制作用，以荷瘤小鼠存活时间为指标评价消癌解毒方对 H22 移植性腹水癌的抑制作用，实验方法先进且成熟可靠。结果表明，消癌解毒方能明显抑制荷瘤小鼠的实体瘤重，并延长其存活时间，对 S180 肉瘤、 H22 腹水型肿瘤均有一定的抑制作用。消癌解毒方是经长期临床实践的有效抗癌方药，但其分子水平抗肿瘤机制有待进一步深入研究。【参考文献】1 肖 颖，李 覃.中医药抗肿瘤作用机制的研究进展 J.中国医学杂志，2008，6(3)：38.2 何光星，刘 洁，王 笳，等. 中医药抗肿瘤作用机理研究现状J.四川中医，2008，26(8)：47.3 郭立中，吴勉华，周学平，等.周仲瑛教授学术思想简介(一)J.南京中医药大学学报，2008，24(6)：361.84 陈四清.周仲瑛教授从癌毒辨治肿瘤经验J.新中医，2004，36(2)：7.5 陈四清，张成铭，叶丽红. 消癌扶正法治疗肝癌介入后复发J.江苏中医药，2007，39(2)：42.6 叶丽红，顾 勤. 周仲瑛教授的肿瘤观 J.中国中医药信息杂志，2002，9(3) ：63.7 李 忠.临床中医肿瘤学M.沈阳：辽宁科学技术出版社，2002：255.8 胡 玲，王洪琦，崔娜娟，等.白花蛇舌草对小鼠活体腹水H22 肝癌细胞及 T 细胞的影响 J.广州中医药大学学报 ，2007，24(4)：313.9 李秀荣，焦中华，刘培民. 中药漏芦抽提剂逆转肿瘤多药耐药及诱导凋亡研究J.山东中医药大学学报，2008，32(1) ：74.10 李 洁. 白花蛇舌草对人肺巨细胞癌细胞株 PG 细胞端粒酶活性的影响J.时珍国医国药， 2009，20(3)：666.911 代志军，刘小旭，薛 茜，等.半枝莲含药血清对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用J.中药材，2008，31(4) ：550.12 李 洁. 白花蛇舌草对人肺巨细胞癌细胞株 PG 细胞端粒酶活性的影响J.时珍国医国药， 2009，20(3)：666.