1高脂血症患者补体调节蛋白 CD55、CD59 表达与脂肪细胞因子的关系研究作者：刘艳英 刘永铭 杨京港【摘要 】 目的 探讨高脂血症患者补体调节蛋白 CD55、CD59的表达与脂肪细胞因子瘦素、脂联素、抵抗素水平的变化及其关系。方法 高脂血症患者 50 例，年龄、性别、体重与其匹配的健康对照21 例，用流式细胞术测定外周血白细胞 CD55、CD59 的表达，用酶联免疫法测定血浆瘦素、脂联素，血清抵抗素浓度，分析CD55、CD59 和脂肪细胞因子在高脂血症中的变化及其关系。结果 高脂血症患者 CD55 阳性淋巴细胞平均荧光强度(MFI)较健康对照组下降(P0.05)，瘦素较健康对照组升高 (P 0.05)，脂联素较健康对照组下降(P0.05) ；CD55 阳性淋巴细胞 MFI 与腰围、腰臀比值呈负相关(均 P0.05) ，与脂联素呈正相关(P0.05) 。结论 高脂血症患者补体调节蛋白 CD55 表达下调，可能与腹部脂肪分布、脂联素有关，脂联素可能影响补体调节蛋白 CD55 的表达。 【关键词】 高脂血症；CD55；CD59 ；脂肪细胞因子研究表明，动脉粥样硬化是一种慢性炎性病变，补体参与动脉粥样硬化的发生、发展1 。补体调节蛋白抑制补体活化保护机体组2织免受补体激活所致的损伤。脂肪细胞因子由脂肪细胞分泌，参与胰岛素信号转导、糖脂代谢，在肥胖、2 型糖尿病、脂代谢紊乱及心血管疾病中发挥着重要作用2 。本研究通过观察高脂血症患者补体调节蛋白 CD55、CD59 的表达和脂肪细胞因子瘦素、脂联素、抵抗素的关系，探讨高脂血症补体调节蛋白表达的可能调节机制。1 对象与方法1.1 对象 选择 2005 年 10 月至 2006 年 4 月本院门诊及住院的高脂血症患者 50 例，男 24 例，女 26 例，年龄 4087( 平均65.210.7)岁，其中高胆固醇血症 23 例，高甘油三酯血症 13 例，混合型高脂血症 14 例;正常对照组为年龄、性别、身高、体重与高脂血症组相匹配的健康人 21 例，男 11 例，女 10 例，年龄4980(平均 64.17.4)岁。入选标准:高脂血症诊断标准参照我国1997 年制订的血脂异常防治建议3,血清总胆固醇 (TC)5.72 mmol/L 和(或) 甘油三酯(TG)1.70 mmol/L 作为入选条件,不同日期血脂达上述标准 2 次以上可入选。排除标准:肝肾疾病、甲状腺功能低下等引起的继发性高脂血症;有明确自身免疫性疾病者;1 个月内有严重感染、手术和外伤史;慢性感染性疾病患者;急性冠状动脉综合征患者、半年内有急性心肌梗死或脑卒中病史者;严重肝肾功能不全、恶性肿瘤患者。记录入选对象的年龄、身高、体重、腰围、臀围、血压、吸烟指数(每日吸烟支数吸烟年数)、腰/ 臀比值，计算体重3指数(BMI)。1.2 方法1.2.1 血清(血浆)的采集和保存 空腹 12 h 以上，晨 8 时许取肘静脉血于真空抗凝(EDTA)或促凝试管,立即 4 离心分离血浆,2 h 内分离血清,置 -80冰箱保存,用于测定脂肪细胞因子。1.2.2 血脂检测 采用酶法，取当日所采血清，使用美国Beckman Coulter 公司 LX20 全自动生化分析仪测定。TC 采用CHODPAP 法，TG 采用 GPOPAP 法，低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC) 采用直接法。1.2.3 补体调节蛋白 CD55、CD59 的表达使用流式细胞仪测定 取空腹肘静脉血 2 ml，置含 EDTA 的真空采血器,取血后 30 min 内测定。将鼠抗人 CD55PE、鼠抗人 CD59FITC 单克隆抗体及相应阴性对照各 10 l 加入标记的试管中, 每管加入 100 l 新鲜抗凝全血,振荡后室温避光反应 15 min，然后用全自动全血细胞制备仪裂解红细胞,最后用流式细胞仪检测。利用前向角散射和侧向角散射来区分单核细胞、淋巴细胞和粒细胞。荧光标记细胞平均荧光强度(MFI) 反映 CD 分子的表达强度。流式细胞仪为美国 Coulter EPICS XL 型，荧光标记单克隆抗体 CD55PE、CD59FITC 购自4美国 Caltag Laboratories 公司。1.2.4 脂肪细胞因子测定 瘦素(血浆) 、脂联素(血浆)、抵抗素(血清)采用 ELISA 法测定，试剂盒均购自美国 RD 公司；血浆肿瘤坏死因子(TNF) 、血清白细胞介素6(IL6) 采用放射免疫法测定，试剂盒购自北京北方生物技术研究所。1.3 统计学处理 数据用 xs 或中位数(M)表示,组间差异用独立样本 t 检验, 指标间关系用直线相关、偏相关及多元回归分析。采用SPSS11.0 统计软件进行统计分析。2 结 果2.1 一般临床资料 高脂血症组 TC、TG、LDLC 、HDLC 、腰臀比值、收缩压均显著高于对照组(P0.05),年龄、身高、体重、体重指数、腰围、臀围、空腹血糖、吸烟指数、TNF 、IL6 两组间差异不显著(表 1)。2.2 高脂血症患者补体调节蛋白 CD55、CD59 的表达 高脂血症组 CD55 阳性淋巴细胞 MFI(2.080.28)低于对照组(2.340.44),表示 CD55 表达强度减低 (P0.01);CD59 阳性淋巴细胞 MFI 高脂血症组(3.691.24)与对照组(3.770.90)间差异不显著。表 1 两组5一般临床资料2.3 高脂血症患者脂肪细胞因子水平及影响因素 高脂血症患者血浆瘦素水平高于正常对照组8.65 (0.6635.32)mg/L vs 5.91(0.22 24.33)mg/L，P0.017 ，女性高于男性；脂联素明显低于正常对照组5.42 (1.1426.33)mg/L vs 9.23(3.5828.10)mg/L，P 0.015 ；抵抗素两组间差异不显著10.33(4.1921.84)ng/ml vs 10.15(5.6929.03)ng/ml，P0.904 。直线相关分析显示：瘦素与TC、TG 、LDLC 、BMI、腰围、臀围呈正相关 (r 值分别为0.257、0.242、0.304、0.441、0.439 ，均 P0.05)；脂联素与TG、体重、BMI、腰围、腰臀比值呈负相关(r 值分别为-0.456、-0.439、-0.427、-0.390 、-0.397，均 P0.01) 。2.4 补体调节蛋白 CD55 与脂肪细胞因子及临床指标的关系 CD55 阳性淋巴细胞 MFI 与腰围、腰臀比值呈负相关 (r=-0.272、-0.309,均 P0.05)，与脂联素呈正相关(r=0.268，P=0.024);偏相关分析，控制腰围、腰臀比值后 CD55 阳性淋巴细胞 MFI 与脂联素的关系依然存在。以 CD55 阳性淋巴细胞 MFI 为因变量，以腰围、腰臀比值、脂联素为自变量进行多元线性回归：CD55 阳性淋巴细胞MFI=3.488-1.571腰臀比值,标准化回归系数为-0.309。3 讨 论6脂肪组织是人体最大的内分泌器官，能分泌大量脂肪细胞因子，包括瘦素、脂联素、抵抗素等特异性因子和 TNF、IL6 等非特异性因子。肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征患者存在高瘦素血症和瘦素抵抗，脂联素水平降低，TNF 、IL6 水平升高。血脂升高时过量生成的游离脂肪酸(FFA)使脂质过度沉积，脂肪细胞体积增大、数目增多，肝脏合成 TG 过多，极低密度脂蛋白(VLDL)生成增加、HDLC 水平下降促进动脉粥样硬化的发生。脂联素是目前最清楚和最重要的抗动脉粥样硬化、抗炎、增强胰岛素敏感性的脂肪细胞因子，抵抗素在人类胰岛素抵抗中的作用尚不肯定。TNF 通过抑制胰岛素信号转导，抑制葡萄糖的转运和摄取，加速脂肪分解使FFA 水平增加。IL6 可刺激肝脏 TG 合成。瘦素即可促进脂肪分解也可促进 FFA 氧化。脂联素则可抑制 TNF 的产生。噻唑烷二酮类药物(TZD)可上调脂联素的表达，降低瘦素、抵抗素、TNF ，对 IL6 的影响不明显，进而改善胰岛素抵抗4 。Behre 等5研究发现地中海地区成人脂联素水平与年龄无关，肥胖、腹型肥胖、高甘油三酯血症及代谢综合征患者脂联素明显升高，女性高于男性。中心型肥胖老年女性血清脂联素水平低于周围型肥胖患者，IL6 水平升高，并且独立于年龄、体重指数和总脂含量6 。家族性混合性高脂血症患者血清脂联素水平下降，合并有冠心病时血清瘦素明显升高7 。高脂血症患者体重减轻后瘦素下7降，脂联素有升高趋势8 。动物实验表明，阿托伐他汀降低高胆固醇兔血清和脂肪组织瘦素含量9 。高脂血症调脂治疗同样影响脂肪细胞因子水平。Westphal 等10研究表明高脂血症患者口服烟酸治疗 6 w，脂联素升高 94%，抵抗素中度降低，瘦素无明显改变。2 型糖尿病脂代谢紊乱患者服用罗格列酮降低 TG 升高HDLC 的同时亦升高血浆脂联素降低抵抗素水平 11 。本研究显示，与正常人比较，高脂血症患者血浆瘦素水平升高，与致动脉粥样硬化的血脂成分、肥胖、腹型肥胖呈正相关；脂联素水平降低，与 TG、肥胖、腹型肥胖呈显著负相关。补体调节蛋白能够抑制补体活化。CD55 抑制补体 C3、C5 转化酶的形成，防止补体活化； CD59 阻碍补体 C7、C8 与 sC5b6 的结合，抑制补体 sC5b9 的形成，防止自身组织受到补体活化的损伤。作者在最近的研究中表明，高脂血症患者白细胞补体调节蛋白CD55 表达下调并与腰围、腰臀比值呈负相关，与脂联素呈正相关12，13 。高脂血症患者 CD55 表达下调，降低了机体对补体活化的抑制作用，有利于动脉粥样硬化的形成。腰围、腰臀比值反映腹部脂肪分布，代表内脏型肥胖。本研究显示，补体调节蛋白与脂肪细胞因子瘦素、脂联素、抵抗素之间仅脂联素与 CD55 的表达呈显著正相关，校正腰围、腰臀比值后两者关系仍存在，提示腹型肥胖脂联素分泌降低可能抑制 CD55 的表达，脂联素可能有上调CD55 表达的作用。脂联素抗动脉粥样硬化的作用肯定，其病理生8理学机制中是否包含了通过上调 CD55 的表达影响补体系统而减少自身组织的损伤，发挥抗动脉粥样硬化作用，值得进一步研究。补体调节蛋白与肥胖、脂联素、瘦素、抵抗素等脂肪细胞因子间相互作用机制的深入研究，将有助于提高动脉粥样硬化发病机制的认识，为抗动脉粥样硬化的干预治疗提供理论依据和潜在治疗靶点。【参考文献】1 刘永铭,严 祥，刘艳英 .补体与动脉粥样硬化J.中华心血管病杂志，2005；33(9)：8669.2 李 伶，杨刚毅.脂代谢紊乱和脂肪细胞因子与胰岛素抵抗J.中国糖尿病杂志，2007；15(3)：12931.3 中华心血管病杂志编辑委员会血脂异常防治对策专题组.血脂防治建议J.中华心血管病杂志，1997；25(3)：16975.4 Fasshauer M，Paschke R.Regulation of adipocytokines and insulin resistanceJ.Diabetologia，2003；46(12)：1594603.5 Behre CJ，Brohall G，Hulthe J,et al.Are serum adiponectin concentrations in a population sample of 964yearold Caucasian women with varying glucose tolerance associated with ultrasoundassessed atherosclerosisJ? Intern Med，2006 ；260(3)：23844.6 Tank