革兰氏染色观察1. 涂片：左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈）即可，或先滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一薄层。 （在平板上分别滴三滴水，一边涂布金黄色葡萄球菌 ，另一边涂布大肠杆菌，中间涂布二者的混合菌） 。 拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。 2. 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰。 3. 固定：常用高温进行固定。即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动 34 次，共约 34 秒。要求玻片温度不超过 60，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。 4. 染色： （1）初染： 分别加饱和结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 （2）媒染： 滴加卢戈氏碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 （3）脱色： 将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用 95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约 2030 秒，立即用水冲净酒精。 （4）复染： 番红液染 0.5-1 分钟，水洗。 5. 镜检：干燥后，先用低倍镜观察，再置于油镜（一百倍）观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。 （金黄色葡萄球菌为紫色，大肠杆菌为红色，混合菌既有红色也有紫色）