资源预览内容
亲,该文档总共2页全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述
叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关,叶绿素含量的测定无论是在生理上 ,还是在 选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法,即用光 电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。该方法不仅要配制无机标准溶液,而且不能 对溶液中不同色素分子进行定量测定;分光光度法则不需配制标准溶液,又可对溶液中不同 色素分子进行定量测定,已得到广泛应用。 一、 原理 分光光度法测定叶绿素含量,就是利用叶绿素 a 和叶绿素 b 吸收光谱的不同,测定各 特定峰值波长下的光密度,再根据色素分子在该波长下的消光系数,计算出浓度 。叶绿素 a、叶绿素 b 的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm 处,同时已知叶绿素 a 和叶绿素 b 在 663nm 处的消光系数分别为 82.04 和 9.27;在 645nm 处的消光系数分别为 16.75 和 45.60。这样叶绿素 a 和叶绿素 b 的浓度与他们在 663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示:D663=82.04Ca+9.27CbD645=16.75Ca+45.60Cb式中 D663 和 D645 分别为叶绿素溶液在波长 663nm、645nm 处的光密度;C a 、C b 分别为叶绿素 a 和叶绿素 b 的浓度,单位 g. L-1。解方程可得到:计算:C a=12.7D663-2.59D645Cb=22.9D645-4.67D663Ca+b=20.3D645+8.04D663Ca ,Cb 分别为叶 a 和叶 b 的浓度,C a+b 为叶 a 和叶 b 的总浓度,单位为 mgL-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算:叶绿素含量(mgL -1或 mgdm-2)= C*V A*1000式中 C:叶绿素浓度(mgL -1) ;V :提取液总体积(ml) ;A:叶片鲜重(g)或面积(dm 2)二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素:药品:丙酮:乙醇按 1:1 体积混合成浸提液-1 -1 -1 仪器:分光光度计方法:丙酮乙醇混合液法1将丙酮、无水乙醇按 1:1 比例配成混合浸提液 。 2称取 0.1g 或用打孔器打取总面积为 0Ldm -2 的叶圆片,剪成细丝置于盛混合液的试管中, 加塞置于暗处,于室温(10-30 C)条件下浸提。每隔一定时间观察浸提情况,以材料完全变白为准 。用混合浸提液作空白调零,测定 663nrn、645nrn 处测光密度(一般隔夜测定) 。 3.按以上方法计算叶绿素含量 。参考文献:植物生理学实验技术 郝建军主编 辽宁科学技术出版社 2001 年再版
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号