叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上 ，还是在 选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光 电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能 对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同 色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。 一、 原理 分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a 和叶绿素 b 吸收光谱的不同，测定各 特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度 。叶绿素 a、叶绿素 b 的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm 处，同时已知叶绿素 a 和叶绿素 b 在 663nm 处的消光系数分别为 82.04 和 9.27；在 645nm 处的消光系数分别为 16.75 和 45.60。这样叶绿素 a 和叶绿素 b 的浓度与他们在 663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：D663=82.04Ca+9.27CbD645=16.75Ca+45.60Cb式中 D663 和 D645 分别为叶绿素溶液在波长 663nm、645nm 处的光密度；C a 、C b 分别为叶绿素 a 和叶绿素 b 的浓度，单位 g. L-1。解方程可得到：计算：C a=12.7D663-2.59D645Cb=22.9D645-4.67D663Ca+b=20.3D645+8.04D663Ca ,Cb 分别为叶 a 和叶 b 的浓度，C a+b 为叶 a 和叶 b 的总浓度，单位为 mgL-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：叶绿素含量（mgL -1或 mgdm-2）= C*V A*1000式中 C：叶绿素浓度（mgL -1） ；V ：提取液总体积（ml） ；A：叶片鲜重（g）或面积（dm 2）二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素：药品：丙酮：乙醇按 1：1 体积混合成浸提液-1 -1 -1 仪器：分光光度计方法：丙酮乙醇混合液法1将丙酮、无水乙醇按 1：1 比例配成混合浸提液 。 2称取 0.1g 或用打孔器打取总面积为 0Ldm -2 的叶圆片，剪成细丝置于盛混合液的试管中， 加塞置于暗处，于室温（10-30 C）条件下浸提。每隔一定时间观察浸提情况，以材料完全变白为准 。用混合浸提液作空白调零，测定 663nrn、645nrn 处测光密度（一般隔夜测定） 。 3.按以上方法计算叶绿素含量 。参考文献：植物生理学实验技术 郝建军主编 辽宁科学技术出版社 2001 年再版