1腰椎间盘突出症外周血 TNF- 表达水平的临床研究摘要：目的 探讨外周血 TNF- 水平与 LDH 的关系。方法 46 例腰椎间盘突出症患者按影像学表现分为膨突型、脱出型。采用放免法（RIA）检测外周血 TNF- 水平。结果 LDH 组外周血 TNF- 水平较正常对照组增高，且具有显著性差异（P0.05） ；膨突组、脱出组、正常对照组外周血 TNF- 比较,前两者较后者增高，脱出组增高更明显，且各组间差异显著（P0.05 或 P0.01） 。结论 LDH 存在外周血 TNF- 水平异常，不同影像学类型 LDH 炎性水平有差异。 关键词 :腰椎间盘突出；外周血 ；肿瘤坏死因子 Abstact: Objective: To analyze the correlation between the levels of TNFin peripheral blood and lumbar disc herniation(LDH). Method: All the 46 patients of LDH were grouped under contained and extruded herniation by video shows , and detected the levels of TNF in them by RIA.Result: The levels of TNFin peripheral blood in LDH were obviously higher than that in normal control group（P0.05）. There were significant differences in the levels of TNFin peripheral blood between contained herniation or extruded herniation and normal control group (p0.05 or p0.01);So was true 2between contained herniation and extruded herniation(p0.05). Conclusion: There are different expressions of TNFin LDH, and it is different in dissimilar viedo types of LDH . Key words: lumbar disc herniation(LDH)/ peripheral blood / TNF- 大量研究提示：TNF- 被认为是 LDH 发病机制的一个重要致炎因子，且与神经性疼痛密切相关。TNF- 表达水平更多的研究集中在对突出髓骸局部，而外周血 TNF- 表达水平的研究未见系统报道。本课题通过研究外周血 TNF- 水平，进一步探讨 LDH 炎症机制，同时探讨外周血 TNF- 水平与影像学类型之间的关系。 1 材料与方法 1.1 研究对象 2004 年 12 月至 2005 年 2 月泸州医学院附属医院神经内科、骨科、康复科门诊及住院的 LDH 患者 46 例，男 31例，女 15 例，年龄 2070 岁，平均年龄 45.2212.25 岁，病程15 天15 年，平均病程 5.1 年。均经临床症状、体征及 CT 或 MRI等检查确诊。正常对照组系正常健康体检者，共 20 例，男 13 例，女 7 例，年龄 2070 岁，平均年龄 43.6011.96 岁，LDH 组及正常对照组均经各项检查排除自身免疫性疾病、过敏性疾病、血液系统疾病、淋巴系统疾病、中枢神系统疾病、恶性肿瘤、肝、肾疾病、急慢性感染；且近期未使用激素、免疫抑制剂或非甾体类消炎镇痛3药。 1.2 方法 从 LDH 组和正常对照组抽取静脉血 2ml，加入促凝管，室温复融混匀后，43000rpm 离心 5min 分钟；取上清液（血清）200ul，加入 10ul 抑肽酶；置20冰箱保存备用。严格按放免药盒说明书测定方法检测外周血 TNF- 水平。 2 结 果 2.1 LDH 组与正常对照组外周血 TNF- 水平测定（见表-1） 表-1 LDH 患者及正常对照组外周血 TNF- 水平检测结果（ s，ng/ml） 组 别例 数 TNF- LDH 组 461.880.61 正常对照组 201.380.41 注： 与正常对照组比较 P0.05 表-1 显示：LDH 组外周血 TNF- 水平较正常对照组增高，且具有显著性差异（P0.05 ） 。 22 不同影像学类型 LDH 患者及正常组外周血 TNF- 水平测定（见表-2） 表-2 膨突型、脱出型 LDH 患者及正常对照组外周血 TNF 水平检测结果（ s，ng/ml） 4组 别例 数 TNF 膨突组 241.700.48* 脱出组 222.070.69# 正常对照组 201.380.41 注： 与正常组比较 P0.05，# 与正常组比较 P0.01，*与脱出组比较 P0.05 表-2 提示：膨突型、脱出型 LDH 患者的外周血 TNF- 水平较正常对照组增高，脱出型增高明显，且各组间差异显著（p0.05或 p0.01） 。提示 LDH 患者外周血 TNF- 水平有异常,且不同影像学类型 LDH 患者外周血 TNF- 水平也有差异。 3 讨 论 大量研究表明 TNF- 是 LDH 发病机制中的一个重要致炎因子，且与神经性疼痛密切相关1。王民2等对突出及正常椎间盘组织进行检测，结果发现 iNOS、TNF-、IL-1、 IL-6 表达阳性细胞在突出椎间盘周围炎性肉芽组织中表达最强。以上均提示突出髓核局部有 TNF- 表达。对于 LDH 患者体内通过何种机制产生 TNF- 尚不明确。有作者3认为作用腰椎间盘的不良应力可能使腰椎间盘内细胞代谢发生变化，从而诱导 TNF- 的产生，腰椎间盘的慢性机械损伤和其它生物生化物质的介导也可能是诱发其产生的原因。Ares 等54指出炎性细胞因子可能是通过自分泌或旁分泌方式作用于椎间盘细胞，改变其生物化学行为，产生病理效应，从而参与椎间盘的退变。退变的椎间盘细胞在生物化学上发生了改变，从而产生各种炎性细胞因子，引起椎间盘突出，椎间盘突出后，反过来刺激各种炎性细胞因子产生。二者相互促进，互为因果。张宏天等5认为由于局部免疫复合物的持续存在，吸引巨噬细胞参与免疫应答过程中分泌了 TNF- 等生物活性物质。在 LDH 患者之神经根周围，TNF-主要由吞噬细胞释放后，具有促进浸润而引起炎症和组织损伤，诱导神经痛觉过敏作用，在盘源性腰腿痛神经根痛发生中发挥重要作用。TNF- 导致 LDH 腰腿痛的可能机制有：TNF- 为直接造成神经根损伤的细胞因子6，当其出现在神经根周围时，可直接刺激神经根致痛。椎间盘突出部位产生的 TNF- 能增加髓核组织中前列腺素 E2（PGE2） ，而后者能直接刺激神经根引起坐骨神经痛 7。TNF- 可促进胶原酶和蛋白酶水解酶的产生，从而降解胶原分子，使纤维环出现缝隙和断裂，改变生物学状态，造成组织损伤，从而引起腰腿痛8。TNF- 活化单核巨噬细胞，它们在提高杀伤活性的同时，释放 NO、IL-1 等炎性介质9 。而 TNF-、NO 、IL-1 等本身就具有增高伤害感受器痛敏性的作用，它们相互协同，在 LDH腰腿痛中发挥重要作用。 目前，关于 LDH 外周血 TNF- 研究尚未见系统报道。大量研究表明突出髓核局部的 TNF- 有高水平表达，且可诱导无菌性炎症反应，这便导致大量吞噬细胞聚集，不断产生 TNF-；加之 TNF-6之正反馈作用，于是形成恶性循环，导致局部 TNF- 水平更高。另外，组织学研究发现，LDH 突出髓核部位有新生血管长入，而TNF- 有引起血栓形成和血管通透性增加10 ，从而导致血管屏障破坏的作用。致使髓核局部 TNF- 可部分入血，引起外周血 TNF- 水平增高。所以外周血 TNF- 水平变化可间接反映出突出髓核局部炎症情况。本实验通过 LDH 组与正常组外周血 TNF- 水平检测结果比较显示：LDH 组比正常组增高，且具有显著性差异。与大量突出髓核局部 TNF- 高水平表达的研究结果一致，间接支持了LDH 的炎症机制学说。这为临床诊断 LDH 提供了一种检测指标。也为临床上防治椎间盘突出开辟了一条新途径，最近已有学者进行细胞因子的转基因疗法防治椎间盘退变的实验研究，并取得了初步成绩11。 有作者8推测 LDH 患者 TNF- 表达水平与类型有关。Takanasin12研究指出，破裂型与未破裂型 LDH 的炎性细胞和炎性介质存在差异性。本实验通过膨突组、脱出组、正常对照组外周血 TNF- 检测结果两两比较提示：膨突型、脱出型 LDH 患者的外周血 TNF- 水平较正常对照组增高，脱出型增高明显，且各组间差异显著，结果与上述研究相一致。脱出型增高明显可能系外层纤维环破裂所引起的炎症反应更重，从而突出髓核局部入血的 TNF- 更多所致。 总之， TNF- 是导致 LDH 一个重要致炎因子，它在突出局部髓核高水平表达时，通过破坏的血管屏障入血，引起外周血 TNF- 水7平升高，且在不同影像学类型 LDH 表达有差异。临床上可借助外周血 TNF- 水平的检测，为 LDH 的病情变化、预后判断、临床治疗提供理论依据。 参考文献 1.Myers RR, The biophysical and biochemical aspects of intervertebrall clisc herniation and degeneration. Ann R Col Surg Engl ,1962, 31:91-114 2.王民, 李新权. 突出腰椎间盘组织中 NO、TNF-2、IL-1B、IL-6的表达及其意义. 西安交通大学学报，2003, 24(6): 605-607 4.Ares MP, Bengt Kallin, Per Eriksson, et al. Oxidized LDL induces tranccription factor activoctor protein-1 but inhibits ativation of nuclear factor-KB in human vascular somooth muscle cellsJ. Arterioscler Tromb vasc biot, 1995, 15(10): 1574-1590. 3.赵太茂，刘淼 ，宋红星,等.突出椎间盘组织中 TNF 与 IL-1的表达及意义.中国脊柱脊髓杂志，1999,9 （1）:17-19 5.张天宏 . 突出的椎间盘组织中巨噬细胞浸润及免疫复合物表达. 中国矫形外科杂志,2004, 12(1, 2):88-89 6.Aoki Y, Ryclevik B, Larson K, et al. Local applicationof disc-ralated cytokines on spinal rerve roots. Paper presented at: Annual Meeting of the International society for the study of the lumbar spine; 2000, Adelaide, Australia 87.Kang JD, Stefanovic-Racic M, Mcintyre LA, et al. Toward a biochemical understanding of human interve