1产超广谱 -内酰胺酶（ESBLS）革兰阴性杆菌的耐药性研究【关键词】 耐药性分析【摘要】 目的 了解临床产超广谱 -内酰胺酶（ESBLS ）革兰阴性杆菌的耐药情况，以利于对 ESBLS 的监测和治疗。方法 用NCCLS 推荐的初筛和确证试验对临床分离的 216 株革兰阴性杆菌进行 ESBLS 鉴定，并用 K-B 法对检出的 ESBLS 阳性菌株进行 9 种抗生素的药敏试验，作耐药性分析;调查 ESBLS 阳性菌株产生的重点科室。结果 共检出 ESBLS 阳性菌株 82 株，总检出率 38.0%;亚胺配能、头孢西丁、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦的敏感率分别为 99%、90%、86%、98%、86%。结论 亚胺配能、头孢西丁、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦是对 ESBLS 临床治疗有效的药物;新生儿病房、血液科病房、肾病病房、外科 ICU 是ESBLS 产生的重点科室。 关键词 超广谱 -内酰胺酶 革兰阴性杆菌 耐药性分析随着临床头孢菌素类超广谱 -内酰胺酶类抗生素的广泛使用，使得产超广谱 -内酰胺酶（ESBLS）菌株检出率逐年增多，给临床抗生素的使用造成很大困难，为更好地控制产 ESBLS 菌株传播，指2导临床用药，我们对 2002 年 1 月2003 年 12 月本院临床标本中分离的 216 株大肠埃希菌，克雷伯菌产 ESBLS 情况及耐药性进行了研究。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验菌株 实验所用菌株来自本院 2002 年 1 月2003年 12 月临床标本中分离的标本，其中大肠埃希菌 125 株，肺炎克雷伯菌 70 株，产酸克雷伯菌 21 株，质控菌株为标准菌株大肠埃希菌 ATCC25922，肺炎克雷伯菌 ATCC700603。1.1.2 药敏纸片 头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星、阿米卡星、亚胺配能、头孢西丁、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林 /舒巴坦、复方新诺明（上海伊华公司）头孢他啶/棒酸、头孢噻肟 /棒酸（英国 Oxoid 公司） ，M-H 琼脂干粉购自英国 Oxoid 公司，培养基由本室自配。1.1.3 菌株鉴定 法国生物梅里埃 API 鉴定系统鉴定。1.2 方法31.2.1 初筛试验 1 按 NCCLS 初筛标准，在纸片法药敏试验中，只要符合下列任何一项指标:头孢他啶22mm，头孢曲松25mm，头孢噻肟27mm，氨曲南27mm，即为产 ESBLS 可疑菌株。1.2.2 确诊试验 1 按 NCCLS 纸片法确诊试验，将初筛可疑菌株用头孢他啶、头孢他啶/棒酸及头孢噻肟、头孢噻肟 /棒酸做纸片法药敏试验，经摄氏 35 度温育 1618h，观察结果，含棒酸和不含棒酸的抗生素纸片间的抑菌直径相差5mm ，可证实产ESBLS。1.2.3 药敏试验 用纸片琼脂扩散法（ K-B 法）检测确证阳性菌株对 9 种抗生素的药敏情况。2 结果2.1 初筛试验 筛选出可疑菌株 128 株，其中大肠埃希菌 72株，肺炎克雷伯菌 43 株，产酸克雷伯菌 13 株，质控结果为:肺炎克雷伯菌 ATCC700603，头孢他啶 15mm，头孢曲松 21mm，头孢噻肟 20mm，氨曲南 16mm;大肠埃希菌 ATCC25922，头孢他啶30mm，头孢曲松 32mm，头孢噻肟 32mm，氨曲南 31mm，质4控均在合格范围内。2.2 确诊实验 检出产 ESBLS 菌株共 82 株，其中大肠埃希菌为 42 株，占待检菌 33.5%，占初筛阳性菌 58.0%;肺炎克雷伯菌 32株，占待检菌的 45.7%，占初筛阳性菌的 74.4%;产酸克雷伯菌 8 株，占待检菌的 38.1%，占初筛阳性菌的 61.5%。2.3 9 种抗生素对 82 株产 ESBLS 菌的耐药性分析 见表 1。表 1 9 种抗生素对 82 株产 ESBLS 菌药敏结果 （略）2.4 82 株产 ESBLS 菌株的临床科室分布 儿科（主要是新生儿病房）13 株，血液科 15 株，肾病科 16 株，外科（主要是ICU）23 株，内科 6 株，妇产科 2 株，骨科 3 株，传染科 4 株。3 讨论我院产 ESBLS 革兰阴性杆菌主要见于大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌，ESBLS 的总检出率为 38.0%，上述三种菌的检出率分别为 33.5%、45.7%、38.1%，这比有的报道要高 2 ，又比有的报道低 3 ，其原因可能与统计的范围大小、地区用药差异及病种不同有关，但本院 ESBLS 的检出率已经较高，应引起5足够重视，注意做好 ESBLS 的检出工作，当怀疑产 ESBLS 时，不管体外是否敏感，应避免使用青霉素类、头孢类及氨曲南类抗生素 4 。根据 NCCLS 初筛标准得出的 128 株可疑菌株，经确证阳性菌株为 82 株，后者占前者的 64.1%，其中上述三种细菌的百分比分别为 58%、74.4%、61.5%，可见 ESBLS 的检出光靠初筛试验还不够，还需试验证实，而且为提高检出率，应同时应用两对药物 5 。从结果（四）分析，本院产 ESBLS 的重点科室为儿科（主要是新生儿病房） 、血液科、肾病科、外科 ICU，这与上述科室病人较多使用三代头孢菌素以及病人体质较差，易诱导产生 ESBLS 菌株有关 6 。9 种抗生素对 82 株产 ESBLS 的药敏结果显示:亚胺配能、头孢西丁、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦耐药率较低，尤其是亚胺配能，耐药率为 1%是治疗 ESBLS 的首选药物，这与相关报道一致 7 。哌拉西林/ 他唑巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸均为 -内酰胺/酶抑制剂类抗生素，前两者药物敏感率明显大于后6者，是因为哌拉西林和头孢哌酮的抑菌能力大于阿莫西林，或者由于菌株大量产酶，药敏纸片中的酶抑制剂不够，所以适当提高酶抑制剂的含量，可增强其抑菌活性。 参考文献1 National cornmittee for clinical Laboratory standards.Performance standards for antimicrobial testing ninth information supplement.NCCLS，1999，36.2 马越，李景云，张新妹.2002 年临床常见细菌耐药性监测.中华检验医学杂志，2004，27:38-45.3 项明洁，彭奕冰，刘明 .肺炎克雷伯菌超广谱 -内酰胺酶的耐药性问题及检测.中华医学检验杂志，1999，22:316-317.4 倪语星.质粒介导的超广谱 -内酰胺酶检测.中华医学检验杂志，2004，22:23-25.5 王辉，高屹，陈民均 .简介美国 NCCLS 药敏试验法规（1999 年 1 月版）的变动部分.中华医学检验杂志，1999，22:318-319.76 陶云珍，诸丽娟，丁云芳.儿童患者感染产 ESBLS 细菌的临床分布.临床检验杂志，2003 ，21:85.7 祁莹，李开伦，蒋火刚 .产超广谱 -内酰胺酶细菌的耐药性研究.中华检验医学杂志，2003 ，26:712.