艾滋病检测实验室质量管理,依据,中华人民共和国计量法中华人民共和国主席令第28号,颁布时间：1985-9-6；发文单位：国家计量局 ,目的：保障国家计量单位制的统一和量值的准确可靠；在中华人民共和国境内，建立计量基准器具，计量标准器具，进行计量检定；国家采用国际单位制 ，国务院计量行政部门对全国计量工作实施统一监督管理；县级以上地方人民政府计量行政部门对本行政区域内的计量工作实施监督管理。 （第二章、第九条、 县级以上人民政府计量行政部门对社会公用计量标准器具，部门和企业、事业单位使用的最高计量标准器具，以及用于贸易结算、安全防护、医疗卫生、环境监测方面的列入强制检定目录的工作计量器具，实行强制检定。未按照规定申请检定或者检定不合格的，不得使用。实行强制检定的工作计量器具的目录和管理办法，由国务院制定。）艾滋病防治条例中华人民共和国国务院令第 457 号 ，自2006年3月1日起施行第六章 法律责任：造成艾滋病传播、流行或者其他严重后果的，对负有责任的主管人员依法给予行政处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 临床用血检测、拒绝病人救治，未执行操作规程和消毒管理制度，发生艾滋病医院感染或者医源性感染的 ，全国艾滋病检测工作管理办法2006年6月12日，卫生部以卫疾控发2006218号印发全国艾滋病检测工作管理办法。该办法分总则、艾滋病检测实验室的设置、艾滋病检测实验室的验收、艾滋病检测工作要求、艾滋病检测工作中的生物安全、实验室质量管理、监督管理、附则8章35条，自发布之日起施行。 全国艾滋病检测技术规范(2009修订版） 检测和校准实验室能力的通用要求(ISO/IEC17025:2005 ),建立质量管理体系的目的,通过建立与运行质量管理体系，使实验室的检验活动保质、保量、安全、迅速、准确、有效、科学、公正，使实验室建设符合规范和指南的要求,为HIV感染者和AIDS患者提供准确的诊断依据,HIV抗体血清学检验的 质量保证与质量控制,建立运行良好的质量管理体系是保证高质量艾滋病检测实验室工作的重要因素。主要内容包括HIV实验室检测的质量保证(quality assurance，QA)，质量控制(quality control，QC)和质量评价(external quality assessment，EQA)。 质量保证、质量控制和质量评价是HIV测定的重要部分。,一质量保证(QA),(一)定义 质量保证是指从接收检验标本起，到实验室发出报告止，为确保实验室最终报告结果的正确性所进行的全过程，包括采取的各种行政和技术上的措施和方法。,质量保证是确保实验结果质量的基本条件，其实施程度直接影响试验结果和最后报告的每个参数。质量保证取决于良好的质量控制程序，并经良好的质量评价程序加艾滋病检测质量管理工作指南以鉴定。因此，要求所有的实验室工作人员有责任时刻注意解决影响实验结果的每个环节上可能出现的问题。,(二)实验室质量保证,1.行政支持应将艾滋病检测实验室的建设、发展和质量管理纳入地方卫生行政规划，保证实验室负责人和主要技术人员队伍的稳定，保证实验室建筑和设备需要，给予充足的经费支持，并进行经常性监督检查。 2.人员培训检测技术人员需经过上岗培训和在岗持续培训。上岗培训内容至少应包括：艾滋病检测相关基础知识，艾滋病相关检测技术及管理要求，实验操作，质量保证与质量控制，生物安全。要求掌握相关专业知识和技能，能独立熟练地操作，并经考核合格，持证上岗。在岗持续培训指在工作中要根据需要接受复培训，确证实验室技术人员每年至少1次，筛查实验室技术人员至少每2年1次，除接受检测基本培训内容外，要求了解相关技术、质控及安全要求的新进展。,(二)实验室质量保证,至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。实验室在使用新方法前，须对技术人员进行培训，获得资格后方可开展相应工作。检测人员应分为检验人、复核人、签发人。复核人、签发人应具备对检测过程进行分析和解决问题的能力。3. 环境条件艾滋病确证实验室及筛查实验室的设置及其建筑、设施、设备必须符合全国艾滋病检测工作管理办法的要求。实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。,(二)实验室质量保证,4.样品的采集、运送和处理用于艾滋病病毒（HIV）检测的血清、血浆和全血样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、CD4+/CD8+T淋巴细胞测定。艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。常用的血液样品的采集和处理方法如下：(1)、血清样品采集和处理,(二)实验室质量保证,用一次性注射器（或真空采血管）抽取5ml静脉血，室温下自然放置12h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清放在螺旋管备用。塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性,最好使用真空采血管。有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果,(二)实验室质量保证,溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），在洗涤过程中往往难以完全洗脱，会释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性 。样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。,(二)实验室质量保证,(2)、抗凝血样品采集和处理CD4+/CD8+T淋巴细胞测定样品采集静脉血，将血液注入一个事先加入适当抗凝剂的试管（有条件者最好用真空试管）。采血后立即握住试管两端，颠倒混匀数次，将血液与抗凝剂混匀，以防止凝固。用K3EDTA抗凝，收集样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理。核酸定性/定量检测用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞吸出血浆放在螺旋管备用。,(二)实验室质量保证,加抗凝剂的标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作,应戴双层手套。,(二)实验室质量保证,(3)、样品的保存用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8。用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。,(二)实验室质量保证,(4)、样品的运送 应符合生物安全要求；要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。应采用WHO提出的三级包装系统A、 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。,(二)实验室质量保证,B、 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。C、 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。,(二)实验室质量保证,血清和血浆样品应在28条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下1823运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。 运送感染性材料必须有记录。5 .样品的接收含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。,(二)实验室质量保证,核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。接收样品时应填写样品接收单。,(二)实验室质量保证,6 .检验方法和试剂盒的选择应使用经国家食品药品监督管理局注册批准的试剂。应选择敏感性高、特异性好的试剂。各实验室更换试剂批号时，应进行平行试验，即新批号试剂在测定质控品（已知结果）时能够获得与原试剂相同的结果。所有试剂盒须严格按要求条件保存。试剂盒拆封时，要记录拆封时间，所有试剂严格控制在有效期内使用。,(二)实验室质量保证,7 . 试剂质量评估一、被评估试剂 HIV抗体酶联诊断试剂，如：为吉比爱，1个产品、1个批号。 二、血清盘构成 酶联试剂评估血清盘：由20份已知弱阳性、20份已知阴性结果的样品构成。 三、检测结果 本次试剂评估共获得有效检测数据40个。 四、评估结果 评估结果的分析及统计处理测试后的检测结果可按下列指标统计处理：敏感性：真阳性/（真阳性+假阴性）100%特异性：真阴性/（真阴性+假阳性）100%假阳性率：假阳性/（真阴性+假阳性）100%假阴性率：假阴性/（真阳性+假阴性）100%,(二)实验室质量保证,8 .设备维护与校准配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器（仪）、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。 实验室应设立常用仪器的维护及校准制度，以保证检测工作正常运转。必须经国家法定部门定期（每年至少1次）校准的仪器至少包括：酶标仪，加样器，温度计，高压灭菌器 。其他精密仪器及出具实验结果的仪器，如洗板机、生物安全柜，全自动蛋白印迹仪，CD4细胞测定仪、病毒载量测定仪、耐药检测仪、离心机等也必须定期（每年1次）校准，可请生产厂家校准。,（1）、ELISA洗板机与酶标仪是检测HIV的最常用和最重要的仪器，应该设立预防性的维护制度，以保证仪器的正常工作。推荐方法如下：每个工作日：核对酶标仪滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。 每周：清洗仪器表面，保护光学零件，不沾灰尘。,(二)实验室质量保证,每月：洗涤时检查各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求。这是保证各孔洗涤均衡一致的前提。每年：检查、清洗滤光片，如果出现破裂或霉点须更换；根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。对滤光片的所用波长吸光度的精密度进行校验，测定20次，计算精密度。精密度应该控制在厂家说明书中所规定的范围(计量技术监督局强检)。,