网址：www.jxdyf.com 第 1 页，共 9 页银屑病患者体外 T 淋巴细胞对白介素 8 的化学趋化功能银屑病患者体外 T 淋巴细胞对白介素 8 的化学趋化功能中华皮肤科杂志 1998 年第 2 期第 31 卷 论著作者：郑敏孙国均蔡绥勍单位：310009 杭州，浙江医科大学附属第二医院皮肤科 (郑敏孙国均蔡绥?) ；德国基尔大学皮肤病医院(Ulrich Mrowietz)关键词：银屑病；皮炎；特应性；趋化性；白细胞；白细胞介素 8【摘要】目的探讨银屑病外周血循环 T 细胞体外化学趋化功能及其在银屑病发病机理中的作用。方法运用 48 孔微型化学趋化装置检测了 45 例寻常型银屑病患者、21 例异位性皮炎患者和 20 例正常人的纯化T 细胞对重组人白介素 8(IL-8)的化学趋化反应，同时用单克隆抗体荧光免疫法在流式细胞仪上测定患者和正常人的纯化 T 细胞表面的 HLA-DR 和 IL-2R 等激活表型以及用 ELISA 测定患者和正常人血清中 IL-8 的水平。结果严重银屑病和异位性皮炎患者组的循环 T 细胞对 IL-8 的体外化学趋化反应明显低于正常人对照组，而轻型银屑病患者组的循环 T 细胞与正常人无异；严重银屑病、异位性皮炎组患者 T 细胞表面 HLA-DR及 IL-2R 激活表型表达较正常人对照组显著增加；银屑病、异位性皮炎患者血清 IL-8 水平明显高于正常人对照组。结论银屑病患者循环 T 细胞在体外对 IL-8 的化学趋化功能明显受损，其原因可能与患者体内T 细胞过度激活以及血清 IL-8 水平过高有关。T-lymphocyte Chemotaxis to IL-8 in vitro in Patients with PsoriasisZheng Min, Sun Guojun, Cai Suiqing, et al. Department of Dermatology, The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Medical University, Hangzhou 310009【Abstract】ObjectiveTo study the chemotactic activity of T-lymphocytes from patients with psoriasis to proinflammatory cytokines in vitro and its role in the pathogenesis in psoriasis.MethodsA 48 microchemotaxis chamber was employed to determine T-cell chemotactic activity. In addition, the expression of T cell activation markers such as HLA-DR and interleukin 2 receptor was analysed with fluorescence activated cell sorting technique and serum IL-8 level was measured with ELISA. 45 patients with psoriasis (23 patients with severe psoriasis and 22 patients with mild psoriasis) and 21 patients with atopic dermatitis were investigated, and 20 healthy controls were tested equally.ResultsT-cell chemotactic responses were significantly decreased in patients with severe psoriasis and atopic dermatitis as compared to healthy controls. Increased expression of activation markers such as HLA-DR and interleukin 2 receptor was demonstrated in circulating T cells from severe psoriatic patients and atopic dermatitis patients in comparison to healthy controls. Serum IL-8 level was significantly increased in patients with psoriasis and atopic dermatitis.ConclusionThe in vitro chemotactic response of circulating T cells in patients with severe psoriasis to IL-8 is significantly impaired, furthermore, the in vivo activation state of T lymphocytes in these patients and increased level of serum IL-8 seem to be associated to the decreased in vitro T-cell chemotactic response. 网址：www.jxdyf.com 第 2 页，共 9 页【Key words】 PsoriasisDermatitis, atopicChemotaxis, leukocyteInterleukin-8一般认为银屑病由多因素引起发病，免疫功能异常是其重要方面。为了探讨银屑病外周血循环 T 细胞体外化学趋化功能及其在银屑病发生发展中的地位和作用，我们检测了银屑病患者和正常人 T 淋巴细胞对重组人白介素 8(IL-8)的化学趋化功能，同时用单克隆抗体荧光免疫法在流式细胞仪上测定患者和正常人 T 细胞HLA-DR 和 IL-2R 等激活表型以及用 ELISA 测定患者和正常人血清 IL-8 水平。病例和方法(一)病例选择：45 例寻常型银屑病患者均具有典型皮损并经病理证实，为门诊或住院患者。其中男 34 例，女 11 例，年龄 2476 岁，平均 35 岁。对所有患者的皮损进行 PASI 评分( 按照 Fredriksson 和 Pettersson 标准)。根据患者 PASI 评分又分为两组：一组 23 例为严重银屑病患者组，患者的 PASI 分数均在 20 分以上；另表 1银屑病患者及正常人 T 细胞对 IL-8 的化学趋化功能测定(s)分组例数IL-8 浓度(mol/L)10-1210-1110-1010-910-8正常人对照组202.340.762.660.672.761.112.370.81 网址：www.jxdyf.com 第 3 页，共 9 页1.920.71严重银屑病组231.670.58(3.27)*1.570.53(5.95)*1.580.67(4.28)*1.400.82(3.89)?1.270.38(3.81)轻型银屑病组221.960.61(1.80)2.161.17(1.68)2.230.75(1.83)1.860.84(1.99)1.540.61(1.87)异位性皮炎组211.340.45(5.16)?1.420.60(6.24)?1.410.46(5.13)?1.280.41(5.48)?1.190.32(4.28)? 网址：www.jxdyf.com 第 4 页，共 9 页括号内数字为与正常人组比较 t 值，*P0.05，*P0.01一组 22 例为轻度银屑病患者组，他们均属稳定期或好转期，其 PASI 评分均不到 10 分。所有患者检测前 1个月内未行任何治疗。对照组为 20 例健康人，21 例异位性皮炎患者(诊断按 Hanifin 和 Rajka 标准)的年龄、性别与银屑病患者均无统计学差异。(二)纯化 T 细胞：肝素化静脉血经 Ficoll-Hypaque 密度梯度离心后调整细胞浓度为 110/ml，混悬于RPMI-1640 培养液中。经反向淘选离心法(counterflow centrifuge elutriation, CCE)后得到富含淋巴细胞的悬液，经 Percoll 密度梯度离心和尼龙毛柱法得纯度为 93%以上 CD3 阳性细胞1 。(三)T 细胞化学趋化功能测定：用 48 孔微型化学趋化室装置(Costar，德国)来检验 T 细胞化学趋化功能。将重组人类 IL-8 稀释在含有 0.5%胎牛血清的培养液中。无刺激物的培养液作为自发趋化对照。趋化装置的下室加入 25l IL-8(浓度为 10-810-12mol/L)或加对照。装置的上室加入 50l 的细胞悬液。两室之间有一层孔径为 5m 的涂有小鼠型胶原的化学趋化膜相隔。将趋化装置放在 37，5% CO的含有湿盒的孵箱中孵育 2 小时。孵育结束时，化学趋化膜经固定和苏木素染色后，用计算机控制的密度仪(CD60 Desage，德国)定量测定密度。由化学趋化指数( 经 IL-8 刺激后引起 T 细胞化学趋化后移行的细胞密度/无刺激情况下T 细胞自发随机移行的细胞密度) 来表示细胞的化学表 2银屑病患者及正常人 T 细胞 HLA-DR 和 IL-2R 表达(%)分组例数HLA-DRIL-2Rst 值*P 值st 值P 值正 常 人18 网址：www.jxdyf.com 第 5 页，共 9 页6.843.07-2.511.35-严重银屑病组2011.783.714.030.014.751.575.120.01轻型银屑病组198.942.732.480.053.891.562.130.05 网址：www.jxdyf.com 第 6 页，共 9 页异位性皮炎组1812.274.015.210.014.351.783.820.01*与正常人组比较表 3银屑病患者及正常人血清 IL-8 水平检测结果(pg/ml)分组例数st 值P 值正常人组2062.6226.29-严重银屑病组23 网址：www.jxdyf.com 第 7 页，共 9 页164.5471.323.910.01轻型银屑病组22114.3255.342.130.05异位性皮炎组21171.4175.934.770