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果汁中 VC 含量的测定(HPLC 法)1. 原理:果汁中的 VC 在 ODS 柱上可以得到分离,并且在 206NM 波长下,VC 有吸收,本方法对于测定果汁中添加 VC 的样品有较好的结果。2. 试剂 2.1 溶剂:水,过滤后的二次蒸馏水2.2 流动相:0.01M HCI 溶液2.3 维生素 C 标准品:纯度 95%2.4 维生素 C 标准溶液 :称取 VC 标准品 0.25g,精确至 0.0001g,用流动相溶解,转移,并定容标准品于 50ml 容量瓶中,混匀,作为贮备液。2.5 VC 标准工作液:准确吸取 5.0ml 贮备液于 50ml 容量瓶中,用流动相定容,即可得到10 倍的稀释液,其浓度为 0.5mg/ml。2.6 VC 标准液的保存期不应超过半个月。3. 仪器3.1 高效液相色谱仪:单元泵,可变波长紫外检测器,数据分析系统。3.2 色谱柱: 150mm*4.6mm ,5ul 颗粒的键合 ODS 柱。3.3 进样器:25ul 微量进样针3.4 色谱条件: 流动相:0.01M HCI 溶液流量 :1.0ml/min柱温 :40检测波长:206nm保留时间:3.2min以上操作条件是典型条件,可根据仪器情况和分离情况加以适当的调整,以期获得最佳定量效果。4. 测定步骤4.1 样品的制备:称取浓缩汁样品 4.0g(清汁 10ml 或浓缩浊汁 6ml 左右), 精确至 0.01g,用流动相溶解于 50ml 容量瓶中,并定容至刻度,摇匀,用带有 0.45um 水系滤膜的过滤器过滤样品至样品瓶中,作为试样溶液。4.2 在上述操作条件下,等待仪器运行稳定后,按照标准溶液、试样溶液的顺序交叉进样进行测定。4.3 定量计算以现配置的 VC 标准工作液做标准曲线,同时注射 5 针,从而确定响应系数,对于样品的面积积分结果采用外标法即可得到样品中 VC 的量。4.4 Vc(mg/100g )按下式计算:AiXCsXVX100Vc(mg/100g)=-AsXm式中,Ai、As-分别为样品与标样中 Vc 的峰面积;Cs-标样中 Vc 和浓度,mg/ml;V-标样定容体积,ml ;m-称取的试样量,g。5. 允许差两次平行测定结果之差,相对偏差10%。
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