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血型鉴定与交叉合血,王炼红 解读,血型的定义及分类,血型是指各种血液成分的遗传多态性标记。血型抗原不仅存在于红细胞上,也存在于白细胞和血小板上,还存在于各种组织细胞、多数体液中,甚至不同个体的血清蛋白间也存在型别的差异。 血型系统主要分类: 1.红细胞血型系统,其中又分为ABO血型系统、Rh血型系统、MNS血型系统、P血型系统、Kell血型系统、Kidd血型系统、Duffy血型系统 2.人类主要组织相容性抗原系统(HLA) 3.血小板血型系统(PHA) 4.血清型。血清型按蛋白质可分为免疫球蛋白、血清酶、血清蛋白、补体等几大类。,血型鉴定,血型鉴定主要用已知特异性的抗体鉴定未知的红细胞抗原,或辅助用已知抗原的一组红细胞(谱红细胞)鉴定未知血清的抗体,结合相关理论基础综合判断血型。血型鉴定以抗原、抗体免疫检测技术为基础,常用的方法有盐水介质法、微柱凝胶卡片法、聚凝胺法,疑难血型还可用聚合酶链反应(PCR)技术直接分析相关血型的基因。,1.1 ABO血型鉴定 实验原理: 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原,将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应A抗原或/和B抗原;所谓反定型,是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。,试剂和材料: 1) 抗-A(B型血)、抗-B(A型血)及抗-A+B(O型血)分型血清,购置商品试剂。 2) 5A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3) 受检者血清。 4) 受检者5红细胞盐水悬液。,ABO血型鉴定的检测方法,1.试管法 (1)取洁净小试管(内径10mm60mm)3支,分别标明抗-A、抗-B 、抗-A+B,用滴管分别加抗-A、抗-B 、抗-A+B分型血清各1滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5红细胞盐水悬液1滴,混和。 ( 2)另取洁净小试管(内径10mm60mm)3支,分别标明A、B、O细胞,用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部,再以滴管分别加入5 A、B、O试剂红细胞盐水悬液1滴,混和。 (3)立即以1000rmin离心lmin. (4)将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。,4 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。 3 红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。 2 红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。 1 肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞 土 镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞 MF 混合凝集外观(mixedfield)是指镜下可见少 数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。 一 表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。,5)凝集强度判断标准,2.玻片法 (1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明抗-A、抗-B、抗A+B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B、抗-A+B分型血清1滴于标明的方格内,再各加受检者2红细胞悬液1滴,混和。 ( 2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明A细胞、B细胞和O细胞,用滴管各加受检者血清1滴,再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 ( 3)将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与红细胞充分混匀,连续约15min,以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。玻片作试验时,也应用低倍镜观察结果。,4)结果判定 ABO血型正反定型结果 注释:十为凝集;一为不凝集。 分型血清+受检者RBC 受检者血型 受检者血清+试剂RBC 抗-A 抗-B 抗-A十B A细胞 B细胞 O细胞 十 十 A 十 十 十 B 十 一 O 十 十 十 十 十 AB ,5)注意事项 (1)分型血清质量性能要符合要求,用毕后应放置冰箱保存,以免细菌污染。 (2) 试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和,用生理盐水洗涤3次,以去除存在于红细胞表面的血清中成分及可溶性抗原。 (3)试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防止溶血。 (4) 操作方法应按规定,一般应先加血清,然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏加血清。,(5) 按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4为最强,但为了防止冷凝集现象的干扰,一般仍在室温(20-24)内进行试验,37可使反应减弱。 (6) 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。 (7) 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。 (8) 判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误。,正反定型结果不一致的原因 主要有以下三个方面: 一、技术性方面问题 二、红细胞方面的问题 三、血清方面的问题,常见情况如下: 1)分型血清效价太低、亲和力不强。若抗-A血清效价不高,可将A亚型误定为O型,AB型误定为B型。 2)红细胞悬液过浓或过淡,抗原抗体比例不适当,使反应不明显,误判为阴性反应。 3)受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型、新生儿)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤)以及类B或cisAB等。 4)受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症、高浓度的纤维蛋白原),或实验时温度过高,常引起红细胞呈缗钱状排列。,5)受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B抗体,如丙种球蛋白缺乏症。6)各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集。部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体.7)由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集,往往是正反定型不符的原因。 8)血清中有意外抗体,如自身抗-I,常引起干扰。 9)老年人血清中抗体水平大幅度下降。,正反定型结果不一致的解决办法 如发现ABO正反定型结果不一致,先要重复做试验1次。严格执行操作规程,使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果,就可解决明显的问题,对一些疑难问题必须进一步按以下步骤进行研究。,检查步骤 : 1)另从受检者采取l份新鲜血液标本,这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。 2)将红细胞洗涤数次,配成5盐水细胞悬液,用抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1及抗H做试验可以得到其它有用的信息。 3)对受检红细胞作直接抗球蛋白试验,如结果呈阳性,表示红细胞已被抗体致敏。 4)用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗-I,用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。,5)如果试验结果未见凝集,应将试验至少在室温和4放置30min,用显微镜检查核实。 6)若疑为A抗原或B抗原减弱,将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。 7)若试验结果红细胞呈缗钱状排列,加等渗盐水l滴,混和,往往可使缗钱现象消失。应注意,不要先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞作试验,以免使血清中抗体被稀释。,8)若受检者为A型血而疑为有类B抗原时,可用下列方法进行鉴别: (1)观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度,与抗-A的反应要比与抗-B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。 (2)用受检者红细胞与自身血清作试验,血清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。 (3)检查唾液中是否有A、B物质,如果是分泌型,可检出A物质而无B物质。 (4)核对患者的诊断,类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。,9)如发现多凝集现象,应考虑由遗传产生的Cad抗原活性;被细菌酶激活的T或TK受体;或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点: 能被人和许多家兔的血清凝集,不管有无相应的同种抗体。 不被脐带血清凝集。 通常不与自身的血清凝集。,原理: 用5种抗Rh分型血清抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e 来检测红细胞抗原.在Rh血型系统中D抗原的抗原性最强,出现的频率最高,临床上影响最大,故临床上一般只鉴定D抗原。常用抗-D 血清来测定红细胞,凡带有D抗原者,称为Rh阳性,不带有D抗原者,称为Rh阴性。试剂:抗D血清(购买商品试剂)。操作: 试管法:取RhD(IgM)试剂50uL和5%受检者红细胞盐水悬液50uL,加入小试管内,摇匀,900g离心15秒,判定结果。同时做阴阳性对照。凝集(或溶血)反应为Rh阳性,无凝集(或溶血)反应,仅表明实验的红细胞缺少正常强度的D抗原,再用不同批号抗D血清做重复试验,如无凝集(或溶血)反应,不能轻率地报告Rh阴性,应做Du鉴定。,1.2 Rh血型鉴定,注意事项: (1)Du 型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗体,所以患者为Du 型应作Rh阴性论,应输注Rh阴性血液;供血者为Du 型,应作Rh阳性论,不应当输给Rh阴性患者。 (2)Du 型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可以产生新生儿溶血病。 (3)本实验不适合于自身凝集的样本的检查,因自身凝集的样本容易引起假阳性。 (4)对于检测为弱阳性和阴性的样本,应采用抗人球蛋白实验检测弱D抗原或不完全D抗原是否存在,同时做进一步的确认实验。,交叉配血试验 交叉配血试验又称不配合性试验,是确保患者安全输血必不可少的试验,完整操作规程应包括: 1.查阅受血者以前的血型检查记录(包括Rh血型); 2.对收到的受血者样本做ABO正反定型和Rh定型; 3.选择合格的血液作交叉配血试验。,交叉配血的方法: (1)盐水介质配血法 (2)酶介质配血法 (3)抗人球蛋白配血法 (4)凝聚胺介质配血法 (5)微柱凝胶卡配血法,
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