第 三 军 医 大 学硕 士 学 位 论 文OX-LDL 对 内 毒 素 作 用 的 影 响 及 其 机 制姓 名 ： 洪 愉申 请 学 位 级 别 ： 硕 士专 业 ： 临 床 检 验 诊 断 学指 导 教 师 ： 邹 全 明20031101第三军医大学硕士学位论文 对 内 毒 素 作 用 的 影 响 及 其 机 制 摘 要现 有 研 究 表 明 ， 内 毒 素 血 症 是 导 致 严 重 感 染 、 创 伤 患 者 发 生 全 身 性 炎 症 反 应 综 合征 (SIRS)及 多 器 官 功 能 障 碍 综 合 征 (MODS)等病理生理过程的重要原因之一，因此，深入 研 究 内 毒 素 血 症 的 致 病 机 制 有 重 要 的 临 床 意 义 。 有 体 外 研 究 报 道 ， 氧 化 型 低 密 度 脂蛋 白 (OX-LDL)能 调 节 细 胞 对 内 毒 素 的 反 应 性 ， 但 内 毒 素 血 症 时 体 内 OX-LDL 生 成 情况 如 何 、 OX-LDL 能 否 调 节 机 体 对 LPS 的 反 应 性 、 其 调 节 机 制 怎 样 等 目 前 尚 未 见 有 报道。为此，本实验从以下三个方面进行研究：1 观 察 内 毒 素 血 症 时 小 鼠 血 浆 OX-LDL水 平 的 变 化 ； 2 在 体 观 察 OX-LDL 预 处 理 对 小 鼠 LPS 反 应 性 的 影 响 ； 3 体 外 观 察OX-LDL 预 处 理 对 肺 泡 巨 噬 细 胞 LPS 反 应 的 影 响 及 其 机 制 。 旨 在 通 过 以 上 研 究 ， 深化 对 内 毒 素 血 症 发 病 机 制 的 认 识 ， 为 寻 找 防 治 内 毒 素 血 症 的 有 效 措 施 提 供 实 验 依 据 。主 要 结 果 如 下 ：1. 内 毒 素 血 症 时 小 鼠 血 浆 OX-LDL 含 量 明 显 增 加 。 LPS 注 射 后 0.58h， 各 剂 量 组OX-LDL 水 平 呈 内 毒 素 剂 量 依 赖 的 方 式 升 高 ， 且 内 毒 素 剂 量 越 大 ， OX-LDL 达 峰 时 间越 早 。2. OX-LDL 预 处 理 能 增 加 内 毒 素 血 症 小 鼠 肝 、 肺 组 织 及 血 浆 水 平 。 LPS 注射 后 肝 、 肺 组 织 及 血 浆 中 增 高 ， OX-LDL 预 处 理 复 合 LPS 注 射 小 鼠 肝 、 肺 组织 及 血 浆 中 水 平 高 于 单 纯 注 射 组 同 时 相 点 。3. LPS 注 射 可 致 小 鼠 肝 脏 发 生 病 理 损 害 ， OX-LDL 预 处 理 复 合 LPS 注 射 可 加 重肝 脏 的 病 理 改 变 。4. OX-LDL 预 处 理 能 增 加 内 毒 素 血 症 小 鼠 死 亡 率 。 不 同 剂 量 OX-LDL 预 处 理 对 动物 死 亡 率 的 增 加 无 统 计 学 差 异 。5. OX-LDL 预 处 理 能 增 强 LPS 诱 导 小 鼠 肺 泡 巨 噬 细 胞 产 生 的作用，其增强作 用 与 抗 抗 体 F8 预 处 理 组 相 同 ， 抗 CD14 抗 体 预 处 理 则 能 阻 断 这 种 增 强 作 用 。结论： 1. 内 毒 素 血 症 时 小 鼠 体 内 OX-LDL 生 成 急 剧 增 加 ， 增 加 程 度 内 毒 素 与 剂 量 呈 明 显的 量 效 关 系 。2. OX-LDL 能 增 敏 小 鼠 对 内 毒 素 的 反 应 ， 导 致 肝 、 肺 组 织 及 血 浆 中 TNF 水 平 显4第三军医大学硕士学位论文著 升 高 ， 死 亡 率 明 显 上 升 。3. OX-LDL 增 敏 小 鼠 对 内 毒 素 反 应 性 的 机 制 与 其 拮 抗 清 道 夫 受 体 清 除 内 毒 素 ， 增加 内 毒 素 与 CD14 结 合 ， 进 而 增 强 其 激 活 作 用 有 关 。关键词： 内 毒 素 ， 氧 化 型 低 密 度 脂 蛋 白 ， 清 道 夫 受 体 ， CD145第三军医大学硕士学位论文Effect of Oxidized Low Density Lipoprotein on LPSResponse and its mechanismAbstractRecent researches have indicated that endotoxemia is a major reason for thedevelopment of systemic inflammatory response syndrome(SIRS) and multiple organdysfunction syndrome(MODS) in severe infections and trauma patients, therefore it is veryimportant to further explore the pathogenesis of endotoxemia. Some in vitro experimentsreported that oxidized low density lipoprotein(OX-LDL) can regulate the cellular responseto Lipopolysaccharide (LPS),but how about the production of OX-LDL in endotoxemia,whether OX-LDL can regulate the cellular response to LPS , and, what is its mechanism, allthe problems have not been reported. This study was performed as the following threeaspects:1.To investigate the change of OX-LDL in endotoxemia mice. 2.To observe theeffect of OX-LDL on response of mice to LPS. 3. To study the effect of OX-LDL onalveolar macrophage response to LPS and its mechanism. These studys may be helpful forimproving the knowledge about pathogenesis of endotoxemia and putting forwardeffective methods for the prevention and therapy of endotoxemia.The main results are as follows:1. The mice plasma OX-LDL increases significantly after LPS injection, which is indose dependent manner from 30 minutes to 8 hours after LPS injection, and , the higher theLPS dosage is, the more quickly the increasing of plasma OX-LDL is.2. ?levels in the liver, lung, and plasma of mice increase after LPS injection.Pretreatment of OX-LDL can increase ?levels in the liver, lung, and plasma ofendotoxemia mice, which are higher than that of the LPS injected mice at the same points.3. LPS injection results in histological damages of mice liver and OX-LDLpretreatment can aggravate these damages.4. OX-LDL pretreatment can increase the mortality of endotoxemia mice, anddifferent dosage of OX-LDL pretreatment has no effect on the increasing of mortality.5. OX-LDL pretreatment also can increase ?production of the mice alveolarmacrophages induced by LPS, which is the same of that of the group pretreated with 2F8,2第三军医大学硕士学位论文monoclonal antibody of SR, while pretreatment with antibody of CD14 can block thiseffect.Conclusions:1. The production of OX-LDL in endotoxemia mice increases sharply and theincreasing extent represents a dose dependent manner.2. OX-LDL can strengthen the response of mice to LPS , aggravate inflammatoryresponse and increase the mortality of endotoxemia mice.3. The mechanism that OX-LDL strengthens the response of mice to LPS is due to theblockage of the scavenger receptor.Key words: Lipopolysaccharide, oxidized low density lipoprotein, Scavenger receptor, CD14.3第三军医大学硕士学位论文英 文 缩 写 一 览 表英 文 缩 写 英 文 全 称 中 文 全 称CD Cluster of differentiation 白 细 胞 分 化 抗 原mCD14 Membrane CD14 膜 结 合 CD14SR Scavenger receptor 清 道 夫 受 体LPS Lipopolysaccharide 脂 多 糖TNF-a Tumor necrosis factor a 肿 瘤 坏 死 因 子 aILs Interleukins 白 细 胞 介 素AM Alveolar macrophages 肺 泡 巨 噬 细 胞M Macrophage 巨 噬 细 胞SIRS Systemic inflammatory response syndrome 全 身 炎 症 反 应 综 合 征MODS Multiple organ dysfunction syndrome 多 器 官 功 能 不 全 综 合 征OX-LDL Oxidized low d