陕 西 中 医 学 院硕 士 学 位 论 文中 药 抗 疏 健 骨 颗 粒 对 OP 模 型 大 鼠 血 清 中 TNF- 、 NO 影 响 的 验 研究姓 名 ： 亓 志 强申 请 学 位 级 别 ： 硕 士专 业 ： 中 医 骨 伤 科 学指 导 教 师 ： 史 传 道20100401摘 要目的 本 实 验 主 要 通 过 观 察 抗 疏 健 骨 颗 粒 对 OP 模型大鼠血清中肿瘤坏死因子 （ TNF- ）和一氧化氮（N O）的影响，探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机制 ， 为 将 抗 疏 健 骨 颗 粒 开 发 成 新 中 药 制 剂 奠 定 基 础 。方法 72 只 6 月 龄 雌 性 SD 大 鼠 ， 随 机 抽 取 12 只 为 假 手 术 组 ， 其 余 60 只以双侧卵 巢 切 除 法 复 制 骨 质 疏 松 模 型 ， 手 术 后 3 天 随 机 分 为 模 型 组 ， 尼 尔 雌 醇 组 ， 抗 疏 健 骨颗 粒 大 、 中 、 小 剂 量 组 ， 每 组 各 12 只 ； 灌 药 12 周 后 全 部 处 死 ， 观 测 大 鼠 血 清 中 肿 瘤坏 死 因 子 （ TNF- ） 、 一 氧 化 氮 （ NO） 的 变 化 。结果 1.大 鼠 造 模 12 周 后 ， 模 型 组 TNF- 含 量 与 假 手 术 组 比 较 ， 有 极 显 著 差异 （ P 0.01） ； 抗 疏 健 骨 颗 粒 小 剂 量 组 与 模 型 组 无 明 显 差 异 （ P 0.05） ； 抗 疏 健 骨 颗粒 大 、 中 剂 量 组 和 尼 尔 雌 醇 组 TNF- 含 量 与 模 型 组 比 较 有 极 显 著 差 异 （ P 0.01） ，抗 疏 健 骨 颗 粒 大 、 中 剂 量 组 TNF- 含 量 与 尼 尔 雌 醇 组 比 较 无 明 显 差 异 （ P 0.05） 。2.大 鼠 造 模 12 周 后 ， 模 型 组 NO 含 量 与 假 手 术 组 比 较 ， 有 极 显 著 差 异 （ P 0.01） ；抗 疏 健 骨 颗 粒 小 剂 量 组 与 模 型 组 无 明 显 差 异 （ P 0.05） ； 抗 疏 健 骨 颗 粒 大 、 中 剂 量 组和 尼 尔 雌 醇 组 NO 含 量 与 模 型 组 比 较 有 极 显 著 差 异 （ P 0.01） ， 抗 疏 健 骨 颗 粒 大 、 中剂 量 组 NO 含 量 与 尼 尔 雌 醇 组 比 较 无 明 显 差 异 （ P 0.05） 。结 论 1.抗 疏 健 骨 颗 粒 能 明 显 降 低 去 卵 巢 骨 质 疏 松 大 鼠 血 清 中 肿 瘤 坏 死 因 子 （ TNF- ） 含 量 。2.抗 疏 健 骨 颗 粒 能 明 显 提 高 去 卵 巢 骨 质 疏 松 模 型 大 鼠 血 清 一 氧 化 氮 （ NO） 含 量 。关键词 抗 疏 健 骨 颗 粒 ； 骨 质 疏 松 症 ； 肿 瘤 坏 死 因 子 ； 一 氧 化 氮Traditional Chinese Medicine anti-Osteoporosis and Bone HealthyGranula to TNF- , NO in the Serum of OP Model the Rats InfluenceExperimental StudyAbstractPurpose: This experiment is intended to confirm the therapeutic effect whichanti-Osteoporosis and bone healthy granula treat the Osteoporosis model ratsand discuss the mechanism of action which the granula treat and preventOsteoporosis by surveying the index change of TNF- , NO. It is expected toestablish the good theoreticaland experimental foundation which traditionalChinese medicine prevent and treat Osteoporosis.Method: select randomly 12 rats from 72 six-months-old female SD rats,and therest 60 rats are copied to the osteoporosis model by the both sideoophorectomy.after operation for 3days the 60 rats are divided Borrow theoperation group， model group, nilestriol group,anti-Osteoporosis and bonehealthy granula group of high dose, middle dose, low dose. Every group is 12rats,and all the rats are put to death to survey the change of TNF- , NO.Result: when the rats are copied model in 12 weeks. 1.for TNF- , the modelgroup is evidently higher than Borrow the operation group (p0.05； 与 尼 尔 雌 醇 组 比较 ， p0.05。由 上 图 及 表 1 可 见 ， 模 型 组 TNF- 含 量 与 假 手 术 组 比 较 ， 有 极 显 著 差 异 （ P0.01） ； 抗 疏 健 骨 颗 粒 小 剂 量 组 与 模 型 组 无 明 显 差 异 （ P 0.05） ； 抗 疏 健 骨 颗 粒 大 、中 剂 量 组 和 尼 尔 雌 醇 组 TNF- 含 量 与 模 型 组 比 较 有 极 显 著 差 异 （ P 0.01） ， 抗 疏 健骨 颗 粒 大 、 中 剂 量 组 TNF- 含 量 与 尼 尔 雌 醇 组 比 较 无 明 显 差 异 （ P 0.05） 。22浓度值中药抗疏健骨颗粒对 OP 模型大鼠血清中 TNF- 、NO 影响的实验研究5.2 实 验 对 各 组 大 鼠 血 清 中 NO 含 量 的 影 响给 药 12 周 后 NO 的 A 值 （ 吸 光 度 值 ） 与 浓 度 的 回 归 曲 线NO 浓 度 值 与 吸 光 度 值 间 的 关 系80706050403020100y = 1111.1x - 23.333R2 = 1NO 浓 度 与 吸 光 度 间 关 系线 性 (NO 浓 度 与 吸 光 度间 关 系 )0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1吸 光 度 值表 2 给 药 12 周 后 各 组 大 鼠 血 清 NO 的 测 定 结 果 （ x s ）组 别 组 数 N0（ mol/L）假 手 术 组模 型 组尼 尔 雌 醇 组小 剂 量 组中 剂 量 组大 剂 量 组12111211121151.657.5332.348.1751.737.8137.858.0751.777.9463.788.11*注 ： *与 假 手 术 组 比 较 ， p0.05； 与 尼 尔 雌 醇 组 比较 ， p0.05。由 上 图 及 表 2 可 见 ， 模 型 组 NO 含 量 与 假 手 术 组 比 较 ， 有 极 显 著 差 异 （ P 0.01） ；抗 疏 健 骨 颗 粒 小 剂 量 组 与 模 型 组 无 明 显 差 异 （ P 0.05） ； 抗 疏 健 骨 颗 粒 大 、 中 剂 量 组和 尼 尔 雌 醇 组 NO 含 量 与 模 型 组 比 较 有 极 显 著 差 异 （ P 0.01） ， 抗 疏 健 骨 颗 粒 大 、 中剂 量 组 NO 含 量 与 尼 尔 雌 醇 组 比 较 无 明 显 差 异 （ P 0.05） 。23， 携 带 方 便 ，病 因 。 正 是 在 此 基 础 上 ， 我 院 创 建 此 方 ， 并 制 作 成 丸 剂 抗 疏 健 骨 颗 粒陕西中医学院 2010 届硕士学位论文6 讨 论绝 经 后 骨 质 疏 松 症 是 原 发 性 骨 质 疏 松 症 的 主 要 类 型 之 一 ， 该 病 的 特 点 是 以 骨 量 的减 少 、 骨 组 织 显 微 结 构 的 破 坏 为 特 征 ， 是 致 骨 脆 性 增 加 及 骨 折 危 险 性 增 强 的 一 种 全 身性 骨 病 。 老 年 发 病 率 高 ， 且 发 病 隐 匿 ， 病 史 较 长 ， 给 早 期 诊 断 及 治 疗 带 来 一 定 的 困 难 ，晚 期 易 致 全 身 多 发 骨 折 等 症 状 ， 给 患 者 带 来 巨 大 的 痛 苦 。 目 前 西 药 主 要 是 骨 形 成 促 进剂 （ 氟 化 物 等 ） 和 骨 吸 收 抑 制 剂 （ 降 钙 素 、 雌 激 素 、 二 磷 酸 盐 、 维 生 素 D 等 ） 。 但 它们 各 自 仅 作 用 于 骨 重 建 的 某 个 环 节 ， 且 在 长 期 的 使 用 过 程 中 无 论 在 观 念 、 价 格 ， 还 是在安全、方便方面都存在许多需要解决的问题。如雌激素( HRT)可抑制骨丢失，其缺乏 是 本 病 发 生 的 主 要 原 因 ， 雌 激 素 替 代 疗 法 为 本 病 公 认 疗 法 之 一 。 但 是 HRT 的 长 期 使用 使 心 血 管 疾 病 发 生 的 风 险 相 对 增 加 22%， 更 被 认 为 是 引 起 子 宫 内 膜 癌 、 乳 腺 癌 的 重要 元 凶 ， 因 此 找 到 一 种 雌 激 素 的 替 代 疗 法 成 为 骨 科 医 疗 工 作 者 的 重 要 工 作 之 一 。 中 药（ 草 药 ） 复 方 具 有 “多 成 分 、 多 靶 点 、 协 同 促 进 增 效 、 配 伍 适 中 安 全 ”特 征 日 益 引 起人 们 研 发 的 兴 趣 。 本 实 验 正 是 通 过 去 大 鼠 卵 巢 模 拟 女 性 绝 经 后 骨 质 疏 松 模 型 来 探 讨 中药 抗 疏 健 骨 颗 粒 治 疗 骨 质 疏 松 症 的 作 用 机 理 ， 为 将 抗 疏 健 骨 颗 粒 开 发 成 新 中 药 制 剂 奠定 基 础 。6.1 立 方 依 据 及 方 药 组 成祖 国 传 统 医 学 对 骨 质 疏 松 的 临 床 表 现 及 其 病 因 病 机 有 详 尽 记 载 。 中 医 理 论 认 为 骨质 疏 松 的 发 生 主 要 与 肾 虚 、 脾 虚 、 血 瘀 、 肝 郁 四 个 因 素 有 关 ， 其 中 肾 虚 是 本 病 的 主 要45便 于 服 用 。抗疏健骨颗粒由熟地黄、骨碎补、补骨脂、淫羊藿、丹参、牛膝、杜仲组成。其中 熟 地 黄 、 淫 羊 藿 为 君 药 ， 熟 地 质 润 入 肾 ， 善 滋 补 肾 阴 ， 填 精 益 髓 ， 为 补 肾 阴 之 要 药 ，古 人 云 其 “大 补 五 脏 真 阴