第五章 中药制剂中各类化学成分分析,药物分析学科,掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成分的定性、定量原理与方法。熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、定量原理与方法。了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。,【目的要求】,药物分析学科,第五章 中药制剂中各类化学成分分析,学习方法结构 性质 分析方法,结构：母核、官能团、分子量等物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、 旋光性、光谱特性等分析方法：总类成分：化学分析法、分光光度法单一成分：各种色谱法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、SFC等）,药物分析学科,一、概述1、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。2、含生物碱成分的常用中药：,第一节 生物碱类成分分析,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质1、溶解性 大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂； 与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异；季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水 液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂；含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质2、沉淀反应大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸,马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液12滴，即生成黄棕色沉淀。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质3、显色反应生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料（多为磺酸肽类）生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出 结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色； 这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质4、紫外光谱特性结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,三、定性鉴别1、一般理化鉴别沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在酸性水溶液中进行制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,三、定性鉴别2、薄层色谱法吸附剂：硅胶、氧化铝；展开剂：多以氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展开剂的极性；由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成盐，使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂之后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色 亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。,讨论：如何改进？,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,三、定性鉴别3、纸色谱法可用于生物碱盐或游离碱的鉴别 4、HPLC：保留时间定性5、GC：可用于小分子生物碱的鉴别,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定（一）总生物碱的含量测定1、化学分析法 主要使用酸碱滴定法。强碱滴定生物碱盐时，在70%90%的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴定。若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行要求：总生物碱的纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定（一）总生物碱的含量测定2、分光光度法 （1）直接测定法不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。一般用于药味较少、干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（2）酸性染料比色法（例题P124）原理： BH+ In- BH+In-（水相） BH+In-（有机相）关键：酸性染料的选择：甲基橙、溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等；pH值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。有机溶剂的选择：一般用氯仿、二氯甲烷水分的干扰及消除,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（3）雷氏盐比色法（注意事项p126）原理： BH+ Cr(NH3)2(SCN)4- BH Cr(NH3)2(SCN)4测定方法： （复盐沉淀）复盐沉淀溶于丙酮（或甲醇）直接比色测定样品定量过量的雷氏盐过滤滤液比色测定max=520nm（4）异羟肟酸铁比色法用于含有酯键结构的生物碱的测定,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定1、TLCS生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定；选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似； 使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响测定。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定2、HPLC(例题P128)以反相高效液相色谱应用较多；在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅醇基的影响，使生物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；可在流动相中加入硅醇基抑制剂、离子对试剂等措施以克服游离硅醇基的影响，满足定量分析的要求；中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的是紫外检测器。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定3、GC只适用于有挥发性的，遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类生物碱等 制备供试品溶液时一般应采用冷提取，净化过程也要避免加热以防成分的流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试液。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,五、常见生物碱成分分析,第一节 生物碱类成分分析,五、常见生物碱成分分析,第一节 生物碱类成分分析,五、常见生物碱成分分析,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,一、概述1、定义：黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮（2-phenylchromone）类化合物，现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。2、含黄酮类成分的常见中药,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,二、结构特征及理化性质1、结构特征,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,二、理化性质2、溶解度黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中；黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等。,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,二、理化性质3、酸碱性酸性：黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性强弱：7,4- 二羟基 7-或4- 羟基 一般酚 5-羟基碱性氧原子的性质,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,二、理化性质4、显色反应盐酸-镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应可用于鉴别，但要避免假阳性结果 5、紫外光谱特征,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,三、定性鉴别1、理化鉴别盐酸-镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应2、色谱鉴别吸附剂：硅胶、聚酰胺硅胶色谱分离弱极性化合物较好；聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳；纤维素薄层则适用于分离多糖苷混合物。显色反应：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,四、含量测定1、总成分的含量测定直接测定：常用芦丁作对照测定显色测定：常用铝盐做显色剂2、单体黄酮成分的含量测定TLCSHPLC（05版药典全部使用此法）五、常见黄酮类成分（略）,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,一、概述1、概念2、含三萜皂苷类成分的常用中药,第三节 三萜皂苷类成分分析,二、结构及理化性质,1、溶解度：可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，几不溶于或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂；在含水丁醇或戊醇中溶解度较好,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,二、结构及理化性质,1、溶解度皂甙元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等，在丁醇、戊醇中溶解性较好。2、紫外光谱特征,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,二、结构及理化性质,3、显色反应醋酐-浓硫酸反应冰醋酸-乙酰氯反应氯仿-硫酸反应金属盐类反应：+铅、钡、铜盐沉淀,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,三、定性鉴别,1、理化鉴别 泡沫反应：多用于检验含有皂苷的原料药； 化学显色反应：仅在组成药物较少的中药制剂中使用。2、TLC吸附剂：硅胶，氧化铝、硅藻土等。展开剂：氯仿-甲醇-水（13：7：2）（10以下放置，下层）氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）（同上）显色剂：不同浓度的硫酸乙醇液最常用。,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,四、定量分析,（一）总成分分析1、重量法 该法主要用于含皂苷的原料药质量控制。在中药制剂中，当处方中药味含皂苷类成分较多时，常用正丁醇作溶剂，测定正丁醇浸出物。2、比色法： 常用显色剂有：香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等。注意测定单体皂苷（或皂苷元）与总皂苷的关系,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,四、定量分析,（二）单体成分分析1、TLC薄层洗脱-比色法薄层扫描法2、HPLCHPLC-UV：人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端；有紫外吸收的甘草酸、远志皂苷，灵敏度高。HPLC-ELSD：检测三萜皂苷类成分的应用日渐广泛五、常见三萜皂苷类成分,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,一、概述1、概念：中药中醌类化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四种类型可游离存在，也可与糖结合成苷，称为蒽苷。2、含醌类成分的常用中药,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,二、结构及理化性质,丹参醌IIA,大黄素,1、物理性质：存在的形态，升华性，光不稳定性2、溶解性：游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，微溶于或不溶于水。结合成苷后极性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在热水中也可溶解，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,二、结构及理化性质3、酸性：酚羟基的酸性碱提酸沉法4、显色反应羟基蒽醌+碱橙，红，紫红，蓝+Pb2+/Mg2+ 配合物9、10位未取代的羟基蒽酮化合物+对亚硝基二甲基苯胺 紫，绿，蓝，灰,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,三、定性鉴别1、显色反应2、升华法3、TLC吸附剂：硅胶展开剂：乙酸乙酯-甲醇-水（10016.513.5）适于分离蒽醌苷元和蒽醌苷，不含水或甲醇的混合溶媒适合于分离蒽醌类的苷元。显色方法：喷碱性试剂，喷醋酸镁甲醇液、氨气熏及在紫外灯下观察荧光，可见光下直接观察色斑。,