学 院 代 号 10716 学 号 0 10021421101专 业 代 码 100602 密 级陕 西 中 医 学 院Shaanxi University of Chinese Medicine硕 士 学 位 论 文康健关节葆对兔膝骨性关节炎软骨组织型胶原表达的影响学 位 申 请 人 徐建涛专 业 名 称 中西医结合临床申 请 学 位 类 型 临床医学硕士专业学位指 导 教 师 姓 名 李智斌主任医师论 文 提 交 日 期 2013 年 4 月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本 人 郑 重 声 明 ： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作 所 取 得 的 成 果 ， 无 抄 袭 及 编 造 行 为 。 除 文 中 已 经 特 别 加 以 注 明 引 用 的 内 容 外 ， 本 论文 不 含 任 何 其 他 个 人 或 集 体 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 作 品 成 果 。 对 本 文 的 研 究 做 出 重 要 贡献 的 个 人 和 集 体 ， 均 已 在 文 中 以 明 确 方 式 标 明 并 致 谢 。 本 人 完 全 意 识 到 本 声 明 的 法 律结 果 并 由 本 人 所 承 担 的 法 律 责 任 。学 位 论 文 作 者 签 名 日 期 ： 年 月 日关于学位论文使用授权的声明陕 西 中 医 学 院 有 权 保 留 使 用 本 人 学 位 论 文 ， 同 意 学 院 按 规 定 向 国 家 有 关 部 门 机 构送 交 论 文 的 复 印 件 和 电 子 版 ， 允 许 被 查 阅 和 借 阅 。 本 人 授 权 陕 西 中 医 学 院 可 以 将 本 学位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 编 入 有 关 数 据 库 进 行 检 索 ， 可 以 采 用 影 印 、 缩 印 或 其 他 复 印手 段 保 存 和 汇 编 本 学 位 论 文 。 可 以 公 布 （ 包 括 刊 登 ） 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 。（ 保 密 论 文 在 解 密 后 应 遵 守 此 规 定 ）论 文 作 者 签 名 日 期 ： 年 月 日论 文 导 师 签 名 日 期 ： 年 月 日摘 要目 的 ： 采 用 免 疫 组 化 法 测 定 型 胶 原 在 兔 子 膝 骨 性 关 节 炎 模 型 中 关 节 软 骨 的 表 达 ， 探讨 自 拟 方 康 健 关 节 葆 对 关 节 软 骨 修 复 和 保 护 的 可 能 机 制 ， 并 阐 明 该 药 在 保 护 关 节 软 骨和 改 善 关 节 功 能 等 方 面 的 作 用 ， 为 该 药 在 临 床 上 推 广 治 疗 膝 骨 性 关 节 炎 ， 提 供 实 验 及其 理 论 依 据 。方 法 ： 1、 分 组 和 造 模 健康新西兰大白兔 50 只 ， 雌 、 雄 各 半 ， 将 其 按 体 重 从 轻 到 重进行编号，按随机数字表随机分为 5 组 。 A： 空 白 组 ， B： 模 型 组 ， C： 氨 基 葡 萄 糖 组（ 西 药 对 照 组 ）， D： 壮 骨 关 节 丸 组 （ 中 药 对 照 组 ）、 E： 康 健 关 节 葆 组 （ 实 验 组 ）， 每组 10 只 。 常 规 饲 养 7 天 后 ， 除 空 白 组 以 外 ， 余 组 将 4%木瓜蛋白酶生理盐水溶液 0.1ml注射进兔右后膝关节腔内，建立兔膝骨关节炎模型 1。2、 给 药 在造模的同时空白组和模型组每日以 10ml 的生理盐水灌胃；西药对照组每日以 10ml（ 0.06g/ml）的氨基葡萄糖水溶液灌胃；中药对照组每日以 10ml（ 0.07g/ml）的壮骨关节丸水溶液灌胃；实验组每日以 10ml（ 0.07g/ml） 的 康 健关节葆合剂灌胃，每日两次，共 4 周。期间常规饲养，不限饮食。3、 灌 胃 结 束 后 ， 用 刀 片 按 解 剖 结 构 切 开 兔 右 后 膝 关 节 ， 切 取 胫 骨 内 侧 髁 软 骨 组 织 。4、肉眼观察兔膝关节大体情况；光镜观察软骨 HE 染色切片；免疫组化法检测软骨组织切片胶原的表达水平。结 果 ： 1、 肉 眼 观 察A 组 兔 膝 关 节 无 充 血 、 水 肿 ， 关 节 液 透 明 ， 关 节 软 骨 呈 蓝 白 色 并 半 透 明 ， 表 面 光滑 、 无 缺 损 ， 触 之 有 弹 性 ；B 组 兔 膝 关 节 充 血 水 肿 ， 关 节 液 呈 浅 黄 、 混 浊 、 量 多 ， 关 节 软 骨 的 形 态 学 改 变 明显 ， 软 骨 不 透 明 ， 颜 色 呈 黄 色 ， 表 面 不 完 整 、 粗 糙 ， 触 之 缺 乏 弹 性 ， 负 重 区 有 较 大 面积 的 糜 烂 溃 疡 面 及 裂 隙 ， 可 达 全 层 软 骨 ， 且 少 数 软 骨 剥 脱 ， 致 使 软 骨 下 骨 外 露 ， 周 围骨 赘 生 成 ；C、 D、 E 组 兔 膝 关 节 轻 度 肿 胀 ， 少 量 充 血 ， 关 节 液 呈 淡 黄 色 、 量 较 少 ， 关 节 软 骨透 明 度 降 低 ， 少 关 泽 ， 小 面 积 的 糜 烂 、 缺 损 ， 仅 限 于 软 骨 浅 、 中 层 ， 未 见 软 骨 下 骨 裸露 ， 周 围 可 见 少 量 的 骨 赘 形 成 。 其 中 ， E 组 与 C、 D 组比较退变较轻。2、 光 镜 观 察 软 骨 HE 染 色 切 片A 组 软 骨 细 胞 结 构 分 层 清 晰 ， 排 列 整 齐 ， 细 胞 分 化 好 ， 潮 线 完 整 ， 未 见 裂 纹 、 缺损 ， 无 细 胞 增 生 性 改 变 ；B 组 软 骨 细 胞 结 构 分 层 紊 乱 ， 表 面 有 碎 裂 、 塌 陷 ， 数 量 减 少 ， 可 见 溃 疡 病 变 ， 裂隙 深 达 移 行 层 ， 潮 线 不 完 整 ；C、 D 组软骨表面不规则，细胞弥散性增多，可见轻度的软骨缺损，潮线尚完整E 组 软 骨 结 构 分 层 尚 可 ， 软 骨 细 胞 增 殖 、 分 化 尚 正 常 ， 潮 线 较 完 整 。3. 模型组软骨 型胶原 OD 值 较 空 白 组 明 显 降 低 （ P 0.05） ；康健关节葆组、氨 基 葡 萄 糖 组 、 壮 骨 关 节 丸 组 型 胶 原 OD 值 较 模 型 组 明 显 升 高 （ P 分 别 为 0 、 0.034、0.026） ； 康 健 关 节 葆 组 型 胶 原 OD 值 高 于 氨 基 葡 萄 糖 组 、 壮 骨 关 节 丸 组 （ P 分 别 为0.034、 0.043） ；氨基葡萄糖组型胶原 OD 值与壮骨关节丸组比较（P =0.915） ，无明显差异。结 论 ：康健关节葆能增加型胶原在兔膝骨关节炎模型软骨细胞中的表达，以减低及延缓兔膝骨关节炎模型中软骨的破坏。结果表明康健关节葆在兔膝骨关节炎的作用机理与调节软骨细胞因子水平有关，这可能是该药修复受损软骨和保护未受损的软骨作用机制之一。为康健关节葆在临床治疗 OA 提 供 了 理 论 依 据 。关 键 词 ：骨性关节炎；康健关节葆；型胶原；1Kangjian guanjie bao rabbit knee osteoarthritis cartilagetissue expression of type II collagenAbstractObjective： Using immunohistochemical determination of the expression of typeII collagen in the articular cartilage of rabbit knee osteoarthritis, exploreself Fang Kangjian joint Celebrex articular cartilage repair and protectionpossible mechanism, and to clarify the drug in articular cartilage, improvejoint function and protectionthe role of other aspects of the experiments andtheir theoretical basis for the clinical treatment of knee osteoarthritis.Methods ： 、 Grouping, made the mold long-eared white rabbits were 4-month-old,50, female, male and female, the White Rabbit according to the weight lighterto re-numbered randomly divided into five groups, according to the randomnumber table. A: control group, B: model group, the C: the healthy jointsCelebrex (experimental group), D: bolus group (traditional Chinese medicinecontrol group), E: glucosamine group (comparison group), n = 10. Theconventional breeding 7 days, other than blank group, I group theestablishment of the rabbit right knee articular injection of 4% papain salinesolution 0.1ml rabbit knee osteoarthritis Model 1.2、 Administration, while modeling healthy joint Celebrex aqueous solutionin the experimental group daily with 10ml (0.07g/ml) gavage; the Chinesemedicine daily control group to 10ml (0.07g/ml) aqueous bolus gavage; westernmedicinethe control group, daily to 10ml (0.06g/ml), glucosamine liquidorally, twice daily, for 4 weeks. Blank and model groups are not fed drugs.During routine feeding, normal drinking water.3、 The gavage After, before the middle of the area right after the kneesynovial tissue, cut with a razor blade to the sagittal cut the medial tibialcondyle cartilage tissue.4 、 expression levels of collagen in cartilage tissue sectionsimmunohistochemical assay articular cartilage.R