学 院 代 号 10716 学 号 0 10021421121专 业 代 码 450227 密 级陕 西 中 医 学 院Shanxi University of Chinese Medicine硕 士 学 位 论 文康健关节葆对家兔膝骨性关节炎模型关节软骨细胞中 MMP-、 TIMP-1 表达的影响学 位 申 请 人 宋智全专 业 名 称 中西医结合临床申 请 学 位 类 型 临床医学硕士专业学位指 导 教 师 姓 名 李智斌论 文 提 交 日 期 2013 年 4 月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本 人 郑 重 声 明 ： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作 所 取 得 的 成 果 ， 无 抄 袭 及 编 造 行 为 。 除 文 中 已 经 特 别 加 以 注 明 引 用 的 内 容 外 ， 本 论文 不 含 任 何 其 他 个 人 或 集 体 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 作 品 成 果 。 对 本 文 的 研 究 做 出 重 要 贡献 的 个 人 和 集 体 ， 均 已 在 文 中 以 明 确 方 式 标 明 并 致 谢 。 本 人 完 全 意 识 到 本 声 明 的 法 律结 果 并 由 本 人 所 承 担 的 法 律 责 任 。学 位 论 文 作 者 签 名 日 期 ： 年 月 日关于学位论文使用授权的声明陕 西 中 医 学 院 有 权 保 留 使 用 本 人 学 位 论 文 ， 同 意 学 院 按 规 定 向 国 家 有 关 部 门 机 构送 交 论 文 的 复 印 件 和 电 子 版 ， 允 许 被 查 阅 和 借 阅 。 本 人 授 权 陕 西 中 医 学 院 可 以 将 本 学位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 编 入 有 关 数 据 库 进 行 检 索 ， 可 以 采 用 影 印 、 缩 印 或 其 他 复 印手 段 保 存 和 汇 编 本 学 位 论 文 。 可 以 公 布 （ 包 括 刊 登 ） 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 。（保密论文在解密后应遵守此规定）论 文 作 者 签 名 日 期 ： 年 月 日论 文 导 师 签 名 日 期 ： 年 月 日摘 要目 的 ： 采 用 免 疫 组 化 法 测 定 兔 KOA 关节软骨细胞中 MMP-1、 TIMP-1 表 达 的 影 响 ， 探 讨自 拟 新 方 康 健 关 节 葆 对 关 节 软 骨 修 复 和 保 护 的 可 能 机 制 ， 并 阐 明 该 药 在 改 善 关 节 功 能和 保 护 关 节 软 骨 等 方 面 的 作 用 ， 为 临 床 治 疗 KOA 提 供 实 验 及 其 理 论 依 据 。方法：1 分 组 、 造 模 ： 成 年 健 康 新 西 兰 大 白 兔 50 只，雌、雄各半，按体重从轻到重进行编号，并随机分成 5 组 。 A： 空 白 组 ， B： 模 型 组 ， C： 氨 基 葡 萄 糖 组 （ 西 药 对 照组） ， D： 壮 骨 关 节 丸 组 （ 中 药 对 照 组 ）、 E： 康 健 关 节 葆 组 （ 实 验 组 ）， 每 组 10 只 。所 有 实 验 的 新 西 兰 大 白 兔 在 同 等 条 件 下 饲 养 一 周 ， 无 其 它 不 适 后 ， 进 行 造 模 ， 除 空 白组 外 ， 余 组 用 4%木 瓜 蛋 白 酶 0.1ml 右膝关节腔内注射，4 周 后 建 立 兔 右 膝 骨 关 节 炎 模型，是目前常用的造模方式。2 给 药 方 法 ： 在 常 规 喂 养 一 周 后 ， 开 始 造 模 、 给 药 ， A 组 （ 空 白 组 ） ： 不 造 模 ， 生 理 盐水 20ml， 二 次 /日 ， 10ml/次 ， 灌 服 。 B 组 （ 模 型 组 ） ： 只 造 模 ， 生 理 盐 水 20ml， 二 次/日 ， 10ml/次 ， 灌 服 。 C 组 （ 氨 基 葡 萄 糖 组 ） ： 氨 基 葡 萄 糖 液 20ml（ 0.06g/ml） /日 ，二 次 /日 ， 10ml/次 ， 灌 服 。 D 组 （ 壮 骨 关 节 丸 组 ） ： 壮 骨 关 节 丸 水 溶 液 20ml（ 0.07g/ml）/日 ， 二 次 /日 ， 10ml/次 ， 灌 服 。 E 组 （ 康 健 关 节 葆 组）： 康 健 关 节 葆 水 溶 液 20ml（ 0.07g/ml） /日 ， 二 次 /日 ， 10ml/次 ， 灌 服 。3 取 材 及 检 测 ： 在 实 验 动 物 造 模 4 周 结 束 后 ， 分 别 取 各 组 兔 膝 关 节 软 骨 ， 行 大 体 肉 眼观 察 、 HE 染色观察及免疫组化法测定 MMP-1、 TIMP 1 的 含 量 变 化 ， 行 统 计 学 分 析 。结果：1 .从 实 验 动 物 的 解 剖 后 ， 肉 眼 大 体 观 察 显 示 ， 模 型 组 兔 膝 关 节 软 骨 具 有 明 显 的退 行 性 改 变 ， 符 合 造 模 的 要 求 ， 康 健 关 节 葆 能 很 好 的 缓 解 关 节 软 骨 破 坏 ， 且 比 其 它 对照 组 效 果 显 著 。 2.HE 染 色 后 光 学 显 微 镜 观 察 及 兔 关 节 软 骨 细 胞 MMP-1、 TIMP-1 免 疫组化显示：康健关节葆组的 MMP-1 表 达 较 模 型 组 明 显 降 低 ， P0.01 有显著性差异。康 健 关 节 葆 组 的 TIMP 1 表达较模型组升高，P 0.05 有统计学意义。由此可以说明康 健 关 节 葆 能 降 低 关 节 软 骨 MMP 1 的 表 达 水 平 ， 对 TIMP-1 的 表 达 有 升 高 作 用 ， 从 而延 缓 或 减 慢 软 骨 基 质 的 降 解 、 促 进 软 骨 修 复 。结 论 ： 康 健 关 节 葆 能 显 著 降 低 OA 模型兔关节软骨中 MMP-1 含 量 ， 且 对 TIMP-1 据 有 升高 作 用 ， 以 减 慢 及 延 缓 兔 膝 关 节 炎 中 软 骨 的 破 坏 或 降 解 ， 能 起 到 改 善 关 节 功 能 的 作 用 。这 可 能 是 该 药 修 复 受 损 软 骨 和 保 护 未 受 损 的 软 骨 机 制 之 一 。 为 康 健 关 节 葆 在 临 床 治 疗OA 提 供 了 理 论 依 据 。关 键 词 ： 骨 性 关 节 炎 ； 康 健 关 节 葆 ； 基 质 金 属 蛋 白 酶 -1； 基 质 金 属 蛋 白 酶 1 抑 制 剂Kang jian guan jie bao joint of rabbit knee osteoarthritismodelCartilage cells in the expression of MMP 1 and TIMP - 1AbstractObjective:the KOA rabbit articular cartilage cells was evaluated byimmunohistochemical method in the influence of the expression of MMP 1 andTIMP - 1, to explore the New Zealand fit joint remains the possible mechanismof articular cartilage repair and protection, and to clarify the drug toimprove joint function and protect the articular cartilage, etc, provideexperimental and theory basis for clinical treatment of KOA.Methods: 1 group, make mould: adult healthy New Zealand white rabbit 50, halfmale and female, from light to heavy numbered according to the weight, andrandomly divided into 5 groups. A: blank group, B: C: model group, the aminogroup of western medicine (control group), glucose D: strong bone joint pillgroup (traditional Chinese medicine control group), E: fit joint group(experimental group), 10 in each group. All of New Zealand white rabbitexperiment under the same conditions raised for a week, no other discomfort,to build mold, except the blank group, yu group with 4% papain 0.1 ml rightknee joint cavity injection, 4 weeks after the right knee osteoarthritisrabbit model was established, is the common way of building.2 delivery method: in conventional feeding A week later, began to build mold,dosing, group A group (blank) : to build mold, saline 20 ml, 2 times/day, 10ml/second, fill the stomach. B group (model group) : only build mold, saline20 ml, 2 times/day, 10 ml/second, fill the stomach. Amino glucose group (groupC) : liquid glucosamine 20 ml (0.06 g/ml) per day, 2 times/day, 10 ml/second,filling and clothing. Group D (strong bone joints pill group) : strong bonejoints pill aqueous 20 ml (0.07 g/ml) per day, 2 times/day, 10 ml/second,filling and clothing. Group E (fit joint group companies) : aqueous solutionfit joint remains 20 ml (0.07 g/ml) per day, 2 times/day, 10 ml/second, fillingand clothing.3 materials and testing: made in experimental animals die after 4 weeks,respectively in each group of rabbit knee joint cartilage, the generalmacroscopic observati