1高效液相色谱法测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量作者：何瑞荣 李容茂 丁少波 谢家隆 【摘要 】 目的 建立乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量测定方法。方法 采用 RPHPLC 法 ,以 Supelco C18(250 mm4.6 mm,5 m)柱为色谱柱，流动相为甲醇0.36% 磷酸（体积比 4258） ， 流速为1.0 mLmin-1， 检测波长为 276 nm。结果 黄芩苷质量浓度在0.081 6 0.408 6 mg/mL 范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为 A=52.61-0.374 8,r=0.999 4 (n=5)；平均回收率为98.30%(n=5), RSD 为 1.23%。结论 本方法操作简便、结果准确，可用于本品的含量测定与质量控制。 【关键词】 反相高效液相色谱法；乙肝解毒胶囊；黄芩苷；含量测定 Abstract:Objective To develop the quantification method for baicalin in Yigan Jiedu capsules.Methods RPHPLC was used in the determination of baicalin in Yigan Jiedu capsules with Supelco C18 column (250 mm4.6 mm,5 m); mobile phase: methanol0.36% phosphoric acid (4258); flow rate: 1.0 mL/min; and detection wavelength: 276 nm. Results The mass concentration of baicalin showed good linear correlation with pear area in the range of 0.08160.4086 2mg/mL, the regression equation: A=52.61-0.374 8,r=0.999 4 (n=5) ; the average recovery 98.30%（RSD 1.23%）. Conclusion The method was simple and reliable, which could be used in the assay and quality control of Yigan Jiedu capsules. Key words:RPHPLC; Yigan Jiedu capsules; baicalin; assay 乙肝解毒胶囊由黄柏、黄芩、大黄等 8 味中药组成，主治肝胆湿热内蕴所致的肝区热痛、全身乏力、口苦咽干、大便干结、小便黄少、舌苔黄腻等，临床上用于乙型肝炎、辨证属于肝胆湿热内蕴者1 。该药收载于 卫生部药品标准中药成方制剂第一册，该标准只作常规检查要求。为控制产品质量，笔者采用 RPHPLC 法对制剂中的黄芩苷进行含量测定，方法简便准确，对控制产品质量具有参考价值。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪（DIONEX P680 HPLC PUMP） ，ASL100 AUTOMATED SAMPLE INJECTOR 全自动进样器，DAD 紫外检测器；1006 型超声仪。 artoius BP211D 型电子天平。 黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715200212） ；乙肝解毒胶囊（澳门泳江制药厂，批号：070701、20070101、20070102、20070103） ；甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯；水为双蒸水。 2 方法与结果 32.1 色谱条件 色谱柱为upelco LC18DB（250 mm4.6 mm,5 m） ；流动相为甲醇0.36% 磷酸（体积比 4258） ；流速为 1.0 mL/min；检测波长为 276 nm；进样量为 10 L。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品适量，用甲醇制成每 1 mL 含黄芩苷 0.040 8 mg 的溶液，即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的供试品 0.25 g，精密称定，精密加入流动相 10 mL，称定重量，置超声仪中（功率500 W,频率 50 kHZ）超声 1 h，冷却至室温，用流动相补足重量，摇匀，滤过，用 0.45 m 微孔滤膜滤过，即可。 2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按处方比例取除黄芩外的其他药材，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。 2.3 系统适用性试验 精密吸取“2.2.1”项下溶液 10 L，按”2.1” 项色谱条件进样测定 5 次，记录黄芩苷峰理论塔板数。结果显示，黄芩苷峰理论板数为 3 928。 2.4 线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 含 40.8 g 的溶液。分别精密吸取 2、4 、6、8 、10 L，注入色谱仪，记录峰面积，以溶液质量浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为 A=52.61-0.3748(r=0.999 4)。结果表明4黄芩苷质量浓度在 0.081 60.408 0 mg/mL 范围内线性关系良好。2.5 加样回收率试验 取同一供试品（批号：070701）6 份，各约 0.25 g，精密称定，分别加入黄芩苷对照品适量，按“2.2.2”项方法制备溶液，再分别按“2.1”项色谱条件进样测定，结果平均回收率为 98.3%，RSD为 1.23%（n=6）, 见表 1。 2.6 重复性试验 取同一供试品( 批号 070701)，精密称取 1 份，按“2.2.2”项方法制备溶液，按“2.1” 项色谱条件重复进样测定 6 次，结果峰面积RSD 值为 1.30%（n=6）,表明方法的重复性良好。表 1 加样回收率试验结果 2.7 专属性试验 分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各 10 L，注入色谱仪，记录色谱图。结果阴性样品在与对照品相应的位置无相应的峰，表明阴性无干扰，见图 1。 2.8 稳定性试验 取同一供试品( 批号 070701)，按“2.2.2”项方法制备溶液，按“2.1”项的色谱条件，分别于 1、3、5 、 8、10 h 进样测定，结果峰面积 RSD 值为 0.35%，表明供试品溶液在 10 h 内测定结果稳定。2.9 样品含量测定 5分别按“2.2.2”项下操作，制备不同批号（20070101、20070102、20070103 ）的供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果 3 个批号样品所测得平均含量分别为 0.794、0.809、0.797 mg/粒。 3 讨 论 3.1 不同产地的黄芩紫外光谱吸收强度不一致，本品在264、 276 nm 处有最大吸收2-3 ，由于处方中的黄柏、大黄等成分在 264 nm 处有干扰，因此选择 276 nm 作为测定波长。 3.2 取同一供试品( 批号 070701)进行试验，考察流动相甲醇 磷酸的体积比分别为 4258、4060 时, 色谱柱分别为 Supelco C18 及 Tigerkin C18，柱温为 25 、30 时的 RSD 值，结果RSD 值分别为 1.25%、0.35%及 0.17%,表明结果均不受影响。 3.3 流动相曾选用甲醇 冰醋酸（体积比 3565） ，但分离效果不太好，改为甲醇0.36% 磷酸（体积比 4258） ，峰形、分离度、保留时间均较好，故本试验采用甲醇0.36% 磷酸为流动相。 【参考文献】 1 卫生部药典委员会.WS3-B-0793-91 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第四册S.北京：人民卫生出版社，1991. 2 国家药典委员会. 中华人民共和国药典： 2005 年版一部S.北京：化学工业出版社，2005：324. 63 孙文基.天然药物成分定量分析M.北京：中国医药科技出版社，1998.