Laboratory Medicine Department,Tianjin Baodi Hospital 天津市宝坻区人民医院检验科标准操作文件1葡萄糖（GLU）测定1.第 1 页页首内容葡萄糖（GLU）测定（HK 法）天津市宝坻区人民医院检验科操作规程文件号：CZGC/SH/014第四版共 3 页本规程每 2 年复审一次复审日期：2013 年 5 月 1 日复审人：陈玉良（签名）规程编写者：崔树明审批者：陈玉良批准日期：2013 年 5 月 6 日实施日期：2013 年 5 月 10 日文件分发部门和/或个人：检验科医务科；保管者：王文志（签名）院长办公室；保管者：刘会芹（签名）院档案室；保管者：刘会芹（签名）检验科；主任：陈玉良（签名）临床化学检验室：崔树明（签名）2.原理在己糖激酶催化下，葡萄糖在三磷酸腺苷（ATP）和镁离子存在的情况下被已糖激酶（HK）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和二磷酸腺苷（ADP ） 。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）使 G-6-P 氧化为 6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原（ NADH） 。在 340/380nm 的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。HK葡萄糖 + ATP -G-6-P+ ADPMg2+G6PDHG-6-P + NAD+- 6-磷酸葡萄糖+NADH + H + 3.样本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。3.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。3.3 标本类型：无溶血的血清或肝素化的血浆。3.4 标本稳定性：样本须在 30 分钟内分离血清或血浆，28下冷藏的血清或血浆可稳定 24 小时，-20冰冻起来可稳定 1 个月。3.5 样本处理：血标本应尽快送检验室。室温下放置 10-15min 后离心分离血清或血浆置样品杯中待测。Laboratory Medicine Department,Tianjin Baodi Hospital 天津市宝坻区人民医院检验科标准操作文件24.试剂4.1 试剂：本科使用使用华氏亚太医学科技有限公司葡萄糖检测试剂盒，LOT：041211 。此试剂盒为液体单一试剂，即开既用，无须特殊准备。4.2 试剂主要成分如下：三乙醇胺缓冲液 50mmol/LATP 1.5mmol/LNAD 0.7mmol/L己糖激酶 2.0KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 3.0KU/L注意：1. 此试剂为体外诊断用。2. 不要入口，吞下有害。3. 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。4.3 试剂的储存与稳定性：4.3.1 未开封的试剂于 2-8保存，稳定至有效期。4.3.2 已开封的试剂在阴暗处（2-8）可稳定一个月。4.3.3 避光保存，用后立即盖好封盖。4.3.4 发现试剂中有沉淀物禁止使用。4.4 校准血清：BECKMAN 公司提供，产品批号为 0115 。为冻干品，未开封者 2-8保存至有效期。临用前用 5ml 去离子水复溶，放置 30min，混匀待完全溶解后使用。复溶的血清 2-8可稳定 4 天。当有以下情况时需要重新定标：1换试剂批号或出现质控漂移时。2当仪器做完保养后。3重要零件更换时。4.5 质控品：RONDOX 公司提供，LECEL-2LEVEL-3，产品批号为 759UN 及 551UE。冻干品，未开封者 2-8保存至有效期。使用前用 5ml 去离子水复溶，30 分钟后轻轻混匀，待完全溶解后使用。复溶后的血清 2-8可稳定 4 天。每天随样品一起测定，测定值应在允许范围以内。5.仪器奥林巴斯 AU2700 全自动生化分析仪6 操作6.1 AU2700 开机6.1.1 检查 W1、W2 清洗液及稀释液有足够量，不足时补充；6.1.2 打开水机水源的自来水阀门，按水机前面板的（POWER ON）键，开启水机；6.1.3 按分析仪前面板的（POWER ON）键，开启分析仪主机；6.1.4 确认打印机为开机并处于联机状态，开启中文机；6.1.5 确认仪器上在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足时添加，并在系统状态下的试剂状态检查试剂。6.2 开始分析6.2.1 将兰架第一位置放水，黄架相应位置放入校准液；6.2.2 将兰架、黄架、白色标本架放入样品台上；Laboratory Medicine Department,Tianjin Baodi Hospital 天津市宝坻区人民医院检验科标准操作文件36.2.3 用鼠标点击在屏幕最上方（开始分析）图标；6.2.4 点击屏下方（EXIT）图标，退到主屏幕。6.3 分析参数样品体积 1.6ul 温度 37试剂 1 体积 240ul 方法 终点法试剂 2 体积 0.0ul 单位 mmol/L波长 340nm 定标方式 AB读点 0-27 完整的实验参数与操作程序可以在 AU2700 用户手册中查到。7 计算：结果无须手工计算，结果自动以 mmol/L 输入微机打印。报告结果：异常结果的处理程序：根据仪器参数的参考范围会打印异常标志，以“H ”、 “L”表示， “H”表示高于正常，“L”表示低于正常。报告格式：以自动打印的报告单报告8 操作性能8.1 准确度：不准确度5。8.2 精密度：批内瓶间差 CV3，批间差 CV5。8.3.线性范围：可达 40.0mmol/l。9.参考值参考范围：3.89-6.11mmol/l10.危急值：2.50 mmol/l 33.20 mmol/l10.临床意义：血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定。当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖。生理性高血糖见于：饭后 1-2h，摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。病理性高血糖：见于内分泌功能障碍引起的高血糖，如胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常，临床上称为糖尿病。颅内压增高时刺激血糖中枢，如颅内出血、颅外伤、脑膜炎等。病理性低血糖：见于胰岛 细胞增生或瘤等使胰岛素分泌增多，对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶机能减退、肾上腺皮质机能减退而使肾上腺皮质激素分泌减少。严重的肝病患者，由于肝脏贮存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效的调节血糖。11.操作过程注意事项：1.浓度换算为 mmol/l18=mg/dL2.试剂与样品的用量，可按比例改变。3.溶血、脂血、黄疸血可干扰结果，这时应将测试吸光度扣除样品空白吸光度。12. 参考文献1.叶应妩主编，全国临床检验操作规程（第二版） 。Laboratory Medicine Department,Tianjin Baodi Hospital 天津市宝坻区人民医院检验科标准操作文件42.OLYMPUS AU2700 自动生化分析仪操作手册。3.华氏亚太医学科技有限公司葡萄糖检测试剂盒使用说明书。