MS 培养基（PH=5.8）大量元素（*10 母液）KNO3 19gNH4NO3 16.5gKH2PO4 1.7gMgSO4.7H2O 3.7gCaCl2.2H20 4.4g微量元素（*100 母液）KI 83gH3BO3 620mgMnSO4.4H2O 2.23gZnSO4.7H2O 860mgNa2MoO4.2H2O 25mgCuSO4.5H2O 2.5mgCaCl2 2.5mg铁盐（*100 母液）Na2EDTA(乙二胺四乙酸钠) 3.73gFeSO4.7H2O 2.78g有机成分（*100 母液）肌醇 10g甘氨酸 200mg盐酸硫胺素 VB1 10mg盐酸吡哆醇 VB6 50mg盐酸 VB5 或 VPP 50mg各激素母液配方（0.1mg/ml）TDZ(脱叶灵) ：用 0.1mol/LNaOH 溶解 0.01g 脱叶灵，定容至 100mlNAA(萘乙酸) ：用乙醇溶解6-BA（ 6-苄氨基嘌呤）：用 0.1mol/LHCl 溶解 0.1g6-BA 粉末定容至100ml浓盐酸 120mol/L-0.1mol/L(1ml 浓盐酸稀释至 120ml)1L 母液中加 7g 琼脂，30g 蔗糖2014.7.6(AA:400ml): MS + TDZ0.2mg/L + NAA0.1mg/L +琼脂（10 瓶）800ul 400ul(AB:400ml): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L +琼脂（10 瓶）1.6ml 800ul(AC:300ml): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L（10 瓶）1.2ml 600ul果胶酶酶解液的配置查资料： （1）CPW 溶液： KH2PO3 27.2mg/LKNO3 101mg/LCaCl2.2H2O 1.48g/LMgSO4.7H2O 246mg/L KI 0.16mg/LCuSO4.5H2O 0.025mg/L(2)预处理液：600mmol/L 甘露醇，用 CPW 溶液配制（3）酶解液：0.5%果胶酶，3mmol/LMES, 用洗涤液配制（4）洗涤液：含 500mmol/L 甘露醇的 CPW 溶液，原生质体悬浮液，含620mmol/L 蔗糖的 CPW 溶液按 100ml 来配： KH2PO3 2.72mgKNO3 10.1mgCaCl2.2H2O 0.148gMgSO4.7H2O 24.6mgKI 0.016mgCuSO4.5H2O 0.0025mg甘露醇：10.92gMES: 0.059g果胶酶：0.5g实际实验数据：（1）CPW 溶液(按 500ml) KH2PO3 0.014gKNO3 0.051gCaCl2.2H2O 0.739gMgSO4.7H2O 0.126gKI 14.5mg 稀释取液CuSO4.5H2O 253mg 稀释取液（在后面的酶解液配制中该两种药品质量怀疑添加错误）(2) 酶解液的配制（取 100mlCPW 溶液加入） 甘露醇：10.921gTris: 5.241gMES: 0.0572g果胶酶：0.522g植物材料均取之于原留愈伤组织，在 AC 的 10 瓶液体培养基中每瓶加入 1ml 酶解液2014.7.7(AD:1L): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L +琼脂（30 瓶）母液：100ml母液:5ml1L 溶液 母液:200ul 蔗糖：30g，母液:5ml 琼脂粉：7gTDZ:4mlNAA:2ml2014.7.9(AE:2L): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L +琼脂（60 瓶）母液：100ml 母液 :5ml母液:200ul 母液 :5ml 1L 溶液 (2 份 ) 蔗糖： 30g 琼脂粉： 7g TDZ:4ml NAA:2ml(AF:): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L母液：30ml 母液:1.5ml母液:60ul 母液 :1.5ml 300ml 溶液 蔗糖：9g 6-BA:1.6mlTDZ:1.2ml NAA:600ul配大量元素母液 1L :KNO3 19gNH4NO3 16.5gKH2PO4 1.7gMgSO4.7H2O 3.7gCaCl2.2H20 4.4g2014.7.13母液：60ml 母液:3ml母液:120ul 母液 :3ml 600ml 溶液 蔗糖：18g 6-BA TDZ NAA按如下正交表添加激素：TDZ NAA 6-BA 0.2(10ul) 0.2(10ul) 0.5(25ul) 0.5(25ul)0.1(5ul) 1.0(50ul) 1.0(50ul) 0.2(10ul) 0.5(25ul) 0.5(25ul) 1.0(50ul) 0.2(10ul) 1.0(50ul) 0.2(10ul) 0.2(10ul) 1.0(50ul) 0.5(25ul) 0.2(10ul) 0.4(20ul) 1.0(50ul) 0.5(25ul)0.4(20ul) 0.2(10ul) 0.5(25ul)2014.7.16观察 7.13 日所做的 12 瓶正交液体实验结果如下： 褐变 溶液褐色 有沉淀 无生长 褐变 溶液褐色，较澄清 有沉淀 无生长 渐褐变 溶液黄褐色 沉淀较多 无生长 未褐变 溶液黄色 有沉淀 无生长 褐变 溶液褐色 有沉淀 无生长，死亡 未褐变 溶液黄色 有沉淀 有新的生长现象 褐变 溶液褐色 有沉淀 有新的生长现象 褐变 溶液褐色 有沉淀 无生长 未褐变 溶液黄色 有沉淀，较多 有新的生长现象 未褐变 溶液黄色 有沉淀 有新的生长现象其中，溶液较为澄清的是：；愈伤组织生长最好的是（AG:500ml）MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L+AC母液：50ml 母液:2.5ml母液:100ul 母液 :2.5ml 500ml 溶液 母液：1.25ml 蔗糖：15g TDZ:2ml NAA:1ml现发现母液不该加，母液的药品包含在母液里面所配制的 10 瓶液体转接 7.13 日的 10 瓶正交液体，此次的液体培养基中有白色小颗粒2014.7.18上午：（AH:500ml）MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L+AC母液：50ml 母液:2.5ml母液:100ul 母液 :2.5ml 500ml 溶液 母液（已感染）：1.25ml 蔗糖：15g TDZ:2ml NAA:1ml观察 7.16 日所转的 10 瓶液体实验结果如下： 未褐变 溶液黄色 无沉淀 无生长 褐变 溶液黄色 无细胞沉淀 无生长 渐褐变 溶液黄色 有细胞沉淀 无生长 渐褐变 溶液黄色 有细胞沉淀 无生长 未褐变 溶液黄色 无细胞沉淀 无生长 未褐变 溶液黄色 无细胞沉淀 无生长 未褐变 溶液黄色 无细胞沉淀 无生长 渐褐变 溶液黄褐色 无细胞沉淀 无生长 未褐变 溶液黄色 无细胞沉淀 无生长 未褐变 溶液黄色 有细胞沉淀 无生长备注：7 月 16 日培养基中所加的母液已变质，18 日观察的组织均无明显的生长现象。下午：(AI:300ml): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L+AC母液：30ml 母液:1.5ml母液:60ul 母液 :1.5ml 300ml 溶液 蔗糖：9g TDZ:1.2ml NAA:600ul2014.7.19（AJ:500ml ）MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L+AC母液：50ml 母液:2.5ml母液:100ul 母液 :2.5ml 500ml 溶液 母液：1.25ml( 不该加) 蔗糖：15g 琼脂：3.5gTDZ:2ml NAA:1ml植物材料为盆栽植物外植体2014.7.20（AK:500ml）MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L+AC母液：50ml 母液:2.5ml母液:100ul 母液 :2.5ml 500ml 溶液 母液：1.25ml （不该加） 蔗糖：15g 激素添加情况如下：NAA 6-BA TDZa1-a5 1.0(50ul) 0.2(10ul) 0.2(10ul)B1-b5 0.5(25ul) 0.5(ul)添加 PVP（500ml 培养液中加入 125mlPVP,100ml 水中溶解 0.5-1gPVP,46，水浴 5min）201