1 生物技术制药实验报告 人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的 表达与纯化 生物与制药工程学院 罗飞 2016年 7月 2日2 目录 第一节 引 言 .2 1.1 表皮生长因子(EGF)概述.2 1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质.2 1.3 EGF 的生物学效应及应用 .3 1.4 本实验课程设计的目的与内容.4 第二节 EGF 基因的合成与转化表达 .5 2.1.实验原理 .5 2.2 实验材料与方法 .6 2.2.1 试剂材料及试剂 .6 2.2.2 仪器设备 .6 2.3 实验方法 .7 2.3.1 试剂及培养基配制方法.7 第三节、实验前的准备 .7 3.1 目的基因 hEGF 的设计与合成 .7 3.2 载体选择 .9 3.2.1 载体选择主要考虑下述 3 点：.9 3.3 酶切位点设计 .10 3.3.1 载体的结构 .10 3.2.2 酶切位点设计注意以下 .11 3.2.3 酶切位点的确定 .11 3.3 引物设计 .12 3.3.1 PCR 引物设计的基本原则 .12 3.3.2 引物设计 .13 第四节、实验篇 .14 4.1 整体实验过程 .14 4.1.1 实验整体流程： .14 4.1.2 简化后的并行流程 .14 4.2、小组结果展示 .15 4.2.1 大肠杆菌转化实验结果 .15 4.2.2 XL10 质粒电泳结果显示.16 4.2.3 单酶切实验结果显示 .16 4.2.4 PCR 结果显示 .17 4.2.5 SDS-page 电泳结果展示 .18 4.3、个人负责实验模块 .18 4.3.1 提取重组质粒 .183 4.3.2 电泳检测质粒 DNA .19 4.3.3 双酶切并检测 .19 4.3.4 EGF 基因的 PCR 扩增验证.19 五、小组讨论篇 .21 5.1 质粒电泳检测讨论 .21 5.2 酶切条件讨论 .22 5.3 PCR 体系的讨论 .