- 1 - 目 录 主 要缩 略语英 文索 引 - 2 中 文摘 要 - 3 ABSTRACT - 5 正文 - 7 引言 - 7 实验材料 - 8 实验方法 - 10 实验结果 - 16 讨论 - 27 结论 - 30 参考文献 - 31 文 献综 述 - 35 硕 士期 间发表 、待 发表论 文 - 49 - 2 - 主 要缩略 语英文索 引 (ABBREVIATIONS) 缩略语 英文全称 中文译名 As atherosclerosis 动脉粥样硬化 BCA bicinchoninic acid BCA 蛋白定 量法 bp base pair 碱基对 cDNA complementary DNA 互补脱氧核糖核酸 CXCR4 CXC chemokine receptor 4 CXC 趋化因子受体 4 DAB 3,3-diaminobenzidine 二氨基联苯胺 DMSO dimethyl sulphoxide 二甲基亚砜 ELISA enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附 测定 HE hematoxylin and eosin 苏木精和伊红 MOD mean optical density 平均光密度 MTT methyl thiazolyl tetrazolium 甲基噻唑基四唑 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 PTCA percutaneous transcoronary 经皮腔 内冠 状动脉 成 Angioplasty 形术 PVDF Polyvinylidene fluoride 聚偏二氟乙烯 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 Rs restenosis 再狭窄 RT-PCR reverse transcription PCR 逆转录聚合酶链反应 RPM rapamycin 雷帕霉素 SDF-1 stromal cellderived factor alpha 基质细 胞衍生因子 1 SD Sprague-Dawley SD （大鼠） SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 VSMC vascular smooth muscle cell 血管平滑肌细胞 - 3 - 雷 帕霉素 对大鼠血 管平滑 肌细胞迁 移 及 SDF-1 表 达的影 响 中文摘要 目的： 探 讨 雷 帕 霉 素 抗 血 管 内 再 狭 窄 作用及其 与 基 质 细 胞 衍 生 因 子 1 （SDF-1 ）表达的相关 性 。 方法 ： 动物实验：20 只 12 周龄 SD 大鼠行颈总动脉球囊 拉伤，建立血管 内膜增生的动物模型， 随机分为对照组 （服用等体积的生理盐水） 和雷帕霉素处 理组 （ 口服雷帕霉素 ） ，4 周后处死动物。HE 染色观测血管病变， 免疫组化检测 增生内膜中 SDF-1 的表达，小室迁移系统观察 SDF-1 对平滑肌细胞迁移的影 响 ，酶联免疫吸附试验检测血清 SDF-1 水平 。细胞实验：原代培养 SD 大鼠 胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）， MTT 法检测不同浓度的雷帕霉素（0、1、 10 、 100ng/ml） 对 VSMC 增殖的影响， transwell 小室法检测不同浓度的雷帕霉素 （0、1、10、100ng/ml）对 VSMC 迁移的影 响，RT-PCR 和 Western blot 分别检 测不同浓度的雷帕霉素 （0、1、10、100ng/ml）对 VSMC SDF-1 mRNA 和蛋白 表达的影响。 结果 ： 球囊拉伤明显诱 导血管内膜增生， 增生 内膜中有明显的 SDF-1 的表 达，雷帕霉素能显著下调增生内膜 和血清中 SDF-1 的表达，且 SDF-1 能浓度 依赖性地诱导平滑肌细胞的迁移 ；MTT 法测定结果表明 1、10、100ng/ml 的雷 帕霉素都能显著抑制 VSMC 增殖 （p 0.05 或 p 0.01）； transwell 小室法检测结果 表明 1、 10、 100ng/ml 的雷帕霉素都能显著抑制 VSMC 迁移 （p0.05 或 p0.01）， 且呈浓度依赖性；RT-PCR 和 Western blot 检测 结果表明，1、10 、100ng/ml 的雷 帕霉素都能显著抑制 VSMC SDF-1mRNA 和 蛋白表达（p0.05 或 p 0.01） ，且 浓度依赖性明显。 - 4 - 结论 ： 雷帕霉素能抑制大鼠 颈总动脉拉伤引起的内膜增生； 雷帕霉素抑制大鼠 颈总动脉拉伤新生内膜和血清中 SDF-1 的表达； 雷帕霉素浓度依赖性地抑制大鼠主动脉平滑肌细胞的迁移和增殖； 雷帕霉素浓度依赖性地抑制大鼠主动脉平滑肌细胞 SDF-1 表达。 关 键 词 ： 雷帕 霉 素 ；内 膜 增 生 ； 基 质 细胞 衍生 因 子-1 ； 血 管 平 滑肌 细 胞 ； 迁移；增殖；表达 - 5 - Effect of Rapamycin on Stromal Cell-Derived Factor-1 Alpha Expression and Migration of Rat Vascular Smooth Muscle Cell ABSTRACT OBJECTIVE To investigate the anti-restenosis effect of rapamycin and its effect on stromal cell-derived factor 1 alpha(SDF-1). METHODS The animal models of rat carotid artery intimal hyperplasia was established with balloon injury. 20 twelve weeks old rats was randomly divided into two groups: baseline group (n = 10) and rapamycin treatment group (n = 10, 25 mg/kg Rapamycin). HE staining was used to observe vascular lesions. Immunochistochemistry staining was used to detect the expression of SDF-1 in lesions. The migration of smooth muscle cells induced by SDF-1 was observed with transwell. The levlel of blood serum SDF-1 was measured by ELISA, Proliferation of vascular smooth cells was measured by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT ） method, Effect of different concentration of rapamycin(0 、 1、 10、 100ng/ml) on serum induced migration of vascular smooth cells was tested by transwell, Measurement of SDF-1in mRNA and protein level was done by RT-PCR and western blot respectively.