薄层色谱法薄层色谱法Thin Layer Chromatograghy薄层色谱概论薄层色谱概论 制备薄层色谱制备薄层色谱 离心薄层色谱离心薄层色谱PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn薄层色谱概论薄层色谱概论薄层色谱薄层色谱(Thin- Layer Chromatography TLC) 是快速分离、定性和定量分析的一种非常重要是快速分离、定性和定量分析的一种非常重要 的色谱技术。的色谱技术。 将固定相涂布于玻璃，铝铂，塑料片等载板上将固定相涂布于玻璃，铝铂，塑料片等载板上 形成均一薄层。将被分离的物质形成均一薄层。将被分离的物质(溶液）点加溶液）点加 在薄层的一端，置展开室中，选用适当的展开在薄层的一端，置展开室中，选用适当的展开 剂，借毛细作用从薄层点样的一端展开到另一剂，借毛细作用从薄层点样的一端展开到另一 端，使性质不同的物质得以分离。端，使性质不同的物质得以分离。PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn一、一、TLC的分离原理的分离原理分离原理随所用固定相不同而不同，可分为分离原理随所用固定相不同而不同，可分为: (l) 吸附薄层色谱吸附薄层色谱(2) 分配薄层色谱分配薄层色谱(3) 离子交换薄层色谱离子交换薄层色谱(4) 分子排阻薄层色谱分子排阻薄层色谱(5) 亲和薄层色谱亲和薄层色谱PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn二、二、TLC 的技术参数的技术参数1. 比移值比移值Rf: 薄层色谱的基薄层色谱的基 本定性参数。本定性参数。2 2相对比移值相对比移值相对比移值相对比移值 ( (R Ri i，s s) ) 可大于或小于可大于或小于 l，但，但 其重复性及可比性均其重复性及可比性均 优于优于Rf值值. R Ri,si,s= = R Rf(f(i i) )/ / R Rf(s)f(s)PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn三、三、TLC的应用特点的应用特点： TLC不仅适合于小量样品的制备，也可用于较大量样不仅适合于小量样品的制备，也可用于较大量样 品的纯化。如果将薄层加宽加厚，把样品点成一条线，品的纯化。如果将薄层加宽加厚，把样品点成一条线， 能分离几百毫克样品。尤其是对于能分离几百毫克样品。尤其是对于Rf值相近的物质的值相近的物质的 分离。分离。 TLC除了用于分离外，更主要的是通过与已知结构化除了用于分离外，更主要的是通过与已知结构化 合物相比较，来鉴定少量有机混合物的组成。此外合物相比较，来鉴定少量有机混合物的组成。此外, 经常利用经常利用 TLC寻找柱色谱的最佳分离条件。寻找柱色谱的最佳分离条件。常用的常用的两种两种制备制备型型薄层色谱薄层色谱包括：包括： 传统的制备薄层法（传统的制备薄层法（PTLC），即流动相借毛细作用），即流动相借毛细作用 流经固定相。流经固定相。 借外力强制性的使流动相流经固定相，如离心薄层和借外力强制性的使流动相流经固定相，如离心薄层和 加压薄层。加压薄层。PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cnPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn制备薄层色谱制备薄层色谱 (Preparative Thin Layer Chromatography PTLC)一、固定相及载体一、固定相及载体 二，粘合剂与添加剂二，粘合剂与添加剂 三、薄层板的制备三、薄层板的制备 四，上样四，上样 五、展开剂选择五、展开剂选择 六、薄层展开六、薄层展开 七、检测方法七、检测方法 八、被分离物质的收集八、被分离物质的收集 九、九、PTLC分离化合物的纯化分离化合物的纯化PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn 经典的制备型薄层色谱，设备简单，经典的制备型薄层色谱，设备简单， 操作方便。操作方便。薄层色谱薄层色谱与常压柱与常压柱分离配分离配 合合使使用用，仍然在实验室中有较多的应，仍然在实验室中有较多的应 用。尤其是在一些没有现代分离手段用。尤其是在一些没有现代分离手段 的实验室中广为使用。的实验室中广为使用。PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn一、固定相及载体一、固定相及载体 1固定相：薄层色谱必须将被分离物质点于固定固定相：薄层色谱必须将被分离物质点于固定 相上进行分离，固定相要根据被分离化合物的性相上进行分离，固定相要根据被分离化合物的性 质来选择。质来选择。 分离亲脂性化合物分离亲脂性化合物常常选用硅胶，氧化铝，乙酰常常选用硅胶，氧化铝，乙酰 纤维素及聚酰胺。纤维素及聚酰胺。 分离亲水性化合物分离亲水性化合物常常选用纤维素，硅藻土及聚常常选用纤维素，硅藻土及聚 酰胺。但也有例外，脂溶性叶绿素在氧化铝及酰胺。但也有例外，脂溶性叶绿素在氧化铝及 纤维素上均能得到较好的分离。纤维素上均能得到较好的分离。 2载体：玻璃板，铝箔，塑料片等（吸附薄层）；载体：玻璃板，铝箔，塑料片等（吸附薄层）； 纤维素，硅藻土（分配薄层）纤维素，硅藻土（分配薄层）PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn4）硅胶硅胶薄层薄层板板的厚的厚度度普通薄层厚度为普通薄层厚度为250m,高效薄层板为高效薄层板为200m， 制备薄层板厚度制备薄层板厚度0.5- 2mmPDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn5）市售硅胶市售硅胶及及预预制制板板规格规格（符号及含义）（符号及含义） 硅胶硅胶G: 是含有是含有13煅石膏（煅石膏（gypsum）黏合黏合 剂的硅胶剂的硅胶 硅胶硅胶H：不含黏合剂的硅胶：不含黏合剂的硅胶 硅胶硅胶HF254：不含黏合剂，含有一种无机荧光：不含黏合剂，含有一种无机荧光 剂（如锰激活的硅酸锌），在剂（如锰激活的硅酸锌），在254nm波长紫外波长紫外 光下呈强烈黄绿色荧光光下呈强烈黄绿色荧光 硅胶硅胶GF254：含有煅石膏黏合剂，含荧光剂，：含有煅石膏黏合剂，含荧光剂， 在在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光 硅 胶硅 胶 HF254+366 ： 不含粘 合剂 ，在： 不含粘 合剂 ，在 254与与 366nm波长有荧光波长有荧光 硅胶硅胶PF254：制备型的，在：制备型的，在254nm有荧光（有有荧光（有 荧光剂，适用于不发光不易显色物质的制备与荧光剂，适用于不发光不易显色物质的制备与 分离）分离）PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 www.fineprint.cn2氧氧化化铝铝：在薄层中其应用仅次于硅胶。由：在薄层中其应用仅次于硅胶。由 氢氧化铝氢氧化铝400500煅烧而成。广泛的用煅烧而成。广泛的用 于萜类，生物碱，脂肪类，芳香类化合物于萜类，生物碱，脂肪类，芳香类化合物 的分离。因制法和处理方法不同可分为碱的分离。因制法和处理方法不同可分为碱 性，酸性，中性三类性，酸性，中性三类 碱性氧化铝： 碱性氧化铝：PH 910适于中性、碱性适于中性、碱性 化合物的分离化合物的分离 酸性氧化铝： 酸性氧化铝：PH 45适于酸性化合物的适于酸性化合物的 分离分离 中性氧化铝： 中性氧化铝：PH 77.5适于酸性或对碱适于酸性或对碱 不稳定的化合物的分离不稳定的化合物的分离 氧化铝因其含水量活性可分为五级。制备氧化铝因其含水量活性可分为五级。制备 型薄层