离子色谱法测定乳制品中的三聚氰胺含量离子色谱法测定乳制品中的三聚氰胺含量摘要：摘要：本文建立了牛奶和奶糖等乳制品中三聚氰胺含量测定的离子色谱方法。方法的线性 范围为 0.3-5.0 mg/L，检出限为 0.2 mg/L，RSD 为 2.8%。采用该方法测定了市售 6 种牛奶 和奶糖样品中三聚氰胺的含量，回收率在 92%-107%之间，RSD 为 1.0%-3.9%。结果表明 该方法简单快速、灵敏度高，适合乳制品等复杂基体中三聚氰胺的分析测定。 关键词：离子色谱法，乳制品，乳制品关键词：离子色谱法，乳制品，乳制品 前前 言言 三聚氰胺（Melamine, Mel） ，俗称“蛋白精” ，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，分 子式为 C3N6H6或 C3N3(NH2)3。三聚氰胺生产成本较低，可以显著提高蛋白质食品的蛋白 质检出值、增加食品的黏度，提高口感，这些因素驱动着不法厂商往蛋白质食品中添加三 聚氰胺。http:/www.sepu.net/Product.asp?action=search&dq=1860&proClass=0&textitle=三聚 氰胺2008 年底三鹿奶粉事件引起了社会各界对蛋白食品中三聚氰胺的广泛关注，卫生部等 五部门立即颁布了“2008 年第 25 号乳制品及含乳食品中三聚氰胺临时管理限量值规定” 的公告，规定婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为 1 mg/kg，液态奶(包括原料乳)、奶粉 及其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为 2.5 mg/kg。因此建立快速的检测方法以确保食品的 安全是十分有必要的。 目前食品中微量三聚氰胺的分析方法有质谱（MS） 、高效液相色谱、离子交换色谱、 离 子对色谱、气相色谱、毛细管电泳、电喷雾串联质谱等。离子色谱法具有分析速度快、灵 敏 度高、选择性好、多离子同时分析等优点，广泛应用于不同基体中阴阳离子的分析检测中。本文建立了牛奶等乳制品中三聚氰胺含量测定的离子色谱方法，测定了市售 6 种乳制品中 三 聚氰胺的含量。中国色谱网 www.sepu.net 1 实验部分实验部分 1.1 仪器 882 型离子色谱仪（瑞士万通，配有思维电导检测器、低脉冲串联式双活塞 往复泵和色谱数据处理工作站） ，高速离心机等，Anpelclean MCX 混合型强阳离子交换固 相萃取小柱(60 mg/3 mL)。 1.2 试剂 分析纯浓硫酸，甲醇，NaOH，醋酸，酒石酸，2,6-吡啶二羧酸，三聚氰胺 （Melamine, Mel）标准品，优级纯硝酸，水为超纯水。市售牛奶、奶糖和奶片样品。1000 mg/L Mg2+和 Ca2+储备液。 1.3 样品处理 量取 5.0 mL 牛奶（或 1.0 g 奶糖溶于 5 mL 水） ，加入 2 mL 3(v/v)的醋 酸，摇匀后于 4000 r/min 下离心 10 min。过滤，于上清液中加入 0.5 mL 3 mol/L 的 NaOH，混匀，离心 10 min，用 0.45 m 滤膜过滤。 依次用 3 mL 甲醇活化、3 mL 水平衡 MCX 固相萃取柱，滤液完全上样后，分别用 3 mL 水、3 mL 甲醇淋洗，用 3 mL 5%(v/v)氨化甲醇洗脱，收集洗脱液待测。 1.4 色谱条件 分离柱：Metroscp C2 (250 mm4.0 mm)；淋洗液：硝酸 (1.05 mmol/L)- 酒石酸 (1.0 mmol/L)-吡啶二羧酸（1.5 mmol/L） ；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：20 L。 2 结果讨论结果讨论 2.1 淋洗液优化淋洗液优化 淋洗液是离子色谱分析中最重要的一步。酒石酸、吡啶二羧酸等是常用的阳离子分析 淋 洗液。 由于 Ca2+、Mg2+容易对三聚氰胺的分离产生干扰，考察了不同浓度的硝酸、酒石酸和 吡啶二羧酸淋洗液体系对 Ca2+、Mg2+和 Mel 离子分析的影响。结果表明，采用 1.05 mmol/L HNO3 -1.0 mmol/L 酒石酸-1.5 mmol/L 吡啶二羧酸淋洗液时，Ca2+、Mg2+和 Mel 离子能得到较好分离。 2.2 样品处理条件优化样品处理条件优化 牛奶等乳制品中富含蛋白质、脂肪，容易影响分离。乙酸既有沉淀蛋白质的作用，且 在色谱柱上保留较弱。因此，本文采用乙酸溶液作为蛋白质的沉淀剂，以氢氧化钠作为 脂肪的沉淀剂。 http:/www.sepu.net/Product.asp?action=search&dq=1860&proClass=0&textitle=色谱柱分别加入 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL 的 3%(v/v)乙酸溶液入 5 mL 样品溶液中，考察 乙酸沉淀剂用量对乳制品中蛋白质的沉淀效果。结果表明醋酸沉淀剂的加入量在 2.0 mL 时 较为适合。分别考察了 0.3，0.5，0.8 mL 3 mol/L 氢氧化钠溶液对样品中脂肪的去除效果， 其中 0.5 mL 3 mol/L 氢氧化钠溶液的沉淀效果较好。因此，本文选择 2.0 mL 的 3%(v/v)醋 酸为蛋白质沉淀剂，0.5 mL 3 mol/L 氢氧化钠溶液为脂肪沉淀剂，1 mg/mL 的 Ca2+，Mg2+ 对三聚氰胺分析无干扰。 2.3 分析方法建立分析方法建立 配制 0.3-5.0 mg/L 系列浓度的标准溶液，在优化条件下对其进行分析定量，根据峰面积(Y)与浓度(X)的关系计算工作曲线，方法的线性方程为 Y=4.5210-3+3.4110-2 X，线 性范围 0.5-5.0 mg/L，相关系数 r 为 0.9995，检出限 0.2 mg/L 和精密度 RSD(n=6)为 2.8%。 2.4 实际样品测定实际样品测定 测定了市售 2 种牛奶、3 种奶糖和 1 种奶片共 6 种不同乳制品中三聚氰胺的含量，实 际样品中检测到的三聚氰胺在 2 mg/L 以下。图 1 为 0.5 mg/L 三聚氰胺标准样品及添加 5 mg/L 三聚氰胺的牛奶样品的色谱图。三聚氰胺的回收率为回收率在 92%-107%之间，RSD 为 1.0%-3.9%，满足分析要求。 3 结论结论 本文建立了牛奶等乳制品中三聚氰胺的离子色谱方法。测定了 6 种乳制品中三聚氰胺 的 含量，回收率在 92%-107%之间，RSD 为 1.0%-3.9%。结果表明该方法简单快速、灵敏度 高， 适合乳制品等复杂基体中三聚氰胺的分离分析。 参考文献：参考文献： 1李良，王晴，江勇等. 离子色谱法同时测定奶粉中亚硝酸根、硝酸根、氯离子和磷酸根. 理化检验化学分册. 2007，43(10)：835-837. 2 Huang GM, Xu W, Visbal-Onufrak, et al. Direct analysis of melamine in complex matrices using a handheld mass spectrometer, Analyst, 2010, 135(4): 705-711. 3 Ibanez M, Sancho JV, Hernandez F. Determination of melamine in milk-based products and other food and beverage products by ion-pair liquid chromatography-tandem mass spectrometry, Anal. Chim. Acta, 2009, 649(1): 91-97.