/观察 DNA和 RNA在细胞中的分布 0实验染色方法的比较研究李 云 王 芬 常 卿 罗公禄 (广东深圳实验学校高中部 518055)/观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布 0是高中生物学课程中一个很重要的实验, 可以直观地帮助学生认识细胞中 DNA 和 RNA的分布情况。但是, 利用教材提供的细胞生物学染色方法显示细胞内 DNA 与RNA, 在实际操作过程中出现的结果与理论上有较大的偏差。经对染料配制及染色过程进行探索并多次经比较实验, 获得了较为理想的结果。1 调整混合染色剂中吡罗红与甲基绿的浓度与比例通过多次调试与对比实验, 把 A液中吡罗红 G和甲基绿的浓度均改为 1%, 而且其比例为 1B1, 具体的改良配方为 B A液 B1%吡罗红 G水溶液 3mL+ 1%甲基绿水溶液 3mL+ 蒸馏水 6 . 25mL; B液 B1M 醋酸缓冲液( pH= 4. 8) 7mL,用时 A、 B两液混匀即可使用。分别用经典配方和改良配方对洋葱鳞茎内表皮进行染色, 实验方法如下:( 1) 取洋葱鳞茎内表皮细胞制片并水解: 在洁净载玻片上滴加 8 %的 HCl 1滴, 取小块洋葱鳞茎内表皮置于液滴中浸泡 5m in。(下转第 80页 )#38#生物学教学2010年 (第 35卷 )第 9期(上接第 38页 )( 2) 冲洗涂片: 用蒸馏水清洗材料 3次。( 3) 染色: 用吸水纸将载玻片上液滴吸干, 滴加 2滴吡罗红 - 甲基绿混合染色剂染色 5m in, 冲洗, 用吸水纸吸去水分, 盖片镜检。用教材提供的配方进行染色, 其显色结果为洋葱的细胞质呈紫红色, 细胞核呈深色; 用改良配方进行染色其显色结果为细胞质呈淡红色 (略带有蓝绿色 ), 细胞核呈蓝紫色, 绿色不明显。分析细胞核呈蓝紫色的原因可能在于吡罗红和甲基绿同核酸发生竞争性结合, 用 8%的 HCl处理可以使细胞核中的 DNA 发生解聚, 解聚的 DNA 也能与吡罗红结合呈现红色, 在同时染色的过程中两种染料颜色发生叠加, 容易造成细胞核被染成蓝紫色。2 染色顺序的改进采用混合染料染色时总会产生不同程度的覆盖与叠加作用, 所以采用分染的方法进行染色, 其方法与步骤为:( 1) 取洋葱鳞茎内表皮细胞制片: 切开洋葱鳞茎,用镊子轻轻撕取洋葱鳞片内表皮, 用剪刀剪下一小块置于载玻片上。( 2) 染色: 滴加 1滴 1%吡罗红于洋葱表皮上, 染色 1 2m in, 冲洗, 用吸水纸吸去水分, 室温晾干。( 3) 复染: 滴加 1滴 1% 甲基绿染液, 染 色 1 2m in。( 4) 冲洗, 晾干, 镜检。镜检结果为细胞质内的 RNA 被吡罗红染成紫红色, 细胞核中的 DNA 被甲基绿染成明亮的绿色, 达到了满意的效果。这种方法的优点是: 操作简单易行, 省时, 效果明显。在较短的时间内用吡罗红可以使和吡罗红结合力较强的 RNA 易于着色, 而和吡罗红结合力较弱的位于细胞核内的 DNA 则不被着色, 然后再用甲基绿进行染色即可得到清晰的显色效果。用分染的方法进行染色要注意: 严格控制分染的时间, 吡罗红染 1. 5m in, 甲基绿染 1m in, 经多次实验比较证明, 时间较长或较短均会影响染色效果; 染料使用顺序必须先用吡罗红染色, 后用甲基绿复染, 否则吡罗红的颜色会将甲基绿的颜色覆盖, 因为甲基绿结合后, DNA结构松散, 易被吡罗红的颜色覆盖, 使细胞核染成红色。