实验基础知识实验基础知识方法总结方法总结（一）制片技术（一）制片技术制片法制片法 1.玻片标本类型： （1）临时玻片标本：是实验中观察标本常采用的方法，保存时间不长 久是本法的缺点。如草履虫形态及应激性、口腔上皮细胞、植物细胞质壁分离及复原、洋 葱根尖有丝分裂、病原体观察等。（2）永久玻片标本：如洋葱根尖固定装片.蛔虫受精卵 固定装片等。 2.制片法：中学常用的四种制片法是石蜡切片法（如制作植物茎横断面的切片），涂片法 （如制作细菌、酵母菌、口腔上皮细胞临时装片），压片法（洋葱根尖有丝分裂、观察早 期花蕾花粉母细胞、洋葱鳞片叶表皮等临时装片的制作），徒手切片法（如桂花叶片横切） 。 （二）染色及染色剂（二）染色及染色剂：染色的目的在于使生物组织和细胞受染色剂的作用（化学反应或主 动吸收等），其各部分结构能清楚的显示出来，便于显微镜下识别和分析研究。 1.1.染料及染色剂染料及染色剂 （1）染料：是一类有色的有机物或无机物，它能使被染物呈现颜色。染料的分类有两种， 一种是按染料发色机团是阴离子还是阳离子分，是阴离子者为酸性染料，是阳离子者为碱 性染料。碱性染料是一种色碱盐，通常为氯化物（如亚甲基蓝）或醋酸盐（醋酸洋红）； 酸性染料为色酸盐，通常是钠盐、钾盐、铵盐。另一种是按染色对象分为胞核染料（龙胆 紫、醋酸洋红），胞浆染料（红墨水、碘液等），脂肪染料（苏丹、苏丹）等。 （2）染色剂：染料溶解在溶剂中而成的溶液。如碘液、醋酸洋红液、龙胆紫溶液、亚甲基 蓝溶液、红墨水等。 2.2.染色方法染色方法：根据材料是活的还是死的分为活体或半活体染色（如 0.01%亚甲基蓝溶液对 根染色根对离子的交换吸附实验、碘液对口腔上皮细胞的染色等）及死体染色（如根 尖有丝分裂实验中龙胆紫溶液对已解离的根尖的染色）。 3.3.生物实验中常用的溶液生物实验中常用的溶液：水、酒精、丙酮、汽油等。 4.4.介绍几种制剂的作用介绍几种制剂的作用 w.w.w.k.s.5.u.c.o.m （1）2，4-D 生长素类似物：有双重性，低浓度促进生长；高浓度抑制生长；培育无籽果 实。 （2）10-4M 的秋水仙素：a.诱发基因突变。b.使染色体加倍，培育多倍体。c. 单倍体育种， 培育纯种。（3）0.9%生理盐水（维持红细胞、口腔上皮细胞形态），10%KNO3溶液（植物细胞质壁分 离和自动复原），5%CaCl2溶液和 0.01%亚甲基蓝溶液（根对离子的交换吸附），15%盐酸 溶液（对根尖解离），丙酮、酒精（溶解色素），层析液（分离色素），龙胆紫溶液、醋 酸洋红液（根尖细胞染色体染色），30%蔗糖溶液（植物细胞质壁分离和复原） （4）紫外线：一定剂量作为能量、保温，高剂量导致细胞基因突变。 （三）实验方法（三）实验方法：是做好实验设计的关键所在，最常见的经典的实验方法汇总如下： （1 1）化学物质的检测方法）化学物质的检测方法 1） 淀粉碘液 2） 还原糖斐林试剂、班氏试剂 3） CO2 Ca(OH)2溶 液或酸碱指示剂或溴麝香草酚蓝水溶液（蓝变绿再变黄） 4） 乳酸pH 试纸 5）O2余烬木条复燃 6） 无 O2火焰熄灭 7） 蛋白质双缩脲试剂 8） 染色 体龙胆紫、醋酸洋红溶液 9） DNA二苯胺试剂（沸水浴蓝色）或甲基绿 10）脂肪苏丹或苏丹 IV 染液 11）酒精重铬酸钾（酸性条件）12）RNA吡罗红 13）线粒体健那绿 （2 2） 实验结果的显示方法实验结果的显示方法 1）光合速率O2释放量或 CO2吸收量或淀粉产生量 2）呼吸速率O2吸收量或 CO2 释放量或淀粉减少量 3）原子途径放射性同位素示踪法 4）细胞液浓度大小 质壁分离 5）细胞是否死亡质壁分离、亚甲基蓝溶液染色 6）甲状腺激素作用动物耗氧 量，发育速度等 7）生长激素作用生长速度（体重变化，身高变化）8）胰岛素作用动物活动状态 9）菌量菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度 10）大肠杆菌伊红-美蓝琼脂培 养基 （3） 实验条件的控制方法 1）增加水中氧气泵入空气或吹气或放入绿色植物 减少水中氧气容器密封或油膜覆盖或用凉开水 2）提供 CO2方法NaHCO3 3）除去容器中 CO2NaOH 溶液或 KOH 溶液 4）除去叶片中原有淀粉置于黑暗环境一昼夜 5）除去叶片中叶绿素酒精加热 6）除去光合作用对呼吸作用的干扰给植株遮光 7）如何得到单色光 棱镜色散 或彩色薄膜滤光 8）血液抗凝加入柠檬酸钠 9）线粒体提取细胞匀浆离心 10）骨的脱钙 盐酸溶液 11）灭菌方法微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料，灭菌方法不同：培养基用高 压蒸汽灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用 75%酒精消毒；整个接 种过程都在实验室无菌区进行。 （4 4）实验中控制温度的方法）实验中控制温度的方法 1）还原糖鉴定：水浴煮沸加热 2）酶促反应：水浴保温 3）用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热 4）DNA 的鉴定：水浴煮沸加热 5）细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养 六、练习六、练习 1.1.生物呼吸作用的底物（有机物）种类及含量的差异，会导致呼吸作用释放的 CO2与吸收的 O2比发生差异，这可用呼吸商表示：呼吸商（Q），为了测定种22COO呼吸作用释放的呼吸作用吸收子萌发时的呼吸商，现准备了 3 只玻璃瓶、瓶塞、带刻度的玻璃管、发芽的蚕豆种子、10% 的 NaOH 溶液、NaHCO3、清水等。1 号玻璃瓶的实验装置如图所示。（1）由于发芽蚕豆种子（已消毒）的呼吸作用，1 号玻璃瓶内的气体发生了变化，使得墨 滴向左移动，显然瓶内气体减少了，减少的气体是 。（2）1 号玻璃瓶内的气体变化还不足以求出发芽蚕豆的呼吸商，由此还要利用 2 号玻璃瓶 来测定发芽蚕豆呼吸作用过程中的某一种气体的变化。请根据 1 号图及题干中的器材与试 剂，说出 2 号图装置与 1 号图的不同之处 ，以此可以测出 量。（3）若 1 号装置测出的实验数据（墨滴移动量）为 X，2 号装置所测得的实验数据（墨滴 移动量）为 Y，则呼吸商计算式为： 如果呼吸商小于 1 时，说明 。 （4）为了纠正环境因素引起的实验测量误差，须设 3 号装置。应对 3 号装置作何处理：。 如 3 号装置的墨滴在实验后向右移动量为 Z，则氧气实际消耗量应为 。 （5）如果该发芽的种子已带一定量的小叶，要了解光照强度对植物光合作用的影响，并还 利用上述装置 1，则需要注意：1）实验的变量因素是 ；实验试剂选用 ，理由是 。2）在十分合适的某光照强度条件下，实验进行一定时间，测得的实验数据（墨滴移动量） 为 A，则该墨滴一定向 移动。 3）如要知道较高光照强度下真正的光合作用气体变化量，还需进一步的实验操作是。真正光合作用的变化量是 。 答案.（1）氧气 （2） 试管中的液体应用同体积的清水 种子吸收的氧气量与释放的 二氧化碳气体量的差值 （3） （X-Y）/X 呼吸底物中含脂肪 （4）用死种子，试管 中放等量的清水 X+Z （5） 1）光照强度 Na2CO3 2） Na2CO3 既能为植物光合作用提供二氧化碳气体，又 可以保持瓶中二氧化碳气体量不变，便于实验分析指标的单一。 2）右 3） 遮光一定 时间，记录墨滴移动刻度 A 遮光情况下测得的数据 2.（08 山东卷)番茄（2n=24）的正常植株（A）对矮生植株（a）为显性，红果（B）对黄果 （b）为显性，两对基因独立遗传。请回答下列问题： （1）现有基因型 AaBB 与 aaBb 的番茄杂交，其后代的基因型有 种， 基 因型的植株自交产生的矮生黄果植株比例最高，自交后代的表现型及比例为 。 （2）在 AA aa 杂交中，若 A 基因所在的同源染色体在减数第一次分裂时不分离，产 生的雌配子染色体数目为 ，这种情况下杂交后代的株高表现型可能是 。 （3）假设两种纯合突变体 X 和 Y 都是由控制株高的 A 基因突变产生的，检测突变基因 转录的 mRNA,发现 X 的第二个密码子中第二碱基由 C 变为 U，Y 在第二个密码子的第二个 碱基前多了一个 U。与正常植株相比， 突变体的株高变化可能更大，试从蛋白 质水平分析原因： 。 （4）转基因技术可以使某基因在植物体内过量表达，也可以抑制某基因表达。假设 A 基因通过控制赤霉素的合成来控制番茄的株高，请完成如下实验设计，以验证假设是否成 立。实验设计：（借助转基因技术，但不要求转基因的具体步骤） a.分别测定正常与矮生植株的赤霉素含量和株高。b. 。 c. 。 支持上述假设的预期结果： 。 若假设成立，据此说明基因控制性状的方式： 。 答案：(1)4 aaBb 矮生红果:矮生黄果3:1 (2)13 或 11 正常或矮生 (3)YY 突变体的蛋白质中氨基酸的改变比 X 突变体可能更多（或：X 突变体的蛋白质可能只 有一个氨基酸发生改变，Y 突变体的蛋白质氨基酸序列可能从第一个氨基酸后都改变） 。(4)答案一：b.通过转基因技术，一是抑制正常植株 A 基因的表达，二是使 A 基因在矮生 植株过量表达。 c.测定两个实验组植株的赤霉素含量和株高。 答案二：b.通过转基因技术，抑制正常植株 A 基因的表达，测定其赤霉素含量和株高。c.通过转基因技术，使 A 基因在矮生植株过量表达，测定其赤霉素含量和株高。 （答案二中 b 和 c 次序不做要求） 与对照比较，正常植株在 A 基因表达被抑制后，赤霉素含量降低，株高降低；与对 照比较，A 基因在矮生植株中过量表达后，该植株赤霉素含量增加，株高增加。 基因通过控制酶的合成来控制代谢途径，进而控制生物性状。 3科学家研究发现，癌细胞的无限增殖受某些调控基因的调控，该调控基因能激发所有动 物细胞大量增殖。为探究该调控基因是存在于细胞质中还是存在于细胞核中，科研人 员做了如下的实验设计，请你继续完成下列实验： 实验方案： （注：癌细胞能传代培养，细胞形态发生明显改变。如何观察细胞形态不作实验设计要 求）（1）用 分别处理癌细胞和小鼠肝脏细胞使之分散成单个细胞。（2）分别使单个癌细胞和单个肝脏细胞 。（3）将 重组融合得到细胞甲，将 重组融合得到细胞乙。 （4）取两只培养瓶分别编号 A、B，各加入等量的培养液。（5）取等量的重组细胞甲和重组细胞乙，分别放入到 A、B 两个培养瓶内进行培养。（6）观察并记录 A、B 两个培养瓶内的细胞形态变化。预期