不同提取方法对黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的影响 潘宏林 张 坦 赵元元(湖北中医学院,武汉 430061) 摘要 目的:比较两种不同提取方法对黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的影响。方法:分别用 大孔树脂法和回流提取法材制备供试品,点样于硅胶板上,展开、显色,再用反射法 双波长锯齿扫描(515、675),以外标两点法回归计算黄芪甲苷含量。结果: 大孔树脂法测得黄芪甲苷平均含量为 0 07971%,而回流提取法测得黄芪甲苷平均含 量为 0 1888%;平均回收率为 97 14%,=2 32%。结论:回流提取法处理黄芪药材 后,其中黄芪甲苷含量较大孔树脂法处理的黄芪药材高,且二者差异明显。 关键词 黄芪 黄芪甲苷 含量测定 皂化 大孔树脂 黄芪药材中含有多种皂苷,在索氏提取过程中,使用氢氧化钾甲醇溶液皂化,经加热回流处 理,极易将其他类型的皂苷乙酰化转换为黄芪甲苷,故按此法处理时测定的黄芪甲苷含量与药 典所规定的大孔吸附树脂法测得的含量之间有一定的差异。现报道如下。 1 仪器与试剂 - 9000 型双波长飞点薄层扫描仪(日本岛津);黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所);薄 层硅胶(青岛海洋化工厂);微量进样器(上海医用激光仪器厂);试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品 2. 10,用甲醇溶解,并定容至 2, 配制成每 1含 1. 05对照品溶液 2.2供试品溶液的制备 2.2 1 大孔树脂提取法:精密称取黄芪粗粉约 1 5,置索氏提取器中加甲醇 40,冷浸过夜,再 加甲醇适量,回流 4,提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水 10,微热使完全溶解,用水饱 和的正丁醇振摇提取 3 次,每次 20,合并正丁醇提取液,用氨试液提取 2 次,每次 20, 弃去氨液,正丁醇蒸干,残渣加水 35使溶解,放冷,通过101 型大孔吸附树脂柱(内径 1 5,长 12),以水 50洗脱,弃去水液,再用 40%乙醇 30洗脱,弃去 40%乙醇洗脱 液,继用 70%乙醇 50洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解,并转移至 2量瓶中,加甲醇 至刻度,摇匀,作为供试品,按相同操作处理配制供试品。 2.2 .2 回流提取法:精密称取黄芪粗粉约 1. 5,置索氏提取器中用 2%甲醇溶 液 20,冷浸过夜,再加热回流提取至无色,提取液回收并浓缩至干,残渣加水 10使溶解,用 乙醚振摇提取 3 次,每次 20,乙醚层用水 5洗,合并水液,用水饱和的氯仿 正丁醇(41)振摇提取 4 次,每次 20,合并氯仿 正丁醇提取液,用 0 5%溶液 20振摇 提取 1 次,碱水液用水饱和的氯仿 正丁醇振摇提取 2 次,每次 20,合并氯仿 正丁醇提取 液,蒸干,用甲醇溶解,并转移至 2量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品,按相同操作处 理配制供试品。 2.3 薄层扫描 2.3 .1 点样:供试品、:用微量点样器分别吸取供试品 10和 5,对照品溶液2和 4,交叉点于同一硅胶薄层板;供试品、:用微量点样器分别吸取供试品 8和 4,对照品溶液 2和 4,交叉点于同一硅胶薄层板。 2.3. 2 展开剂:供试品、使用的展开剂:氯仿：甲醇：水(1362)10以下放置过夜的 下层液;供试品、使用的展开剂:正丁醇 乙酸乙酯 水(415)的上层溶液 甲醇(71)。2.3. 3 展开方式:层析缸一侧槽中加入展开剂约 20,另一侧槽中放入点样后的薄层板,并 用氨水饱和 30,然后上行展开,展距 12。 2.3. 4 显色:喷以 10%硫酸乙醇溶液,在 100加热至斑点显色清晰,取出,在薄层板上覆盖同 样大小的洁净玻璃板,周围用胶布固定,待薄层扫描使用。2.3. 5 扫描:反射法双波长锯齿扫描,检测波长 515,参比波长 675,=3。 2.4 标准曲线的制作 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(1 05/)1 0、2 0、3 0、4 0、5 0分别点样于同 硅胶薄层板上,按上述薄层扫描法展开、显色、扫描,以测定的峰面值 为纵坐标,对照品的点样量为横坐标,绘制得标准曲线:=4695. 99+5085 .72(=0 996),结 果表明黄芪进样量在 1. 055. 25范围内,斑点峰面积积分值与对照品点样量呈良好的线 性关系。 2.5 稳定性试验 精密吸取样品供试品 3按上述薄层扫描法点样、展开、显色、扫描, 测定斑点峰面积,每隔 30扫描测定一次,连续测定 3,结果表明斑点峰面积积分值稳 定,=2 3%(=6),说明黄芪甲苷显色后在 3内稳定。 2.6 精密度试验 精密吸取同一样品供试品 3点样于同一薄层板上,按上述薄层扫描法 展开、显色、扫描,测定斑点峰面积积分值,结果表明同板的=2 1%(=6),异板的 =3 6%(=12)。 2.7 回收率试验 称取已知含量(含黄芪甲苷约 2.5)的供试品溶液 4 份,加入一定量的 对照品溶液(约 1 2),按“含量测定”项下的方法操作,依法扫描,每份平行测定两次,计算 回收率,结果平均回收率为 97 14%,为 2 32%。 2.8 样品含量测定 精密吸取按大孔树脂提取法、回流提取法制备的供试品,按上述 薄层扫描法点样、展开、显色、扫描,测定斑点峰面积,以外标两点法计算黄芪甲苷含量,结 果见表。