1教案首页教案首页第_10_次课 授课时间：2007 年 1 月 2 日1 月 5 日课程名称生物化学与分子生物学实验课年级2005专业、层次临床医学本科 授课教师符伟玉职称讲师课 型(大、小)小学时4授课题目（章、节）实验五 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 实验六 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 基本教材或主要参考书自编 生物化学与分子生物学实验指导 教学目的与要求：1、观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。2、掌握血糖浓度的测定方法。3、掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。4、掌握血糖浓度的正常参考值，了解血糖测定的临床意义。大体内容与时间安排，教学方法： 小结上次实验:PCR 扩增 5min1、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的原理 5min2、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的注意事项 5min3、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理 5min4、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的操作改动及注意事项 5min5、学生做实验 135min教学方法：实验+示教教学重点、难点：重点：1、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理2、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项难点：葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项教研室审阅意见：教研室主任签名： 年 月 日2基本内容辅助手段和时间 分配 一、实验原理 （一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 激素是调节机体血糖浓度的重要因素。胰岛素能降低血糖，肾上腺素等 激素能升高血糖。 本实验给两只家兔分别注射胰岛素或肾上腺素，取注射前、后兔的静脉 血，测定血糖含量，观察注射前后血糖浓度变化，从而了解胰岛素和肾上腺素 对血糖浓度的影响。（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 本实验是葡萄糖氧化酶 (GOD)和过氧化物酶 (POD) 相偶联发生的偶联反 应。 第一步：葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。第二步：过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色 原性氧受体 4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物(苯醌亚胺 非那腙)。二、操作步骤（改动） （一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 （二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 P9 表下改为：混匀，置 37水浴中，保温 15min，加 2ml 水混合后在波 长 505nm 处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。三、注意事项 （一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 1、剃兔耳毛时，先用水润湿后在剃毛，要求耳缘静脉四周要剃干净，否则取 血时易引起溶血； 2、选用腹部皮肤作胰岛素和肾上腺素皮下注射 ，一手轻轻提起腹部皮肤，另 一手持注射器以 45进针，针头不要刺入腹腔，更不要穿破皮肤注射到体 外。（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 1、最后加酶酚混合试剂，各管反应时间应一致； 2、因用血量甚微，操作中应直接加样本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管， 以保证结果可靠； 3、葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄 糖含量；4、严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。5min示意图5min化学反应式 流程图5min示教5min示教实验+示教 100min3小 结葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的线性范围至少可达 22.24mmol/L，回收率 94%105%， 批内 CV 为 0.7%2.0%。批间 CV 为 2%左右，日间 CV 为 2%3%。葡萄糖氧化酶法与己糖 激酶法比较，73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 8.31mmol/L，已糖激酶法均值 8.21mmol/L，相 关系数为 0.9986，回归方程 y=1.0026x2.29。本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。 误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素 C、胆红素和谷胱甘肽等，可 与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使 测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L，黄疽标本胆 红素浓度达 342mol /L，维生素 C 小于 30mg/L，均不影响测定结果。氟化钠浓度达 2g/L 不 干扰测定结果。标本中含尿素浓度达 46.7mmol/L，尿酸浓度达 2.95mmol/L，肌酐浓度达 4.42mmol/L。半胱氨酸浓度达 3.30mmol/L，甘油三酯浓度达 5.6mmol/L，胆固醇 4.40 mmol/L，对测定结果均无显著影响。 左旋多巴 100mg/L，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱 氨酸达 10mmol/L 时，产生相当 0.72mmol/L 葡萄糖的正误差。复习思 考题、 作业题葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量；而且严重黄疸、溶血及乳糜 样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。为什么 ？下次课 预 习 要 点实 施 情况及 分 析