植物病理学报 果轮纹病菌诱导产孢方法 冷伟锋 ，李保华 ，国立耘 ，董娟华 ，王彩霞 ，李桂舫 ，董向丽 ( 青岛农业大学植物保护学院，山东青岛266109； 中国农业大学植物病理系，北京100193) to feiaoiaiui 66109，a 00193，n to a of fsptO of he 0一fsp65 Vto on -5 Vof of Vfsp章编号：0412914(2009)055364)4 苹果轮纹病f sp是苹 果的主要病害之一，主要引起苹果果实的轮纹烂果 和枝干粗皮等症状。掌握苹果轮纹病发病流行规 律是制定病害防治措施的基础，研究病害流行规律 则需借助病原菌人_通过分离获得 病原菌的纯培养，再由纯培养获得大量的孢子是人 苹果轮纹病菌在黑暗条件下不能产孢 J，诱 导苹果轮纹病菌产孢的常规方法是在培养基上培 养病原菌，然后刮除气生菌丝，置于紫外光(254 黑光(365 照射 J。但这一方法诱导 产孢量少，且效果不稳定，难以满足大批量接种试 验的需求。因此，本研究设计了一系列诱导苹果轮 纹病菌产孢的试验，最终筛选出一种诱导轮纹病菌 大量产孢的有效方法。 1材料与方法 11 供试菌株 供试菌种为青岛农业大学植物病害流行实验 室保存的5个苹果轮纹病菌菌株，分离自山东莱阳 和栖霞两地苹果枝条和果实，试验前在上活化。寄主品种为富士、乔纳金和金帅(表1)。 12诱导产孢方法 将供试菌种活化后转接于5 培养45 d，待菌落生长至约占培养基面积的23 时，用于诱导产孢试验。诱导产孢所使用的培养温 收稿日期：200810回日期：2009金项目：公益性行业(农业)科研专项(通讯作者：李保华，教授，主要从事病害流行学研究；E5期 冷伟锋，等：苹果轮纹病菌诱导产孢方法 fspin 为25，所用黑光由l5 长 为365 光由l5 试验采用24 1)幼果接种：5月下旬至6月上旬，摘取未受 病虫危害、直径约23 冲洗干净后，以70酒精进行表面消毒。用直径 为5 度为 25 后，用同样规格的打孔器在菌落边缘 打取菌饼，并将菌饼接种到苹果幼果的圆孔中，菌 丝面贴近果实受伤组织。接种后的幼果置于密封 的保鲜盒内，25下保湿培养34 d，待果实表面 出现褐色病斑后，转人黑光灯下培养(距灯5 定期观察记录。 2)成果接种：从超市购买成熟的富士苹果，采 用与幼果接种同样的方法诱导孢子。 3)枝条接种：7月份，从果园内剪取2年生富 士苹果的枝条，截成23 常规方 法灭菌后，置于长有菌丝的培养皿内，待短枝上长 满菌丝后，随同培养皿一起转入黑光灯下培养，定 期观察记录。 4)黑光照射受伤菌丝：用接种环或刷子紧贴 培养基表面，在无菌条件下刮伤表面的气生菌丝， 除去大部分气生菌丝，然后置于黑光灯下照射处 理，定期观察记录。 5)黑光照射无伤菌丝：将长满菌丝的培养基 平板，直接在黑光灯下培养，定期观察记录。 6)接种环或刷子在无 菌条件下刮伤菌丝后，在日光灯下照射处理，定期 观察记录。 7)日光照射无伤菌丝：不破坏菌丝，在日光灯 下照射培养，定期观察记录。 2结果与分析 菌丝接种的苹果幼果培养34 色轮纹病斑，转入黑光灯下培养23 接 种部位开始，向外逐渐产生无色的小点，小点很快 变为黑色，即病原菌的分生孢子器，随后从分生孢 子器孔口溢出大量的分生孢子(图1)，形成白色的 分生孢子角，分生孢子角的长度可达0510 黑光灯下培养7 个接种点周围都能 产生数百个分生孢子器，密度平均达12个表2)。 接种到成熟果实上的轮纹病菌，在黑光灯下培 养23 种部位外缘也产生无色至黑色的 分生孢子器，但没有孢子溢出，接种苹果很快腐烂， 变软，不再产孢。 接种到苹果枝条上的轮纹病菌，黑光灯下照射 56 能产生大量分生孢子器，但只有少量 的分生孢子器溢出分生孢子形成分生孢子角。而 且，溢出孢子的分生孢子器数量，以及溢出孢子的 数量均远不及幼果。 在伤气 生菌丝后，在黑光灯下照射46 d，培养基表面产 生小点，即分生孢子器，部分孢子器溢出细长的分 生孢子角。未刮伤气生菌丝的培养平板，经黑光照 射培养57 落的边缘也能产生大量分生 孢子器，部分孢子器也溢出孢子，但其数量不及刮 伤菌丝后的多。刮伤菌丝的培养平板，在日光灯下 也能产生分生孢子器和分生孢子，数量却没有黑光 灯下培养产生的多。没有刮伤气生菌丝的培养平 板，在日光灯下培养，15 器 植物病理学报 39卷 A B ： of by of is 00； ：no O05)005)on ：of Vin 65 3讨论 采用伤口接种苹果幼果，在果实产生褐色病斑 后，置于黑光灯下培养，能诱导苹果轮纹病菌产生 大量分生孢子。每个幼果上产生的分生孢子可配 制300500 孢子浮液。同样的方法也能诱导苹果干腐病菌(生大量的分生孢子。 诱导孢子用的苹果幼果是5月下旬和6月上 旬疏果期疏下的富士幼果。这些幼果在o件下保存34个月后，接种病菌仍能大量产孢。 幼果上产生的孢子在o光保 存60 d，萌发率仍达90以上。在8月份采摘的 富士苹果果实上，也能诱导产孢，但越接近成熟期 的果实，产孢数量越少。对于苹果轮纹病菌能在幼 果上产孢，而在成熟果实上却很少产孢这种现象， 一种可能的解释为幼果含有病菌诱导产孢所需要 的物质；另一种可能的解释为幼果营养物质匮乏， 抑制了病菌的营养生长，进而促进了生殖生长，哪 种解释更接近实际，尚需深入研究。轮纹病菌的菌 5期 冷伟锋，等：苹果轮纹病菌诱导产孢方法 丝能够在幼果组织内生长扩展，而且能够产孢，这 表明苹果幼果轮纹病菌侵染后，果实不发病的主 要原因并非是菌丝生长受到抑制。 苹果轮纹病菌在苹果枝条上也能产孢，条件适 宜时也能产生较多的孢子。但大量的研究结果表 明，在枝条上诱导产孢，效果不稳定。黑光照射和 刮除气生菌丝都能诱导轮纹病菌产孢，但这种方法 诱导产生孢子的数量难以满足大批量接种试验需 求，而且效果不稳定。 研究表明，380510 数子囊菌和半知菌的产孢没有诱导效果，诱导真 菌产孢有效波长为230360 导菌在紫外光的 诱导下，发生光化学反应，产生一种与产孢相关的 紫外光吸收物质。本研究中，365 能诱导轮纹病菌在幼果上大量产孢，这与的研究结果不完全一致，是否不同种类的真菌诱 导产孢所需的最佳波长存在差异，尚需要进一步研 究。此外，实验室杀菌常用的254 和环境有较大损害，出于安全的考虑，本研究主 要采用了365 参考文献 1 H， Dof on 971，45(3_4)：311315 2， X， Qon of in v