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实验一实验室组成、主要设备使用方法、常用药剂配制及洗涤、灭菌一、目的 了解植物组织培养实验室的基本组成,掌握主要设备的使用方法及常用药剂的配制。 二、实验室的组成:参观本院的组织培养室 三、主要设备的使用方法(课堂现场操作) 纯水仪、高压灭菌锅、分析天平、微波炉、酸度计、超净工作台、摇床、生物显微镜、 体视显微镜等。 四、几种常用药剂的配制 (一) 用 95%酒精配制不同浓度酒精 学习配制 70%和 75%酒精 (二) 消毒剂1、20%次氯酸钠溶液 称取 20g 次氯酸钠用适量的去离子水(或蒸馏水)溶解,然 后用去离子水(或蒸馏水)定容至 100ml。2、0.1%升汞(HgCl2)溶液 称取 0.1g HgCl2用适量的去离子水(或蒸馏水)溶解, 然后用去离子水(或蒸馏水)定容至 100ml。 (三)洗涤剂 1、硫酸重铬酸钾洗液称取 10g 重铬酸钾加入蒸馏水 90ml,加热溶解冷却后,逐渐加入浓硫酸 175ml,放 入棕色试剂瓶备用(注意:切记不可将盛过酒精、甲醛等还原剂的药品试剂瓶直接放 入溶液中,因为重铬酸钾是一种强氧化剂,一旦被还原氧化,洗液变绿,就会失去洗 涤作用) 。 这些玻璃器皿必须用自来水冲洗干净并晾干后再浸入洗液。 (四)1 摩尔浓度 NaOH 和 1 摩尔浓度 HCl 配制摩尔浓度是指用 1 升(1000ml)溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液浓度。用 M 表示。 1、 NaOH 摩尔浓度(M) NaOH 摩尔质量=分子克数=40g 1MNaOH 是指 1000ml 溶液里含有 40 克摩尔质量的 NaOH,现要配制 100ml,即需 NaOH4 克。称取 NaOH4 克,用少量的去离子水(或蒸馏水)溶解,然后定容至 100ml。 2、 HCl 摩尔浓度 具体配制酸的摩尔浓度时,应考虑原浓酸的比重摩尔浓度。 V=要配制的摩尔浓度需配制体积原酸分子量/原酸百分浓度原酸的比重1000 配制 1.0MHCl100ml,即量取 38%,比重为 1.19 的 HCl8.06ml 加去离子水(或蒸馏水) , 定容至 100ml。 五、洗涤 (一) 新购置玻璃器皿的洗涤 因有游离碱性物质,使用前先用 1%稀盐酸浸泡一夜,然后用肥皂水浸泡、洗净,清水冲 洗,最后用蒸馏水冲洗一次,干后备用。 (二) 已用过玻璃器皿先将残渣除去,用清水洗净,再用热肥皂水或洗衣粉浸泡、洗净,清水冲洗干净,最后用蒸馏水冲洗一次,干后备用。 六、灭菌 (一) 器皿和用具常用灭菌方法: 1、 热压灭菌法 将洗净的培养器皿,用具等包好,放入高压灭菌锅内,121灭菌 20-30 分钟。 2、 干热灭菌法 洗净的玻璃器皿置于电热干燥箱中,15040 分钟或 120两个小时,待冷却后使 用。 (二) 接种室、培养室的灭菌 1、 用新洁尔灭、70%酒精擦拭超净工作台。 2、 接种前用 70-75%酒精喷雾,使飘在空气中的尘埃沉积下来。 3、 用紫外灯进行照射灭菌房间及超净工作台 20-30 分钟 4、 熏蒸用甲醛、高锰酸钾提前 1-3 天熏蒸密封房间: (三) 培养基灭菌(略) (四) 培养材料灭菌(略) (五) 工作人员无菌操作(略)思考题 怎样构建商品性生产的组培室?
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