1石牌广藿香与海南广藿香挥发油的指纹 图谱分析【摘要】目的建立广藿香挥发油的 GC 指纹图谱，鉴别不同品种、产地的广藿香。方法采用气相色谱法建立石牌广藿香、海南广藿香挥发油的 GC 指纹图谱，并用质谱对其成分进行确认。结果经过对二者指纹图谱特征的对比以及相似度评价，确立了石牌广藿香与海南广藿香的 7 个共有峰。结论该指纹图谱具有较强的专属性，可作为广藿香内在质量评价和鉴定依据。 【关键词】石牌广藿香海南广藿香 GC MS 指纹图谱挥发油 广藿香为唇形科刺蕊草属植物广藿香Pogostemoncablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分，按产地不同分为石牌广藿香及海南广藿香。广藿香原产于菲律宾，现分布于广东、海南、广西、台湾、云南等省区，均为栽培1。广藿香含挥发油2%2.8%，干叶含 4.5%，主要成分为广藿香醇（占 52%57%）、广藿香酮，及少量苯甲醛、丁香酚、 与 广藿香萜烯、丁香烯，等。石牌广藿香叶含挥发油0.3%0.4%，茎含 0.1%0.5%，广藿香酮为石牌产藿香油中的主要成分，也是主要的抗菌成分2。广藿香有芳香化湿、和中止呕、发表解暑之功效。石牌广藿香为文献记载的道地药材，其疗效效果明显优于海南广藿香2。对于广藿香的质量控制， 中国药典（2005 年版）采用显微、薄层鉴别方法，并作挥发油含量测定。本文运用 GC 色谱法对二者的挥发油成分进行指纹图谱分析，并运用指纹图谱相似度评价软件对指纹图谱的检测方法进行验证。 1 仪器与试药 1.1 药材 2分别从广东湛江，肇庆，广州广藿香 GAP 产业化基地和海南采收到 16 批次广藿香药材，药材粉碎成 10 目粗粉，经我公司检验室工作人员根据其产地和 2005版药典鉴别方法鉴定，有 9 批次为海南广藿香，7 批次是香雪制药 GAP 基地石牌广藿香，见表 1。正己烷等试剂均为分析纯。 表 1 样品来源（略） Tab.1Sourceofsample 12 仪器 Agilent6890N 气相色谱仪，手动进样器，检测器：FID；中药色谱指纹图谱相似度评价软件 2004 年版（中国药典委员会推荐，湖南中南大学中药现代化研究中心开发）。 2 指纹图谱的建立 21 色谱条件 GC 色谱条件：弹性石英毛细管柱（AgilentHP 5，30.0m320m0.25m）；进样口温度为 230；检测器温度为 250；分流进样（501）；程序升温：初始 70，3/min 升至 150，2/min 升至 170，5/min 升至 230，保持 11min；流速 1mL/min。 质谱条件：电离方式 EI,倍增器电压 1748mv，离子室温度 180。 22 挥发油提取方法 称取广藿香 100.0g，加 10 倍量的水，浸泡 1h，加沸石数粒，水蒸气蒸馏法提取 5h，收集挥发油。 23 供试品的制备 3精密称取广藿香挥发油 0.1g，用正己烷适量溶解，定容至 10mL，即得。 2.4 指纹图谱的建立 精密吸取供试品溶液 1L,注入气相色谱仪，记录 47min 的色谱图。并将所得质谱数据由质谱数据库检索鉴定，结果见表 2。 表 2 石牌广藿香挥发油 GC MS 成分鉴定及测定结果（略） Tab.2TheresultofidentificationwithPogostemonOil,scomponentsinShiPai 2.5 广藿香 GC 指纹图谱 石牌广藿香与海南广藿香指纹图谱见图 1。从图 1 可见，石牌广藿香与海南广藿香指纹图谱既有较大的相似性，又有其各自的特征性。为了表示图谱特征吸收峰，按占总石牌广藿香 GC 指纹图谱峰面积 2%以上的吸收峰的丰度确定 7 个吸收峰为广藿香指纹图谱的特征峰（见图 1），同一样品量下石牌广藿香图谱峰整体吸收强度明显低于海南广藿香；如果把图谱从约 31min 处前后分成两部分：前部分由一组密集的 1、2、3、4 号弱吸收峰组成，而后部分的 5、6、7 号强吸收峰充分说明了石牌广藿香与海南广藿香的特征性和专属性，其吸收丰度（以色谱峰面积计）分别占其总峰面积的 46.5%、32.3%和 5.9%，石牌广藿香图谱后部分由两个强吸收峰组成，且强度大致相等；海南广藿香图谱的后部分却只有广藿香醇一个强吸收峰（5 号峰），且峰强度极强，其吸收丰度占其总峰面积的 69.7%。对 7 个共有特征峰的 GC MS 分析结果见表 3。 A.石牌广藿香 B.海南广藿香 图 1GC 指纹图谱（略） Fig.1PogostemoncablininShipai 表 3 广藿香挥发油指纹图谱特征峰 GC MS 定性结果（略） Tab.3TheresultofidentificationwithPogostemonOil,speaksoffingerprint 43 方法学验证 按照指纹图谱相关技术要求，对广藿香指纹 GC 图谱检测方法进行重复性、精密度和稳定性考察，并采用相似性评价系统软件计算相关系数。 3.1 精密度试验 精密吸取同一样品溶液，连续进样 6 次，计算相似度 RSD 为 1.05%。 3.2 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液，分别在 0、1、2、4、6、24、48h 进样，计算相似度 RSD为 1.21%。 3.3 重复性试验 取同一批号的药材，按供试液制备方法及检测方法操作 5 次，计算相似度RSD 为 1.58%。 4 相似度评价 对同一品种广藿香的指纹图谱进行相似度比较，其中 9 批海南广藿香指纹图谱相似度分别为0.9735、0.8776、0.9472、0.9311、0.6012、0.9065、0.8823、0.8018、0.9501，7 批石牌广藿香的指纹图谱相似度分别为0.9892、0.9680、0.9936、0.9812、0.9586、0.94633、0.9115。以上结果可以看出：9 批海南广藿香相似度数据中有 8 批在 0.87 以上，说明同品种不同产地的海南广藿香药材也具有一定的特征性；7 批石牌广藿香均在 0.91 以上，说明同品种广藿香有较好的相似度；不同品种的广藿香指纹图谱相差较大，而且具有各自的特征性。 55 讨论 5.1 本研究共选择了 7 个化学成分作为指纹图谱特征峰，以保留时间为主要鉴别参数，但保留时间可能因仪器厂家、色谱柱等条件不同而产生较大的差异，导致指纹图谱的峰形会有所不同，本文采用同一系统做出来的图谱则有较好的重现性。5.2 采用 GC MS 分析广藿香挥发油中的化学成分3,4，不同品种的广藿香挥发油共有约 7 个共有成分： 愈创木烯、 广藿香烯、 愈创木烯、7,8 二羟基 4,5 二甲基 3 二氢萘、广藿香醇、广藿香酮、Aciphyllene 等，其中以广藿香醇和广藿香酮的含量最高。本研究的指纹图谱所选择的 7 个峰(包括主要成分或特征性成分)，作为图谱辨认的主要特征峰，能基本达到品种鉴定的效果，但并不能完全揭示不同产地、采集时间、部位、生长期等多种因素的影响的广藿香挥发油的特征，其共同特征还有待进一步深入研究。 （致谢：计算机辅助相似性评价系统软件由中南大学中药现代化研究中心梁逸曾教授提供） 【参考文献】 1黄泰康.常用中药成分与药理手册M.北京：中国医药科技出版社，1994：427-429. 2罗集鹏，冯毅凡，郭晓玲.石牌藿香的挥发油成分分析J中草药，2001,32(4)：300. 3罗集鹏,冯毅凡,郭晓玲,等.高要产广藿香挥发油成分分析J中药材，1999，22(1)：25. 4冯毅凡,郭晓玲,罗集鹏.雷州产广藿香挥发油成分的气相色谱一质谱分析J中药材，1999，22(5)：241.