单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版副标题样式*1第五节 色谱分离技术双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件特点色谱分离技术最大的特点：分离效率高能分离各种性质极其类似的物质；应用化学物质的分析鉴定的同时，可用于大量物质的分离纯化制备；如：胰岛素注射药品以凝胶色谱去除胰岛素中的二聚体双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件什么叫作色谱法：色谱法（chromatography）又称层析法，是利用混合物中各个组分的化学、物理性质的差异，基于被分离物质分子在两相（ 一为固定相，一为流动相）中分配系数的 微小差别进行分离。一、色谱分离技术的基本概念与理论双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件什么叫作色谱法：对一些结构性质相似化合物的分离，用经典的萃取法、沉淀法和结晶法等难以达到分离目的时，用色谱法往往可以收到很好的分离效果。 一、色谱分离技术的基本概念与理论双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件色谱分离过程：被分离的各组分受到固定相的作用力不同 （吸附、分配、分子间氢键结合力等）；在流动相与固定相发生相对移动过程中， 当待分离的混合物通过固定相时，由于各 组分的理化性质存在差异，与两相发生作 用的能力不同，在两相中的分配不同；色谱分离技术的原理：双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件色谱分离过程：与固定相相互作用力越弱的组分，随流动 相移动时受到的阻滞越小，向前移动的速 度快，反之，与固定相相互作用力越强的 组分，向前移动的速度越慢；进行分部收集流出液，即可得到各单一组 分，达到分离目的。色谱分离技术的原理：双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件固定相 流动相色谱柱被分离组分双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件是色谱分离过程的一个固定介质。 可以是固体物质(如吸附剂、凝胶、离子交换剂等）， 也可以是液体物质（如固定在硅胶、纤维素或树脂上的溶液）， 这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、分配、溶解、交换等作用； 它对色谱分离的效果起着关键的作用。1. 固定相双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件在层析过程中，推动固定相上待分离的 物质朝着一个方向移动的液体、气体或 超临界流体等都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析称为展层剂。它是层析分离中的重要影响因素之一。2. 流动相双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件保留时间 待分离物质从进样开始到组 分流出浓度最大时所经过的时间，称为该组分的色谱保留时间，用tR表示。保留体积 待分离物质从进样开始到组 分流出浓度最大时所用洗脱液的体积， 称为该组分的保留体积，用vR表示。3. 保留时间和保留体积双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件死时间 非保留溶质从进样开始到流 出色谱柱所经历的时间，称为死时间；用t0表示；死体积 非保留溶质从进样开始到流出色谱柱所用的洗脱液的体积，称为 死体积；用v0表示。4.死时间和死体积双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件调整保留时间 某种物质扣除死时间后的在色谱柱上的保留时间称为该物质的调整保 留时间；调整保留体积 某种物质扣除死体积后的在色谱柱上洗脱所用的洗脱剂的体积称为该 物质的调整保留体积。5.调整保留时间和调整保留时间双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件6.容量因子 表示某一溶质在色谱柱中任意位置达到 平衡后，该溶质在固定相中量和在流动 相中的量之比。7.塔板理论 色谱柱的理论塔板数越大，塔板高度越 小，色谱柱的分离效率越高。8.分配系数 在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值， 常用K表示。9.迁移率（比移值） 在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值，常用Rf表示。10.分辨率（分离度）11.操作容量（交换容量）在一定条件下，某种组分与固定相反应达到平衡时，存在固定相上的饱和容量。操作容量大，与固定相的亲和力越大，加入样量可越大。反之，相反。双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件正相色谱：是指固定相的极性高于流动相u在层析过程中，非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快， 先从柱中洗脱出。12. 正相色谱和反相色谱双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件反相色谱：是指固定相的极性低于流动相u在层析过程中，极性大的分子比极性 小的分子移动的速度快，而先从柱中洗 脱流出。12. 正相色谱和反相色谱双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件根据不同的标准可以分为多类： A.根据固定相基质的形式分类：纸层析： 以滤纸为基质；薄层层析：是将基质在玻璃或塑料等光滑表面铺成一薄层，在薄层上进行层析；柱层析： 将基质填装在管中形成柱形，在柱中进行层析。13. 层析法的分类双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件B.根据流动相的形式分类：液相层析：流动相为液体的层析；气相层析：流动相为气体的层析；13. 层析法的分类双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件吸附层析：以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸 附剂之间的吸附力不同达到分离目的；分配层析：是根据在一个由两相同时存在的溶剂系 统中，不同物质的分配系数不同而达到 分离目的；C. 根据分离原理的不同分类：双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件凝胶过滤层析：以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定 相，根据物质的分子大小进行分离的 一种层析方法； 离子交换层析：以离子交换剂为固定相，根据物质的 带电性质不同而进行分离的一种层析 方法；C. 根据分离原理的不同分类：双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件亲和层析：根据生物大分子和配体之间的特异性亲 和力，将某种配体连接在载体上作为固 定相，而对能与配体特异性结合的生物 大分子进行分离的一种层析分离。C. 根据分离原理的不同分类：色谱法液相色谱法 气相色谱法平板色谱法 柱色谱法纸 色 谱 法气 液 色 谱 法气 固 色 谱 法分 配 色 谱 法吸 附 色 谱 法离 子 交 换 色 谱 法排 阻 色 谱 法超临界流体色谱法亲 和 色 谱 法薄 层 色 谱 法双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件二、吸附色谱法(adsorption chromatography) 1.原理：吸附色谱为色谱固定相与流动相在 相对移动过程中，溶质和溶剂分子在吸附剂表面上的活性位点相互竞争的吸附过程。简单的说:依据吸附剂对混合物中各成分吸附性能的不同，使各成分得到分离。 n在天然有机化合物分离及精制工作中 ，吸附现象利用得十分广泛。其中又 以固-液吸附用得最多. 2.常用吸附剂： 硅胶、 氧化铝、 活性炭、 聚酰胺. 双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件3.固-液吸附可分为:物理吸附(表面吸附)：硅胶、氧化铝及活性炭化学吸附半化学吸附：聚酰胺层析双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件4.物理吸附的特点： 无选择性; 吸附与解吸是可逆的; 速度快; 实际应用最多。5.化学吸附的特点： 具有选择性； 吸附十分牢固,有时甚至是不可逆的。 化学吸附用得少. 双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件6.半化学吸附的特点： 介于物理吸附与化学吸附之间的吸附过程，其吸附力较弱。 半化学吸附有一定应用价值。如:聚酰胺与黄酮类、醌类等酚性化合物之间的氢键吸附属于半化学吸附。双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件液-固物理吸附色谱是运用较多的一种方法，u 特别适用于很多中等分子量的样品（分子 量小于1000的低挥发性样品）的分离，u 尤其是脂溶性成分。u 一般不适用于高分子量样品如蛋白质、 多糖或离子型亲水性化合物等的分离。双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件吸附色谱的分离效果，决定于u 吸附剂、u 溶剂、u 被分离化合物的性质这三个因素。双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件（一）吸附色谱分离中常用的固定相1.氧化铝：是由氢氧化铝直接在高温下脱水制得, 因在制备方法和处理方法的差别有n碱性n中性n酸性（一）吸附色谱分离中常用的固定相碱性氧化铝pH9-10：适合分离碱性和中性成分，如生物碱； 中性氧化铝pH7.5： 适合生物碱、挥发油、萜类、甾体等化合物； 酸性氧化铝pH4-5： 适合酸性物质，如酸性色素、某些氨基酸等；双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件氧化铝的吸附机理： 表面上有铝醇基（Al-OH）羟基的 氢键作用而吸附化学物质。双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件氧化铝的活性与含水量密切相关：活化：在高温下去除水分，含水量低，活性增强，称为活化；去活化：加入一定量的水，含水量高，活性降低，称为去活化。双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件a.硅胶，通常用SiO2 xH2O表示，是一种坚硬、无定型链状和网状结构的硅酸聚合物颗粒，约90的分离工作都可选用硅胶作为吸附剂。2. 硅胶双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件b. 具有硅氧交联的结构，表面有许多的硅醇基的多孔性微粒。硅醇基是硅胶具有吸附能力的活性基团。c. 被分离物质由于极性和不饱和程度不同和硅醇基相互作用的程度不同而达到分离目的。2. 硅胶双水相萃取脂肪酶课件斯巴鲁售后服务经理人培训他汀类药物的安全性及对策胎膜早破病人护理查房糖尿病自我管理课件d.硅胶的羟基存在于硅胶表面较小的空穴中 ，因此空穴较小而