1HPLC 法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含 量作者：余晓晖，赵磊，吴福祥，刘本亮 摘 要：目的：建立黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）测定盐酸小檗碱的含量。结果：盐酸小檗碱在 0.050.5 g 范围内呈良好的线性关系，r=0.9998，平均加样回收率为 96.9 %，RSD=1.43 %(n=5)。结论：本法操作简便，结果准确、可靠，可用于黄柏胶囊的质量控制。关键词：高效液相色谱法；黄柏胶囊；盐酸小檗碱黄柏胶囊是由黄柏制成的单味中药制剂，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等功效，临床上主要用于湿热泻痢、黄疸、带下、热淋等，收载于卫生部药品标准（中药成方制剂，第五册）。主药黄柏中的盐酸小檗碱为其抗菌成分之一1，其质量标准中仅有黄柏的定性鉴别，为有效控制该药品质量，本文采用 RP-HPLC 法测定了主药黄柏中的盐酸小檗碱的含量，该方法简便、准确、重现性好，结果较满意。1 仪器与试药SP 8810 高效液相色谱仪、SP 200 检测器、SP 4600 数据处理仪（美国光谱物理公司）、盐酸小檗碱（中国药品生物制品鉴定所）、乙腈（色谱纯试剂）、重蒸水，其他试剂均为分析纯。样品为市售品（批号：20020316、20010806、20010908）。2 方法与结果2-422.1 色谱条件C18 反相柱（10 m,4.6 mm250 mm，中国科学院大连化学物理所提供）；流动相：0.05 moL/L；磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（7624）（用磷酸调解 pH 值至 3.5）；紫外检测波长：270 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：室温；理论板数（n）按盐酸小檗碱计不低于 3000。在此条件下，样品中盐酸小檗碱与其他相关峰均能达到基线分离，盐酸小檗碱色谱峰的保留时间为 3.77 min，有关色谱图见下图。黄柏胶囊的 HPLC图图 1 盐酸小檗碱对照品色谱图图 2 样品色谱图注：A 盐酸小檗碱色谱峰2.2 线性关系考察精密称取盐酸小檗碱 4.580 mg，加适量稀乙醇制成 0.5 mg/mL 的溶液，取适量微孔滤膜过滤后，精密吸取 1 mL，置 10 mL 容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度、摇匀，精密吸取 1L、3L、5L、7L、10L，测定峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，进样量（g）为横坐标进行回归，求得回归方程为 Y=3592061X-30718.94，r=0.9998，表明盐酸小檗碱在 0.050.5 g 范围内线性关系良好。2.3 精密度试验精密吸取同一对照品溶液（50 g/mL）5 L，连续进样 5 次，盐酸小檗碱峰面积的 RSD=1.03 %。 2.4 重现性试验精密称取同一样品 5 份，按样品制备方法制备，各吸取 10 L 进样、测定，盐酸小檗碱含量的 RSD=2.25 %。2.5 稳定性试验3精密吸取同一样品溶液 10 L，每隔 2 h 测定一次，共测 6 次，盐酸小檗碱峰面积的 RSD=2.51 %（n=6）。2.6 回收率试验取已知含量的样品适量，分别精密加入盐酸小檗碱对照溶液(0.5 mg/mL)适量，按样品测定方法制备和测定，计算回收率，结果见表 1。 表 1 盐酸小檗碱回收率测定结果取样品溶液适量研细，精密称取样品 0.5121 g，置索氏提取器中，加(1100)盐酸甲醇 100 mL，加热回流提取至无色，放冷至室温，滤过，滤液回收甲醇至 5 mL,用稀乙醇定容到 100 mL 容量瓶中，摇匀，微孔滤膜滤过，精密吸取续滤液 1 mL 置 10 mL 容量瓶中，稀乙醇稀释至刻度，精密吸取该溶液 10 L 和 2.2项下的对照品溶液 5 L、7 L，按上述色谱条件测定，用外标两点法计算盐酸小檗碱的含量，结果见表 2。 表 2 含量测定结果3 讨论测定盐酸小檗碱含量的方法较多，有高效液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法等。本文采用 HPLC 方法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱含量，方法简便、快速、结果可靠，可作为该制剂定量控制指标。参考文献：1肖培根. 中药志M. 北京:化学工业出版社，2001：668.2周元瑶，李芳.用反相高效液相色谱法考察盐酸黄连素的质量J.药物分析杂志，1984，4（3）：13.43李宝明，何丽一.高效液相法测定制霉灭滴胶囊中盐酸小檗碱的含量J.药物分析杂志，2000，20（2）：128.4张旭香，张兴运，许志红.薄层扫描法测定长安升白颗粒中小檗碱的含量J.中草药，2002，33（7）：619.