1C-erbB-2 在乳腺癌中的表达及其与血管 生成的关系【摘要】 目的：探讨原癌基因 C-erbB-2 在乳腺癌组织中的表达及其与肿瘤微血管密度（MVD)之间的关系。方法：采用 S-P 免疫组化法检测 215 例乳腺癌组织中 C-erbB-2 基因蛋白表达和 MVD 值。结果：C-erbB-2 的表达与肿瘤微血管密度密切相关，而且呈正相关关系（r=0.48,P0.05)。结论：C-erbB-2 在乳腺癌血管生成中起重要作用，C-erbB-2 可作为判断肿瘤生物学行为及预后的指标。 【关键词】 乳腺癌；原癌基因 C-erbB-2；血管生成；免疫组织化学Abstract Objective: To study the expression of Proto-oncogene C-erbB-2 in the tissues of breast cancer and to find out its relationship with microvessel density (MVD). Methods: The S-P immunocytochemical staining was used to determine the expression of C-erbB-2 and MVD, respectively,in 215 cases of breast cancer. Results: There was closely relationships between the expression of C-erbB-2 and MVD in breast cancer. In addition, there was a positive correlation between them (r=0.48,P0.05). Conclusion: The overexpression of C-erbB-2 plays crucial roles in angiogenesis in breast carcinoma and the expression of C-erbB-2 can be taken as an index for judging carcinoma biology, its prognosis and, thus, a guidance to clinical treatment as well.Key words Breast carcinoma; Proto-oncogene C-erbB-2; Angiogenesis; Immunocytochemistry原癌基因 C-erbB-2(HER-2/neu)在多种上皮肿瘤，尤其是乳腺癌、卵巢癌、胃癌等多种癌症中扩增及过度表达，与患者预后密切相关1-2。实体肿瘤的生长和转移依赖于血管生成，而血管生成依赖于多种相关因子的诱导和调节，肿瘤血管生成是调节血管生成的正、负性因子之间相互作用的结果，作为判断血管生成强度指标之一的微血管密度和血管生成正性调节因子之间呈显著的正相关性。因此，微血管密度（microvessel density ，MVD）值可以反映血管生成强度。本研究采用2免疫组化方法对乳腺癌组织 C-erbB-2 表达、MVD 值进行相对定量观察，探讨 C-erbB-2 基因和乳腺癌血管生成之间的关系。1 资料与方法1.1 病例与标本 搜集 1999 年 2 月至 2004 年 4 月包头医学院第一附属医院手术治疗并经临床病理证实的原发性乳腺癌组织石蜡包埋标本 215 例，患者均为女性，年龄 2978 岁，平均 53.5 岁。组织病理学均为浸润性导管癌，所有病例均行根治性手术，术前未经抗癌治疗。1.2 主要试剂 链霉素抗生物素过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒（Ultrasensitive,S-Pkit)、CD34 单克隆抗体、C-erbB-2 单克隆抗体均购自福州迈新生物技术开发公司，所有抗体均为即用型；抗原修复缓冲液为 0.01mol/L 枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）。1.3 方法 本文所有组织均为石蜡包埋，做厚度为 4m 的连续切片。免疫组织化学染色采用 S-P 法，DAB 显色，免疫组织化学染色过程中以 PBS 代替一抗作阴性对照，用已知的 CD34 阳性、C-erbB-2 阳性的乳腺癌组织切片做阳性对照。1.3.1 肿瘤内微血管计数与分级 CD34 抗体在乳腺癌间质血管内皮细胞（EC）的胞质内出现棕黄色颗粒为阳性，不着色为阴性，对照 Weidner3报道的方法，在 100 倍光镜下挑选微血管分布最密区域，200 倍视野下计数 5 个不重复视野中被 CD34 染成棕黄色的血管数目，取其均值作为 MVD，依每个视野微血管密度不同将切片分为三级：级为 050 个，级为 51100 个，级100 个。31.3.2 C-erbB-2 计数与分级 参照第四军医大学赵彤等免疫组织化学反应结果的判断标准，采用着色强度积分与数量积分相加的方法，C-erbB-2 阳性物质定位于细胞膜。将阳性细胞百分比分成五级：无阳性细胞为 0 分，阳性细胞25%者为1 分，26%50%为 2 分，51%75%为 3 分，75%为 4 分。着色强度：无色为 0分，淡黄色为 1 分，棕黄色为 2 分，棕褐色为 3 分。着色强度积分与数量积分相加：01 分为（），23 分为（+），45 分（+），67 分（+）。1.4 统计学处理 研究结果利用 SPSS11.0 统计软件，应用方差进行统计学分析。2 结果MVD 值在 C-erbB-2 阴性和三个阳性组间有差异（P0.05)，阳性组 MVD 值高于阴性组，且呈正相关（相关系数 r=0.48，P0.05），见表 1。表 1 C-erbB-2 阳性和阴性间 MVD 值比较（略）*与 C-erbB-2 阴性比较 P0.05;*与 C-erbB-2(+)比较 P0.05;*与 C-erbB-2(+)比较 P0.05 3 讨论C-erbB-2 基因是定位于染色体 17q21 编码分子量为 185kD 的跨膜蛋白，该蛋白与表皮生长因子受体（EGFR）具有高度同源性，故称人表皮生长因子相关基因。正常情况下处于非激活状态，参与细胞生长、分化的调节。当受到体内外某些因素的作用而激活时，具有肿瘤转化活性，其方式主要是基因扩增和蛋白过度表达，在细胞信号传递系统中起桥梁作用，刺激细胞增生、浸润和转移，与乳腺癌等多种肿瘤的生物学行为有关4。4恶性肿瘤的生长、侵袭及转移过程受到多种因素影响，其中肿瘤诱导的血管生成反应与其生物学行为关系密切，血管生成受血管生成因子的调控，血管内皮生长因子（VEGF）是诱导血管生成的主要调节因子，作为判断血管生成强度指标之一的 MVD 和血管生成正性调节因子之间呈显著的正相关性5，因此，MVD 可以反映血管生成强度。有研究表明，C-erbB-2 可以上调黏附分子 E-cadheris 和整合素 的表达5。而 E-cadheris 和整合素 可以上调 VEGF、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等相关因子的表达6-7 。这可能是 C-erbB-2 促进肿瘤血管生成的部分原因。Alicia 等8用突变的 C-erbB-2 转化 N1H3T3 成纤维细胞，显著诱导VEGF/血管通透因子(VPF)，这一作用因缺氧而进一步增强。用抗 C-erbB-2 抗体处理 C-erbB-2 过表达的乳腺癌细胞株 SKBR-3，使 VEGF/VPF 蛋白表达随剂量增加而降低。说明 C-erbB-2 至少部分通过对 VEGF/VPF 强烈的上调作用刺激肿瘤新生血管生成介导致癌作用。本研究发现，MVD 值在 C-erbB-2 阴性和阳性组间差异有统计学意义(P0.05)，说明 C-erbB-2 可以通过上调血管生成相关因子的表达而促进肿瘤的血管生成。目前认为，肿瘤的发生发展是多基因协同作用的过程。本研究结果显示，C-erbB-2 与乳腺癌组织血管生成有密切关系，其机制有待于进一步探讨，在临床病理工作中开展 C-erbB-2 检测对指导临床治疗、预测患者的预后有十分重要的意义。【参考文献】1 吴唯,唐中华,易文君,等. c-erbB-2 基因在青老年乳腺癌中的表达及其意义J.中国普通外科杂志，2003, 12(5):377-379.52 Shou Y, Hiyano T, Gong Y, et al. Influence of angiogenetic factors and matrix megallo- proteinases upon tumour progression in non-small-cell lung cancer J.Br J Cancer,2001,85(11): 1706-1712.3 Weider N. Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumorsJ.Breast Cancer Res Treat,1995,36(2):169-180.4 赵光明,邢征英,吴洪波,等.浸润性乳腺癌 c-erbB-2,nm23 的表达及意义J.中国误诊学杂志,2004,4(6):884-885.5 Toi M, Inada K, Suzuki H,et al. Tumor angiogenesis in breast cancer:its importance as a prognostic indicator and association with vascular endothelial growth factor expressionJ.Breast Cancer Res Treat, 1995,36:193.6 Laughner E,Taghavi P, Chiles K,et al.HER-2(neu) signaling increases the rate of hypoxia-inducible factor lalpha(HIF-lalpha) synthesis:novel mechanism for HIF-l- mediated vscular endothelial growth factor expression J. Mol Cell Biol,2001,21(12): 3995-4004.7 Giatromanolaki A, Koukourakis MI, Sivridis E, et al. Relation of hypoxia inducible factor 1( and 2( in operable non-small cell lung cancer to angiogenic/molecular profile of tumors and survivalJ. Br J Cancer, 2001,85(6):881- 890.8 Alicia ZS, Blanca OS,Mariana GH, et al. Rapid production of candida albicans chlamydospores in liquid media under various incubation conditionsJ. Nippon Ishinkin Gakkai Zasshi, 2006,47(3):231234.