1Caveolin1 在骨肉瘤中的表达及其意 义【摘要】 目的 观察 Caveolin1 在骨肉瘤中的分布和表达情况，分析 Caveolin1在骨肉瘤临床诊断、治疗及预后评价中的意义。方法 采用免疫组织化学 SP 法检测 39 例骨肉瘤组和 22 例良性骨肿瘤中 Caveolin1 的表达，镜下观察Caveolin1 在肿瘤组织中的分布，应用自动图像分析检测 Caveolin1 的表达情况。结果 Caveolin1 表达于所有标本的肿瘤微血管和小血管内皮上，Caveolin1 表达于大多数骨肉瘤的肿瘤细胞，定位于细胞膜和胞浆，但在良性骨肿瘤中表达很微弱。Caveolin1 阳性表达率在骨肉瘤组中为 59.0，在良性骨肿瘤中为 18.2，两组间具有显著性差异(P0.01)，有统计学意义，表明Caveolin1 在骨肉瘤中高表达。Caveolin1 的表达与骨肉瘤肿瘤体积、病理分型和患者的性别无关(P0.05)，与骨肉瘤的组织分化和是否转移有关(P0.05)。结论 Caveolin1 在骨肉瘤中高表达原因不明，其可能是促进骨肉瘤发生发展的一个潜在因素，也可能作为骨肉瘤治疗的新靶点。 【关键词】 Caveolin1；骨肉瘤；免疫组织化学The Expression and Clinical Significance of Caveolin1 in OsteosarcomaGUO Guiming，LV Zhi，LIU Yanbin(Department of Orthopaedics，the Second Affiliated Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China)Abstract：Objective To investigate the expression of Caveolin1 in osteosarcoma and analyse its significance in diagnosis，treatment and prognosis of osteosarcoma.Methods Caveolin1 was detected by SP immunohistochemical method in 39 cases of osteosarcoma and 22 cases of benign bone tumor，the distribution of 2Caveolin1 in tumor tissues was observed under optical microscope，and the expression level of Caveolin1 was detected by autoimage analysis.Results Caveolin1 was strongly expressed in the endothelium of microvessels and small vessels in all cases，and mainly localized in the cell membranes and cytoplasm of the most osteosarcomatous tumor cells，Caveolin1 was expressed weakly in benign bone tumor.The positive rate of Caveolin1 in osteosarcoma groups(59.0) was significantly higher than that in benign bone tumor(18.2)(P0.05).The expression of Caveolin1 was correlated with the metastasis of osteosarcoma and tumor tissue differentiation，but not associated with the patientsgender，tumorsize and the pathological type.Conclusion The reason why the most osteosarcomatous tumorcells strongly expressed Caveolin1 was unknown；Caveolin1 is a potential factor during osteosarcoma growth and invasion；Caveolin1 may be a new target for osteosarcomatous therapy.Key words：Caveolin1；osteosarcoma；immunohistochemistry骨肉瘤是常见的源于间叶组织的恶性肿瘤，以能产生骨样组织的梭形细胞为特征，占原发骨肿瘤的 10，占原发骨恶性肿瘤的 20，75的病人年龄在 1030 岁，是严重影响青壮年身心健康的恶性疾病1。Caveolin1 是 Caveolae 的重要结构蛋白，参与了 Caveolae 的形成，以及细胞增殖、分化、凋亡和血管生成信号通路的调控，与肿瘤的发生、发展和转移有密切关系，目前认为 Caveolin1 同时具有肿瘤抑制因子和促进肿瘤侵袭转移的双重作用。笔者尚未见国内外有关Caveolin1 在骨肿瘤中的研究报道，本研究应用超敏免疫组化 SP 法，检测骨肉瘤和对照组中 Caveolin1 的分布和表达情况，旨在分析 Caveolin1 对骨肉瘤的临床诊断、治疗及预后的意义。1 材料与方法1.1 研究对象和试验分组 试验组：选取山西医科大学第二医院骨科和病理科2003 年 6 月至 2007 年 3 月的骨肉瘤石蜡包埋标本 39 例；对照组：选取近四年骨软骨瘤石蜡包埋标本 11 例和骨纤维结构不良石蜡包埋标本 11 例。所有标本均 4 m 厚连续切片，分别进行 HE 染色和免疫组化染色。由两位有经验的病理医师再3次阅片，复核病理诊断。1.2 实验试剂 兔抗 Caveolin1 多克隆抗体(sc894)，购自 Santa Cruz Biotechnology 公司；超敏 SP(兔)免疫组化试剂盒(KIT9706)，酶底物显色剂(DAB0031)，均购自福州迈新生物有限公司。其余由病理科提供。1.3 实验方法 采用免疫组织化学 SP 法检测 Caveolin1 在骨肉瘤和骨软骨瘤、骨纤维结构不良中的表达，整个操作按照超敏 SP(兔)试剂盒所附说明书进行。所有标本以 PBS 替代一抗作为阴性对照，以已知 Caveolin1 强烈表达的肾脏穿刺组织作为阳性对照。1.4 结果判定 为反映标本高倍视野下 Caveolin1 染色总程度，利用 ImagePro Plus6.0 行自动图像分析，选择平均光密度(mean denesity，MD)为指标。MD 只作定性分析，以 MD0.017 7 为表达阳性，MD0.017 7 为表达阴性。1.5 统计学处理 采用 SPSS11.5 统计软件，计数资料用 2 检验或 Fisher 精确概率检验法进行统计学处理，结果均以 P0.05 为差异显著性检验水平。2 结 果2.1 Caveolin1 在标本中的表达和分布 免疫组化染色显示：a)Caveolin1 表达于所有标本的肿瘤微血管和小血管内皮上；b)Caveolin1 表达于大多数骨肉瘤的肿瘤细胞，免疫产物呈棕黄色，定位于细胞膜和胞浆，阳性细胞在肿瘤组织中呈散在分布，无一定规律；c)Caveolin1 在良性骨肿瘤中无表达或表达很微弱(见图12)。2.2 Caveolin1 在骨肉瘤和良性骨肿瘤中的表达 Caveolin1 在骨肉瘤和良性骨4肿瘤中的阴性表达见表 1。22 例良性骨肿瘤中，Caveolin1 阳性表达率为18.2；39 例骨肉瘤中，Caveolin1 阳性表达率为 59.0，两组间具有显著性差异(P0.01)。2.3 Caveolin1 与骨肉瘤患者各项临床病理指标的关系(见表 2)表 1 Caveolin1在骨肉瘤和良性骨肿瘤中的表达由表 2 可见，Caveolin1 的表达与骨肉瘤患者的性别、肿瘤体积和病理分型无关(P0.05)。在 39 例骨肉瘤病例中，高分化为 12 例，Caveolin1 阳性表达 4 例，阳性表达率为 33.3；而中和低分化为 27 例，Caveolin1 阳性表达 19 例，阳性表达率为 70.4。经统计学分析，两者之间Caveolin1 的表达有统计学差异(P0.05)。肿瘤转移组 Caveolin1 阳性表达率为 91.7，肿瘤无转移组表达率为 44.4，两者之间的差异具有统计学意义(P0.05)。3 讨 论Caveolin1 于 1992 年由 Rothberg 等2首先发现，分子质量为 2124 KDa，修饰于 Caveolae 的内表面，基因定位于人类染色体 7q31.1，有三个外显子，在大多数细胞中表达。Lofthouse 等3发现，格根包尔氏细胞中也有 Caveolin1 的表达。众多研究表明 Caveolin1 是一种直接参与细胞生长和增殖的负调控基因。Caveolin1 在正常组织中高表达，而乳腺癌、肺癌、宫颈癌和结肠癌中Caveolin1 表达明显下降，甲状腺滤泡状癌中甚至无 Caveolin1 表达。Kai4应用原位杂交方法检测癌组织和正常组织的 cDNA 后显示，卵巢癌标本中的Caveolin1 表达下调，同时检测了卵巢癌 OVXAR3 细胞中 Caveolin1 的表达，体外实验表明 Caveolin1 抑制了细胞的存活，所以暗示 Caveolin1 很可能在人卵巢癌上皮中是一种抑制基因。Franco 等5证实，Caveolin1 的缺失能导致表5表 2 Caveolin1 与骨肉瘤各项临床病理指标的关系皮细胞的过度增殖，进而加速皮肤癌的发生。Engelman 等6研究认为，Caveolin1 就是 7 号染色体 D75S22基因座上的肿瘤抑制基因。与上述报道相悖，少数研究发现某些肿瘤组织中 Caveolin1 呈高表达。Yang 等7研究了大鼠原发性前列腺癌及转移性前列腺癌的多个癌细胞株，发现在大鼠正常前列腺上皮细胞中 Caveolin1 表达微弱；在原发性前列腺癌细胞中其表达加强，呈胞浆弥漫性；而在转移性前列腺癌细胞中其表达更强，呈浓集颗粒状。同样，在人前列腺上皮细胞中 Caveolin1 表达呈阴性，人原发性前列腺癌细胞偶见颗粒状浓集表达。Kato 等8观察分析了 130 例手术切除的食道鳞癌标本，发现Caveolin1 的免疫反应性与肿瘤的病理分级、淋巴结转移及远处转移有关；Caveolin1 阳性组的生存率比阴性组要低，Caveolin1 的高表达可作为淋巴结转移及预后差的指标之一。另外，在肾癌、膀胱癌中 Caveolin1 表达也增高，甚至部分学者发现某些结肠癌和乳腺癌中 Caveolin1 表达也增高，这提示Caveolin1 增高与肿瘤发生、发展有关。Caveolin1 在骨肉瘤中的表达到底是增高还是降低，目前国内外尚未见到报道。本实验为了研究 Caveolin1 在标本组织中总情况，采用了较人工数肿瘤细胞更先进的方法自动图像分析法9。结果 Caveolin1 在骨肉瘤中的阳性表达率(59.0)明显高于对照组，有统计学意义(P0.01)，提示 Caveolin1 可能是促进骨肉瘤发生和发展的一个潜在因素。本研究还发现 Caveolin1 的表达与肿