资源预览内容
第1页 / 共5页
第2页 / 共5页
第3页 / 共5页
第4页 / 共5页
第5页 / 共5页
亲,该文档总共5页全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述
1七福饮对 A1-42 诱导的老年性痴呆模 型大鼠学习记忆能力及海马区生长抑素 表达的影响作者:兴桂华,林春荣,胡 南,牛英才,孙玉荣【摘要】 目的 探讨七福饮对老年性痴呆(AD)模型大鼠学习记忆能力的影响及作用机制。方法 将 84 只 SD 大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组和七福饮高、中、低剂量组,采用立体定位仪将凝聚状态 -淀粉样蛋白 1-42(A1-42)定向注入海马区制备 AD 动物模型。通过 Morris 水迷宫的定位航行试验检测各组大鼠学习记忆的能力。采用免疫组织化学 SP 方法和病理图像定量分析技术检测海马区生长抑素(SS)蛋白的表达水平。结果 与假手术组比较,模型组平均逃避潜伏期显著延长(P0.05),大鼠海马区 SS 蛋白表达也明显降低(P0.05);与模型组比较,七福饮各剂量组2.15、4.30、8.60 mg/(kgd)平均逃避潜伏期显著缩短(均 P0.05)。与假手术组比较,模型组 SS 蛋白表达明显降低;与模型组比较,七福饮各剂量组 SS 蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论 七福饮可能通过上调 AD模型大鼠海马区 SS 蛋白的表达,进而改善 AD 大鼠的学习记忆能力,发挥防治 AD的作用。 【关键词】 老年性痴呆;七福饮;海马;学习记忆能力;生长抑素;动物模型Abstract:Objective To observe the effects of Qifuyin on learning and memory ability and expression of somatostatin in hippocampus on Alzheimers disease (AD) rats. Methods SD rats were randomly divided into blank control group, sham operation control group, model group, donepezil group and Qifuyin group. The AD model was established by microinjection of A1-42 into the bilateral hippocampus. The learning and memory ability of rats were evaluated with a series of tasks to find a hidden platform in Morris Water Maze. The expression levels of somatostatin in hippocampus 2were measured by immunohistochemical SP techniques. Results In the place navigation test, the mean escape latencies of the model group was obviously increased compared with sham operation control group (P0.05). The mean escape latency of Qifuyin 2.15, 4.3, 8.6 mg/(kgd) group was obviously increased compared with the model group (P0.05). The expression of somatostatin in hippocampus of Qifuyin 2.15, 4.30, 8.60 mg/(kgd) group was obviously increased compared with sham operation control group and model group. Conclusions Qifuyin has an effect of improving learning and memory ability of AD rats, which is possibly due to the promotion of the expression of somatostatin in hippocampus.Key words:Alzheimers disease;Qifuyin;hippocampus;learning and memory;somatostatin;animal model老年性痴呆亦称为阿尔茨海默病(Alzheimers disease, AD),是一种原因未明的以进行性痴呆为主要临床表现的大脑变性疾病,其主要特征表现为记忆障碍和认知功能障碍。近年来大量研究认为,生长抑素(somatostatin,SS)神经递质是记忆的物质基础之一,在学习记忆等智能活动中发挥重要的调节作用。也有研究资料表明,AD 病理改变严重的脑区 SS 含量下降最明显,而脑中 SS 含量下降越多其痴呆症状越重1。七福饮原方出自张景岳景岳全书,临床研究表明,其对痴呆病有确切的疗效2-3。本实验采用海马立体定向注射凝聚态 -淀粉样蛋白 1-42(A1-42)建立 AD 动物模型,以七福饮进行药物干预,观察其对 AD 模型大鼠海马组织中 SS蛋白的表达及学习记忆能力的影响,以探讨七福饮防治老年性痴呆机制。1 实验材料1.1 动物SD 雄性大鼠 84 只,鼠龄 812 周,体重(28010)g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号 SCXK(京) 2002-0003。1.2 药物与主要试剂3药材购自齐齐哈尔市药材公司中药饮片厂长春堂药店,严格按照七福饮经典处方比例用量配备,采用水提醇沉法制备浓缩液。取经加工炮制的标准中药饮品加蒸馏水 6 倍量水液煎煮 2 次,每次 1.5 h,合并滤液;加入乙醇使醇含量达 65%,冷藏 24 h,醇液滤过,滤液回收乙醇至无醇味;合并药液滤过;冷藏放置,视无沉淀析出;添加蒸馏水,调 pH 值至 6.57.0,并调整至相当于含原药材 2 g/mL;精滤、灌封、灭菌即得。盐酸多奈哌齐片由法国 PFIZER PGM 公司制造,产品批号 5136903。A1- 42为北京中杉金桥生物技术有限公司产品,使用前用无菌生理盐水稀释成 10 g/L,37 孵育 1 周,使其变为聚集状态。Rabbit Anti-SS 购于武汉博士德生物工程有限公司。SP 即用型试剂盒、DAB 显色剂均购于福州生物技术公司。1.3 主要仪器MORRIS 水迷宫系统(中国医学科学院药物研究所),江湾型 C 立体定向器(中国人民解放军第二军医大学)。2 实验方法2.1 分组及造模4将 84 只 SD 雄性大鼠经适应性饲养 1 周,随机分为空白组、假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组(0.33 mg/kg)和七福饮 3 个剂量组2.15、4.30、8.60 mg/(kgd),每组 12 只。经用 1%戊巴比妥钠(40 mg/kg)将实验大鼠麻醉后,立体定向仪固定头部,备皮消毒,沿颅顶中线作 2 cm 切口,分离骨膜暴露头骨,于前囟向后 3.0 mm、中线左右各旁开 2.2 mm 处,用牙科钻打开颅骨,垂直进微量进样器针 2.8 mm,将 1 L4溶液缓慢注入,注射时间为 5 min。留针 5 min。模型组、盐酸多奈哌齐组、七福饮各剂量组左右侧海马各注射 1 L A1-42(10 g)溶液,假手术组注射 1 L 生理盐水。2.2 给药造模后 3 d 开始给药,盐酸多奈哌齐组、七福饮各剂量组按剂量每日 1 次灌胃给药,其余 3 组给等体积生理盐水,共 4 周。2.3 Morris 水迷宫实验给药结束后进行 Morris 水迷宫行为测试。水迷宫为一不锈钢圆形水池,直径150 cm,高 60 cm,内置有机玻璃平台,平台高 40 cm,底面为 6 cm10 cm。在水池壁东、西、南、北部位分别标明入水点。将平台放在西南象限正中距池壁 22 cm 处,迷宫中含牛奶液面高于安全平台 1 cm,水温(221),加适量奶粉使水呈乳白色,训练期间环境安静,迷宫外参照物不变。Morris 水迷宫实验前 5 d 为定位航行试验,每日从东入水点头朝池壁将大鼠放入水池,使其自由游泳,自动摄像系统记录大鼠寻找平台的时间(逃避潜伏期),设定60 s 为最长逃避潜伏期,60 s 后自动停止记录。 2.4 生长抑素蛋白免疫组化检测行为学测试完成后,随机选 6 只大鼠断头处死,取出脑组织,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片厚约 3 m。采用免疫组化 SP 方法,严格按试剂说明书进行操作,主要操作步骤,滴加的 Rabbit Anti-SS(稀释度 1100),4 冰箱过夜。滴加生物素化二抗工作液 37 孵育 20 min。滴加连酶卵蛋白 37 孵育 20 min。DAB 显色。苏木素复染,中性树胶封片。用 PBS 代替一抗作阴性对照。光镜下观察,并用 Motic Med 56.0 数码医学图像分析系统计算积分光密度。3 统计学方法所有数据运用 SPSS13.0 软件包进行处理,数据以xs 表示。定位航行实验各组逃避潜伏期差异采用重复测量多因素方差分析,组间两两比较采用 SNK 检验。SS 阳性目标积分光密度之间的差异采用方差分析,进一步 post-hoc 分析采用 SNK检验,P0.05 为差异有统计学意义。4 结果(见表 1、表 2)表 1 七福饮对 AD 模型大鼠定位航行实验逃避潜伏期的影响,表 2 七福饮对AD 模型大鼠海马区 SS 表达的影响(略)。5 讨论智能减退是老年性痴呆主要的临床特征,而学习记忆力为其中最基本的要素。因此,对学习记忆进行评价是观察老年性痴呆动物模型及药物治疗效果的重要指标之一。Morris 水迷宫实验主要应用于检测大鼠空间学习记忆功能,已被广泛用于研究 AD 海马记忆损伤的效果和药物疗效的评价5。本实验 Morris 水迷宫实验结果显示,随着训练次数的增加,各组大鼠的逃避潜伏期均逐渐缩短,但模型组大鼠逃避潜伏期在第 2、3、4、5 日明显长于假手术组,模型组大鼠在水迷宫中学习寻找平台的能力明显降低,表明模型大鼠学习获取能力受损。而七福饮能够改善模型大鼠的学习障碍,增强 AD 大鼠的学习记忆能力。SS 是含有 14 个氨基酸残基的神经肽,具有激素和神经递质的双重作用,在丘脑6及海马中含量最高,生物学功能上与学习记忆功能密切相关6。SS 对学习记忆进行调控可能通过以下两条途径:一是通过兴奋 SS 能神经元而直接调控;二是可调节脑内胆碱能系统、单胺类递质系统等其他神经递质的释放从而影响学习记忆功能7。研究资料表明,AD 病理改变严重的脑区 SS 含量下降最明显,而脑中 SS 含量下降越多其痴呆症状越重2。因此,SS 神经元的变化可作为判断 AD 病变程度的指标之一。临床上西医治疗 AD 以改善脑细胞代谢和改善脑循环为主要手段,目前尚无治疗 AD 的特效药物。本实验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马区 SS 蛋白表达明显减少(P0.05),七福饮各剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠 SS 蛋白表达明显增强(P0.05),提示七福饮可能通过上调 SS 蛋白表达,改善 AD 大鼠的学习记忆功能。【参考文献】1 Kumar U. Expression of somatostatin receptor subtypes (SSTR1-5) in Alzheimers disease brain:an immunohistochemical analysisJ. Neuroscience,2005,134(2):525538.2 祝华君.七福饮加减治疗血管性痴呆 30 例J.浙江中医杂志,20
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号