1鹿藿醇提取物的体外杀精及抗菌作用【摘要】 目的研究鹿藿醇提取物的体外杀精及抗菌作用。方法（1）鹿藿醇提取物按照国际计划生育基金会认可的杀精子实验方法，对 10 只小鼠附睾精子悬液和 10例人精液进行体外杀精实验。 （2）用试管法及琼脂平皿稀释法观察鹿藿醇提取物对几种临床常见致病菌的体外抑菌作用。结果鹿藿醇提取物对小鼠和人精子最低杀精浓度分别为 50 和 100 mg/ml；对标准菌金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌 MIC（试管法）分别为 1.0，1.0，4.0，4.0 mg/ml。对临床分离菌金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌 MIC（试管法）分别为 0.5，2.0，8.0 mg/ml。结论 鹿藿醇提取物对小鼠和人精子有一定杀精作用，对临床常见致病菌有比较强的抗菌作用。 【关键词】 鹿藿醇提取物 体外杀精 抗菌作用Study on the Spermicidal and Antibacterial Effect of Ethanol Extract of Rhynchosia volubilis Lour roots in vitroWANG Jian gang, XIONG Cheng liang,WANG Xue ting,GUO Xian feng,LI Yan,WANG Juan rui1.Family Planning Research Institute, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China；2.Department of Pharmacology, Medical College, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, ChinaAbstract：ObjectiveTo study the spermicidal and antibacterial effect of ethanol extract of Rhynchosia volubilis Lour roots. MethodsEthanol extract of Rhynchosia volubilis Lour roots was applied in vitro in spermicidal tests with 10 mouse sperm samples and 10 human sperm samples. The antibacterial effects of ethanol extract of Rhynchosia volubilis Lour roots on staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, and pneumobacillus were observed. ResultsThe lowest spermicidal 2concentration of ethanol extract of Rhynchosia volubilis Lour roots on mouse and human sperm were 50mg/ml and 100mg/ml, respectively.The lowest inhibiting concentration(MIC，tube testing method) of ethanol extract of Rhynchosia volubilis Lour roots on staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, and pneumobacillus were 1.0，1.0，4.0，4.0 mg/ml，respectively.ConclusionThe ethanol extract of Rhynchosia volubilis Lour roots has spermicidal and antibacterial effect.Key words：Ethanol extract of Rhynchosia volubilis Lour roots; Spermicide in vitro; Antibacterial effect鹿藿 Rhynchosia volubilis Lour 又称鹿豆、野绿豆、老鼠眼等。其功能消积散结，消肿止痛，舒筋活络。用于小儿疳积，牙痛，神经性头痛，颈淋巴结结核，风湿关节炎，腰肌劳损；外用治痈疖肿毒，蛇咬伤等1。徐惠敏、丁钉生等2，3用鹿藿根水煎液经过初步研究，发现有体外杀精及抗菌作用。本实验进一步探讨鹿藿乙醇提取物的抗菌及体外杀精作用，为其作为阴道杀精剂提供实验依据。1 材料1.1 药物鹿藿根购于湖北京山县，由中科院武汉植物所专家鉴定。6.2 kg 鹿藿根晾干，粉碎，70%乙醇溶液浸泡 7 d，乙醇提取液用旋转蒸发仪进行减压蒸馏(T：50，P：-0.09 MPa)制得乙醇浸膏 0.48 kg，冷藏备用。壬苯醇醚（NP-9），北京中惠制药厂生产，批号：000505。1.2 精液来源1.2.1 动物精液KM 雄性小鼠 10 只，体重（26.34.5）g , 由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供(SCXK 鄂 2004-0007）。 颈椎脱臼处死，取附睾置无菌小烧杯中，生理盐3水清洗，加入精子营养液（Tyrode），剪开附睾尾部，37孵育 10 min，检查精子活动并计数，用精子营养液稀释到精子数为 107/ml，置 37水浴中待用。1.2.2 人精液年龄 3040 岁健康男性自愿献精者 10 例，禁欲 35 d，手淫法取精液。37液化 30 min，精子计数不低于 50106/ml，活率70%。1.3 菌株标准菌株：金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、大肠埃希菌（ ATCC8099）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；肺炎克雷伯菌（ATCC13883）购于卫生部临床检验中心（北京万泰生物药业有限公司）。 分离菌株由河南科技大学第一附属医院检验科细菌室分离并鉴定。金黄色葡萄球菌（对阿奇霉素、氨灭菌、环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星、四环素、氨苄西林、氯霉素、苯唑西林、复方新诺明、青霉素、头孢噻肟、头孢吡肟耐药）、铜绿假单胞菌（对头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁、氨曲南、氯霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、氨苄青霉素、阿米卡星、复方新诺明耐药）、大肠埃希菌（阿奇霉素、氨灭菌、四环素、氨苄西林、氯霉素、苯唑西林、复方新诺明、青霉素、头孢噻肟、头孢吡肟耐药)。2 方法2.1 体外杀精实验根据国际计划生育联盟标准方法略加改进4。将准备好的精液 50 l 加入鹿藿根乙醇提取物不同浓度的药液中，即刻混匀。迅速取一滴于载玻片上，室温4（282）下，连续观察 5 个高倍镜视野，以全部精子失活为终点，测出药物 2min内杀精子情况。每次均采用不同浓度的壬苯醇醚溶液（0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125 mg/ml）及生理盐水为对照，每份标本重复测 3次。2.2 体外抑菌实验2.2.1 菌液的制备取形态相同的菌落数个接种于培养管内，36，46 h 后纠正浓度，使其混浊度相当于 0.5 麦氏比浊管，约为 1.5108CFU/ml，立即用于实验。 2.2.2 最低抑菌浓度（MIC）测定方法参照全国临床检验操作规程关于最低抑菌浓度的检测方法用胨水或琼脂将药物配成所需浓度5。琼脂平皿稀释法：选用直径为 10 cm 的玻璃平皿，按表 1 添加含鹿藿根乙醇提取物的培养基。用微量加样器接种，每个平皿接种 7 种菌，每个接种点接种 20 l 稀释好的菌液，形成一个直径为 810 m的小液滴，最终接种菌量约每个接种点含 107 个菌。放置 10 min，待菌液稍干后倒置放入 37恒温培养箱培养 24 h，观察结果。以培养皿上菌落生长完全被抑制的最低药物浓度为鹿藿根乙醇提取物对该菌的 MIC。表 1 琼脂稀释法配方（略）试管法：每组排列无菌试管 13 只，于第 212 号管内放相应培养基 2 ml，取制备好的药液分别加入 2 ml1 号 2 号管，第 2 管混匀后取 2 ml 加入第 3 号管，如此依次对倍稀释至第 10 号管，吸出 2 ml 弃去。这样第 110 号管内含药液浓度倍量稀释，浓度分别为每毫升含药 64，32 ，16 ，8，6，4，2，1，0.5，0.25 mg，第 11 和第 12 号管内为无菌培养基，第 13 号管内加入 125 的 84 消毒液 2 ml，作为阳性对照。除第 11 号管外，每管内接种菌液 100 l，37恒温摇床震荡 24 h 观察结果。5肉眼未见细菌生长的最低药物浓度为鹿藿乙醇提取物对该菌的 MIC。3 结果3.1 体外杀精实验鹿藿乙醇提取物对小鼠和人精子的杀灭作用见表 2。表 2 鹿藿乙醇提取物对小鼠和人精子的杀灭作用（略）3.2 体外抑菌实验鹿藿乙醇提取物对常见致病菌的最低抑菌浓度见表 3。表 3 鹿藿乙醇提取物对常见致病菌的最低抑菌浓度（略）2.14.0 临床分离菌株金黄色葡萄球菌 2.10.5 大肠埃希菌 16.7 8.0 铜绿假单胞菌 2.12.04 讨论从实验结果得知，鹿藿乙醇提取物无论对小鼠还是对人均有杀精作用，不仅如此，鹿藿乙醇提取物还有抗菌及抗支原体、衣原体的作用6，尤其对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的作用较强。虽然对大肠杆菌作用较弱，但在杀精时的用量也可显示很强的抗菌作用。阴道杀精剂具有使用简便、安全、有效，在计划生育用药研究方面占据重要位置。壬苯醇醚是一个作用很强的典型阴道杀精剂。但是，近年来对壬苯醇醚的对照研究已经揭示，此药不仅不能预防主要性传染疾病和艾滋病毒感染，且长期使用反而还会提高经由性交所致传染疾病的风险79。目前性传播疾病发病率不断上升，有关性传播疾病发病率预防措施的研究越来越引起各国学者的关注10，11。如果阴道杀精剂同时具有抗微生物及某些性传播疾病的作用又起到杀精抗菌作用应该有比较广泛的市场。鹿藿杀精又抗菌的特性，为其应用6奠定了基础。鹿藿醇提物所含成分较多，有必要对其进一步的分离及对杀精抗菌作用进行进一步研究。【参考文献】1全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编M.北京：人民卫生出版社, 1975：527.2徐惠敏，胡廉，熊承良.中药鹿藿的抑菌实验研究J. 天然产物研究与开发，2006，18（3）：435.3丁钉生，徐惠敏，胡 廉，等. 中药鹿藿的体外抑精实验研究J.中国临床实用医学杂志，2006，1（4）：1.4WHO.人类精液及精子-宫颈黏液相互作用实验室检验手册，第 4 版M.北京：人民卫生出版社，2001：51. 5叶应妩.全国临床检验操作规程M. 南京：东南大学出版社，1990：4656卫海,王建刚，熊承良.中药鹿藿及其提取物对解脲脲原体国际标准株的抑菌实验研究D.武汉：华中科技大学同济医学院，2006：20.7刘宏本.具有杀精子作用的杀微生物药物研究进展J.上海医药，2003，24（2）：79. 8Roddy RE,Zekeng L, Ryan KA, et al.Effect of nonoxynol-9 Gel on urogential gonorrhea and chlamydial infection: A randomized control trialJ.JAMA,2002,287(9): 1117. 9Roddy RE,Zekeng L, Ryan KA, et al. A cont