胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤， 其发生发展与其他恶性肿瘤一样， 属多因素、 多步骤、 多阶段和多基因改变过程。 近年来， DNA 修复基因在肿瘤易感性研究中倍受关注1， DNA 损伤修复是一个多种酶和蛋白质参与的复杂过程， DNA 修复能力的强弱是维持基因组稳定性和细胞正常功能的中心环节， 一旦相关修复基因发生突变， 就会导致整个基因组 DNA修复能力下降， 当机体不能及时有效修复 DNA 损伤， 损伤积累至一定程度导致基因组不稳定性增高，从而引起细胞增殖和分化失控， 导致肿瘤发生2。人类 X 射线交错互补修复基因 1（XRCC1）和野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因 D（XPD）广DNA 修复基因多态性与胃癌易感性的关系邓少丽 陈鸣 陈伟 鲁卫平 黄恒柳 夏季 摘 要 目的 分析中国西南地区人群 DNA 修复基因XRCC1和XPD基因多态性分布， 探讨XRCC1和XPD基因多态性与胃癌发病风险的关系。 方法 采用 1 1 病例对照研究方法， 采用基因测序法检测 160 例胃癌患者及 160 例正常人外周血 GSTP1 基因XPD Asp312Asn，XRCC1 Arg194Trp，和XRCC1 Arg280His 多态性， 进行胃癌风险分析。 结果 胃癌组与正常对照组相比，XPD 312、XRCC1 280 位点的多态性分布频率无明显差异， 而XRCC1 194Trp 的分布频率在病例组和对照组中分别为 17.2%和 7.3%， 具有统计学差异。XRCC1 194Trp 等位基因的个体其胃癌风险增高（OR=2.72， 95%CI= 1.047.24，P=0.027） 。 结论 XRCC1 Arg194Trp 基因多态性可增加人群患胃癌的风险，XPD Asp312Asn、XRCC1 Arg280His 基因多态性与胃癌易感性无关联。 关键词 DNA 修复基因； 基因多态性； 胃癌；XPD；XRCC1Association of DNA repair gene polymorphisms with genetic susceptibility to gastric cancer DENG Shaoli, CHEN Ming, CHEN Wei, LU Weiping, HUANG Hengliu, XIA Ji, (Department of Clinical Laboratory, Daping Hospital, Research Institute of Surgery, Third Military Medical University, Chongqing 400042, China)ABSTRACT Objective To evaluate the single nucleotide polymorphisms (SNPs) of xeroderma pigmentosum group D (XPD) and X-ray repair cross complement 1 (XRCC1) genes in gastric cancer and control subjects in a population from Southwestern China for their association with susceptibility of gastric cancer risk.Methods 160 hospital-based cases and matched controls were recruited and blood samples were collected from each of them and amplified with a PCR and DNA-sequenced for XPD Asp312Asn, XRCC1 Arg194Trp, and XRCC1 Arg280His genotyping. Results Allelic association analysis of these three SNPs showed that the frequency of XRCC1 194Trp in gastric cancer case and the control was 17.2% and 7.3%, respectively, which was significantly associated with gastric cancer risk (OR=2.72, 95% CI: 1.047.24, P=0.027). However, other SNPs didnt show an association with gastric cancer risk or other clinicopathological data of the patients. ConclusionPolymorphism of XRCC1Arg194Trp significantly increased the risk of gastric cancer. Future study will verify these findings for use of this SNP as biomarker in gastric cancer. KEY WORDS DNA repair gene; Gene polymorphism; Gastric cancer; XPD; XRCC1基金项目： 第三军医大学临床科研基金（2008-1087） 作者单位： 第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科， 重庆， 400042 通讯作者： 邓少丽， E-mail:dengsl072yahoo.com.cn371分子诊断与治疗杂志 2010 年 11 月第 2 卷第 6 期 J Mol Diagn Ther, November 2010, Vol. 2 No. 6 论 著 泛参与 DNA 损伤的修复， 本实验对XRCC1 Arg194 Trp、XRCC1 Arg280His 和XPD Asp312Asn 3 个位点进行了研究， 以探讨其多态性与胃癌易感性的关系。1 材料与方法1.1 研究对象收集 2007 年 1 月至 2009 年 12 月在中国重庆第三军医大学第三附属医院普外科、 消化科接受手术治疗、 术前未经放疗和化疗， 并经术后病理组织学确诊的原发性胃癌患者 160 例， 按 1 1 配对原则， 随机选取与病例同性别、 年龄相差 5 岁、 同期住院的非肿瘤、 非消化道系统疾病患者作为对照组。1.2 方法1.2.1 基因组 DNA 提取： 收集重庆地区 160 例胃癌患者外周血液标本及临床资料， 160 例非胃癌患者外周血标本及临床资料。 血液 DNA 提取试剂盒为Tiangen公司产品， 将所得基因组DNA保存在-20 ，以防 DNA 降解。TaqDNA 聚合酶购于 Takara 公司。1.2.2 XRCC1、XPD基 因 多 态 性 分 析：XRCC1 Arg194Trp 位 点 扩 增 上 游 引 物 为5-CTGACCTTGCGGGACCTTA-3， 下游引物为 5-GTCGCTGGCTGTGACTATG-3，产 物 长 度 为 455 bp；XRCC1 Arg280His 位 点扩增所用上下游引物引自文献3，上游引物为5-CAGTGGTGCTAACCTAATC-3， 下游引物为 5-A GTA GTCTGCTGGCTCTGG-3， 产物长度为871 bp，XPD Asp312Asn 位点扩增上游引物为 5-CTGTTGGTGGGTGCCCGTATCTGTTGGTCT-3， 下游引物为 5-TAA TATCGGGGCTCACCCTGCAGCACTTCCT-3，产物长度为 751 bp， 引物由上海生工合成。PCR 反 应 体 系 为 50 L，含 TaqDNA 聚 合 酶5 U、dNTP Mix 0.2 mmol/L、MgCl2 2 mmol/L、1Taq Buffer （以上均为 promega 公司）、 引物各0.4 mol/L、 模板 DNA 2 L。PCR 条件为 94 预变性 5 min， 依次 94 45 s、 56 45 s、 72 45 s 进行40 个循环， 最后 72 延伸 5 min。PCR 产物经 ABI公司 3130 测序仪测序确定碱基序列。1.3 统计学方法应用 SPSS 13.0 统计软件包处理数据， 采用 2检验分析各基因型频率分布差异。 以 2检验比较各基因型频率在病例组与对照组之间的差异，P0.05 有统计学意义。 以比值比（OR）及其 95% 可信区间（CI）表示各基因型发生不同疾病的风险度。OR 值以非条件 logistic 回归计算。 所有统计检验均为双侧概率检验。2 结果2.1 患者及对照组性别及年龄分布见表 1。 由表 1可看出， 胃癌组及对照组病例均为 160 例， 年龄及性别组成无明显差异。胃癌组对照组人数（n）160160性别男性9694女性6466年龄（岁） xs568558范围32843485表 1 患者及对照组性别年龄分布表 Table 1 General status of the subjects2.2 XRCC1和XPD基因型测序检测结果 经测序确定XRCC1、XPD基因单核苷酸多态性（SNP）位点分布。 如图所见，XPD 312 位点存在 G/A 多态性，XRCC1 194 位点存在 C/T 多态性，XRCC1 280 位点存在 A/G 多态性。 测序图见图1A， 1B， 1C。SNP312GASNP312GG SNP312AA图 1A XPD 312 位点三种多态性测序图 Figure 1A Sequence data of XPD 312 genotype (G-to-A)图 1B XRCC1 194 位点三种多态性测序图 Figure 1B Sequence data of XRCC1 genotypes (C-to-T)SNP194CCSNP194CTSNP194TT分子诊断与治疗杂志 2010 年 11 月第 2 卷第 6 期 J Mol Diagn Ther, November 2010, Vol. 2 No. 63722.3 病例组与对照组XRCC1、XPD基因频率的分布DNA 修复基因XRCC1和XPD三个 SNP 位点的九种基因型在两组中的分布频率及相对危险性见表1。 在320例样本中，XPD 312Asn的OR值为0.73（95%CI： 0.142.72） ，XRCC1 280His 的 OR 值 为0.89（95%CI: 0.342.16） ，提 示XPD Asp312Asn、XRCC1 Arg280His基因多态性与胃癌易感性无关联。XRCC1 Arg194Trp 位点中， 胃癌组中 Trp 基因型占17%， 正常对照组占 7%。 以 Arp 基因型为参照组进行胃癌的风险分析， 提示携带 Trpl 基因型的个体患癌危险性最大， 其 OR 为 2.72（95%CI： 1.047.24） 。图 1C XRCC1 280 位点三种多态性测序图 Figure 1C Sequence data of XRCC1 genotypes (G-to-A)SNP280GGSNP280AGSNP280AAGenotype/alleleGastric cancer（n）Control（n）OR（95%CI）XPD 312Asp/Asp132118Asp/Asn1531Asn/Asn1311G (Asp) allele frequency0.870.83A (Asn) allele frequency0.130.170.73 (0.