第十三章发情控制与胚胎工程概念：发情是母畜繁殖过程中的一个十分重要的环节。通过人为方法改变母畜的发情，从而控制母畜的生殖的技术叫做发情控制。意义：发情控制是繁殖控制技术中最重要的技术之一。也是其它繁殖控制技术如胚胎移植重要的环节之一。内容：发情控制技术包括：同期发情、诱导发情、超数排卵等一、母畜的同期发情二、母畜的诱导发情三、母畜的超数排卵孕激素类激素同期发情处理原理人工黄体法（延长黄体期）前列腺素同期发情处理原理缩短黄体期孕激素+前列腺素同期发情处理原理 1、延长黄体期同期发情原理孕激素能够卵巢上的卵泡发育和母畜发情持续给母畜提供孕激素，这样即使母畜黄体退化后也不能发情同时撤除孕激素后，由于大部分母畜卵巢上已没有黄体，所以抑制被解除后，母畜群同时卵泡发育和发情，从而达到同期发情的效果 2 、缩短黄体法同期发情原理母畜黄体期在发情周期中黄体期一般占发情周期的大部分时间。而黄体对前列腺素有反应的时间为发情周期的第 5-16 天因此在同一时间内，大群母畜同时注射 PGF，可使母畜群中大多数（理论值 12/21 近 60%）达到同期发情。实际数值要高于 60%。约 67%左右。3 、孕激素+前列腺素(PG) 同期发情处理原理 1 、一次 PG 法母畜发情周期中大部分时间处在对 PGF 敏感期，因此，一次注射 PGF，可使大部分母畜在注射后的 72 小时发情。尽管同期发情率较低，但处理很方便。3 、分批注射 PG 法根据发情登记，第一批处理只对处于发情期第 5-17 天的母畜注射 PGF 间隔 11 天对上次未发情的和上次未处理的母畜注射 PGF 这种处理方法大约可使母畜群的 90%达到同期发情的目的优点：用药少，注射工作量小、同期发情率高缺点：观察、登记烦琐，工作量大 4 、孕激素+ PG 法（1）孕激素+ PG 法同期发情原理经过一段时间的孕激素处理的母畜，部分母畜黄体已经退化，而另一部分黄体未退化的母畜也处于黄体对 PG 敏感期注射 PG 后，会使黄体未退化的母畜黄体退化同时撤除孕激素，由于所有母畜的黄体均已退化，从而达到同期发情的目的优点：孕激素处理时间短，副作用小；同期发情率高缺点：成本较高（四）用于同期发情处理的激素孕激素类前列腺素 F 类促性腺激素及促性腺释放激素类 1 、孕激素类孕激素类：炔诺酮、氯地孕酮、甲地孕酮用法：阴道栓法：可靠，但成本较高口服法：方法简单，用量不可靠注射法：量准确，但非常麻烦埋植法：较少应用 2 、前列腺素 F 类产品：氯前列烯醇 ClO、氨基丁三醇前列腺素 F2、美国普强公司的律胎素、英特威公司的保顺产用法：肌肉注射：容易操作，用药量较大子宫内注射：将激素注入到母畜子宫内或阴道穹窿内，用量约为肌注的半阴道粘膜注射：从阴道内壁刺入 0.5 cm 左右，注入激素。用量约为肌注的一半。3 、促性腺释放激素和促性腺激素类促性腺释放激素类：LHRHA3 等促性腺激素类：PMSG（eCG)、FSH，LH、HCG（hCG）用法：一般为肌肉注射，HCG、LHRH、LH 均可在发情时静脉注射（五） 、提高同期发情率的方法 1、在发情最集中的季节进行同期发情处理，如羊在秋分前后处理同期发情率最高 2、计划发情日应天气良好（可根据天气预报安排处理时间）3、根据母畜的发情记录分组处理：如牛羊孕激素处理者，处于发情周期第 6-17 天的放栓 12 天，可确保取栓后所有的牛羊都处于无黄体状态，18-5 天的牛羊 10 天后开始处理，当时均处于发情周期的第 7-15 天，故可进行 10 天处理，可获得较高同期发情率 4、用前列腺素处理者，处于发情周期第 6-17 天牛羊，前列腺素处理均处于黄体对 PG 敏感期，18-5 天的牛羊 10 天后开始处理，当时均处于发情周期的第 7-15 天，黄体也同样对 PG 敏感，故有较高的同期发情率。5、二次 PG 和孕激素+ PG 法，同期发情率较高 6、在 PG 处理前 48 小时，或在取栓前 48 小时，使用少量的孕马血清等促性腺激素有利于提高同期发情率。7、同期发情处理时，结合公畜诱情有利于提高同期发情率二、母畜的诱导发情（一）诱导发情的概念与意义概念：用外源激素或环境刺激等方法，使卵巢处于静止或病理状态的母畜表现正常发情、排卵、受精的技术意义：使病理性乏情动物发情，治疗动物不育使生理性乏情动物发情，缩短繁殖周期使季节性乏情动物发情，保证畜产品均衡供应及提高其繁殖率（二）母畜不发情的原因遗传病：如先天性子宫扭转、子宫不发育等不育性疾病营养因素：由于营养不良造成的幼稚病，成年营养不良，可诱导母畜持久黄体而导致不发情季节性乏情哺乳性乏情病理性乏情卵巢机能减退持久黄体（三）季节性乏情的诱导发情生殖激素处理直接采用促性腺激素法孕激素+促性腺激素法改变光照法：主要用于羊的诱导发情公畜刺激法：羊的诱导发情（四）哺乳期的诱导发情牛的诱导发情产后 2 周孕激素+ PMSG 牛初乳 20 ml，新斯的明 10 mg 配种时注射促排 3 号 100 ug 猪的诱导发情产后 PMSG+HCG 公猪诱情法断奶后14 天未发情的：max.book118.com （五）病理性乏情的诱导发情猪后备母猪不发情：max.book118.com，或 PMSG500IU+HCG250IU 断奶后 14 天不发情：同上断奶后长期不发情：氯前列烯醇 0.4 mg+ max.book118.com，或 PMSG500IU+HCG250IU 牛羊氯前烯醇牛 0.6 mg，羊 0.2 mg 和 PMSG1000IU 和 500 IU 或促排 3 号对营养不良的母畜应改善营养状况三、超数排卵超数排卵的概念与意义超数排卵的方法超数排卵的效果影响超排效果的因素（一）超数排卵的概念与意义应用外源性促性腺激素，诱发卵巢上更多卵泡的发育，并排出具有受精能力的卵子的技术叫超数排卵，简称超排意义：诱发母畜多胎进行胚胎移植（二）超数排卵的方法超数排卵使用的药物与剂量超数排卵的处理时间 1 、超数排卵使用的药物与剂量 PMSG ：牛 2000-3000 IU，羊 1000 IU 半衰期长，一次注射需注射抗孕马血清 FSH：牛 40-50 mg，羊 20-25 mg 半衰期短，需多次注射递减注射辅助激素：PG、孕酮、LH、HCG 2 、超数排卵的处理时间可在发情周期的第 9 天左右开始处理，第 11 天注射 PG 也可在放栓后第 11天开始处理，第 13 天注射 PG，第 14 天撤栓（三）超数排卵的效果受胎率：略低于自然繁殖排卵数：不是越多越好，10-15 枚较好回收率：输卵管采胚比子宫角采胚回收率高（四）影响超排效果的因素个体反应差别年龄与胎次超排时间品种季节泌乳第二节胚胎工程一、胚胎移植 1、初始阶段 1890-1900 W.Heape 将安哥拉兔和荷兰兔的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，分别获得仔兔 2只。4、实用化初始阶段 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司，1973 年牛冻胚移植成功（英）1、在家畜改良方面的应用人工授精技术可成几十到几百倍地提高了优秀种公畜的配种效能。但对优秀母畜来说，受其产仔数和世代间隔的限制，尤其是牛羊等繁殖力较低的畜种更是如此。通过超数排卵和胚胎移植技术（multiple ovulation and embryo transfer: MOET) 牛羊的生长性状年遗传进展可比正常繁殖提高 80%和 70%；产奶性状提高 33%。2、在特定品种扩繁上的应用牛羊等低繁殖力家畜，从引进到形成一个纯种群体需要 7-8 个世代，15-20 年。而采用 MEOT 法，一次就可获得一个纯种群体。80 年代初，美、澳、新从欧洲引进的大型肉牛品种均采用胚胎移植技术扩繁。2000 年前后，我国的波尔山羊也是采用胚胎移植进行扩繁的。3、在动物生物多样性上的应用在保护动物遗传资源，提高家畜生产性能，挽救濒临灭绝的野生动物方面，胚胎移植技术越越来发挥出重要作用。冷冻能够很好地保存濒临灭绝动物的胚胎或生殖细胞，但该种动物雌性个体的减少，也是这种动物的胚胎或生殖细胞无法得到移植，科学家开始研究在该种动物的亚种或亲缘种中试验，并取得一些成功。如斑马胚胎移植给马，蒙古马胚胎移植给驴，白肢野牛移植给荷斯坦牛。4 、其它方面应用胚胎移植是克隆技术的必须过程体外受精必须借助胚胎移植实现“试管婴儿的继续发育转基因及动物生物反应器的研究也必须借助胚胎移植 1 、胚胎移植的生理学基础成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育早期胚胎处于游离状态胚胎发育不存在免疫问题胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系胚胎的遗传性不受受体的影响 2 、胚胎移植的基本原则胚胎移植前后所处的环境的同一性供体和受体在分类学上的相同属性动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的同期性动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响三、胚胎移植的技术程序 1.供体和受体的选择 2. 超数排卵处理 3.供体母畜的配种 4.胚胎的收集 5.胚胎的检查 6.胚胎的保存与培养 7.胚胎的移植 8.供体和受体的术后观察 1.供体和受体的选择供体应具有相当高的育种价值供体生殖机能应处于较高的状态：产后 60 天以上，无生殖系统疾病，体质强健受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种受体健康状况良好，已进入发情季节供受体发情时间应接近或一致 2. 超数排卵处理意义：让每个供体提供更多的胚胎处理时间：牛：预计自然发情时间的前 4 天，或发情周期的第 16-17 天羊：发情周期的第12-15 天，促性腺激素处理的第二天或第三天，注射 FSH 牛同期发情与超排程序 3.供体母畜的配种必须用优秀的种公畜进行多次配种，一般隔 8-12 小时进行一次配种，直到发情结束。配种前应对种公畜的精液进行质量检查。优秀种公畜不足时，可考虑首次采用本交，以后采用人工授精，也可以全部采用人工授精。4.胚胎的收集胚胎冲洗液的配制：手术法收集胚胎输卵管冲胚：顺向冲胚、逆向冲胚子宫角冲胚非手术法收集胚胎二路法 5.胚胎的检查收集到的冲洗液静置，冲洗液分离。拣胚：将胚胎移至培养液或保存液中。胚胎鉴定：根据透明带、胚胎细胞、发育阶段及细胞在透明带中的比例确定胚胎级别。6.胚胎的保存胚胎的降温：使胚胎停止发育，延长其体外生存时间体外培养：将胚胎置于体温条件下，在培养液中，使其继续发育胚胎冷冻：通过一定的处理程序，将胚胎降温冷冻后，保存于液氮中 7.胚胎移植手术法移植