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第2 4 卷增刊 2 0 0 5 年1 1 月分析测试学报F E N X IC E S H IX U E B A O ( J o u r n a lo fI n s t r u m e n t a lA n a l y s i s )V 0 1 2 4N O V 2 0 0 5用G C M S 测定保健品中多种雌激素方法的研究杨景贤1 ,李波1 ,陈轶青2 ,徐军3 ,赵俊红3( 1 上海出入境检验检疫局,上海2 0 0 1 3 5 ;2 上海交通大学食品科学工程系,上海2 0 0 2 4 0 ;3 上海食品研究所,上海2 0 0 2 3 5 )市场上有许多保健食品,特别是儿童用的一些保健品往往让家长们有一种想买又不敢买的顾忌。产生这种顾忌的最大因素是怕保健食品中含有性激素成分。目前尚未见对保健食品中多种雌激素成分测定方法的报道,本文研究了一种能同时测定多种雌激素的方法,用于测定保健食品中的雌激素成分。1实验部分1 1 试剂与材料所列引证来源的试剂均为适宜,其它来源的试剂如符合要求也可等同适用。除非另有规定,试剂均为A R 级。1 1 1标准物质和标准溶液己烷雌酚;己烯雌酚;双烯雌酚;雌酮;雌二醇;雌三醇标准品由S i g m a 公司( S t L o u i s ,U S A ) 提供。配制成适当的标准储备液、中间标准溶液及标准工作溶液。1 1 2 化学试剂甲醇,超纯水,醋酸铵,乙醚,三氯甲烷,氢氧化钠,B S T F A + T M S 衍生剂,异辛烷等。 1 1 3 溶液0 2m o l L 醋酸铵缓冲液( p H5 2 0 2 ) ;1 0m o l L 氢氧化钠溶液;0 1m o L L 氢氧化钠溶液;洗脱液:叔丁基甲醚一甲醇( 体积比9 :1 ) 。1 2仪器设备离心机;超声波浴槽;触摸式振荡器;旋转蒸发器;离心瓶;恒温箱;p H 计;O a s i sM A X 固相萃取柱( 6 0m g ,3m L ) 。依次用5 m L 甲醇和5 m L 超纯水活化柱,勿使柱干。气相色谱一质谱仪,H P 5 8 9 0 一H P 5 9 8 9 型。1 3 仪器条件气相色谱:无分流进样方式,0 7 5m i n 打开分流阀;H P 一5 弹性石英毛细管柱( 3 0m 0 2 5m m0 2 5I x m ) 。进样口温度:2 6 0c C 。接口温度:2 8 0 。柱温:1 5 0 以1 5 m i n 升温至1 8 0 ( 保持1 0m i n ) 后以3 。C m i n 升温至2 3 0 ,再以3 0 。C r a i n 升温至3 0 0 ( 保持4m i n ) 。流量:1m L m i n 。质谱:E I 方式:7 0e V ,离子源温度:2 3 0o C ,四极杆温度:1 0 0 。E M 电压:高于调谐电压2 0 0V 。溶剂延迟时间:1 0m i n 。1 4 实验步骤准确称取5 1 0g ( 或5m L ) 样品于离心管中。加入1 0m L0 2m o l L 的醋酸铵缓冲溶液,均质lm i n 。加1 0m L 2 乙醚用力混合lm i n ,于35 0 0r m i n 离心5m i n 。合并二次吸取的上层萃取液于常温下用氮气吹干。用三氯甲烷溶解残余物后加( 5m L 2 ) 1 0m o l L 氢氧化钠水溶液,用力混合1m i n ,于35 0 0r m i n 离心5m i n 。合并二次吸取的上层萃取液以备净化。用5m L 甲醇、水预洗o a s i sM A X 柱,加入样液后分别用5m L1 0m o l L 和5m L 0 1m o l L 氢氧化钠甲醇液一水( 体积比7 :3 ) 溶液淋洗M A X 柱,抽于2m i n 后用5m L 叔丁基甲醚一甲醇( 体积比9 :1 ) 溶液以2m L m i n 速率洗脱。洗脱液蒸发至干,加1 0 0 斗L 衍生剂( B S T F A + 1 T M C S ) 混匀后于7 0 恒温1h ,冷却后吹 千,加2 0 0 曲异辛烷混匀,供G c M S 检测。2 结果与讨论2 1雌激素S l M 方法的确立采用S I M 方法,雌激素的选择离子的确定见表1 。一4 7 塑丝鲞分析测试学报增刊表1 选择离子的确定目标化合物保留时间t r a i n选择离子的质荷比( m z ) 离子碎片。3 9 9 M C H 3 + ,2 0 7 M 2 + c c 键解离所产生的离子,1 9 1 3 9 9 一 己烷雌酚2 6 3 5 +。一。( C H 3 ) 3 S i O C 6 H 4 C H 2 C H 2 C H 3 + ,1 7 9 ( C H 3 ) 3 S i O C 6 H 4 C H 2 +己烯雌酚双烯雌酚雌酮雌二醇2 6 7 22 6 8 93 0 6 83 1 0 34 1 2 M + ,3 9 7 E M C H 3 + ,3 8 3 M - C H 2 c H 3 + ,4 1 3 M 3 + 1 3 C ,2 9 S i 同位素贡献值4 1 0 M + ,3 9 5 M C H 3 + ,3 8 l M C H 2 c H 3 + ,4 1 1 ”C ,2 9 S i 同位素贡献值3 4 2 M + ,3 2 7 M c H 3 + ,2 5 7 M C 5 H q O +4 1 6 M + ,4 0 1 M C H 3 + ,3 2 6 M T M S O H + ,2 8 5 M T M S O C 3 H 5 一H +雌三醇3 2 3 75 0 4 M + ,4 8 9 M C H 3 + ,4 1 4 M T M S O H + ,3 8 6 4 1 4 一C O + 仅供参考2 2 线性范围、相关系数及最低检出量6 种雌激素的线性范围,相关系数及最低检出量见表2 ,样品的加标回收率结果见表3 。表2 线性范围和最低检出量名称线性范围P ( 娜m L “)相关系数最低检出量m r i g己烷雌酚己烯雌酚双烯雌酚雄酮雌二醇O 0 2 2 O0 9 9 93O 0 2 2 O0 9 9 850 0 2 2 00 9 9 89O 2 2 OO 2 2 O0 9 9 900 9 9 870 0 20 0 20 0 2O 20 2雌三醇0 2 2 00 9 9 9l0 2表3 样品加标回收率测定结果2 3 讨论雌激素的骨架特征是:环为芳香环,没有c 。的角甲基。同时3 一位上均有一个酚性羟基,在1 7 一位上有含氧功能基。由于其化学结构的类似性,使其在色谱柱上的保留时间很接近,不易分离。本方法对用G C M S S I M 同时测定二类结构类似的6 种雌激素的方法进行了探讨。图1 为6 种雌激素的总离子流色谱图;图2 为6 种雌激素在保健食品中添加回收的总离子流色谱图。添加水平为1 0n g g ,回收率分别为:己烷雌酚9 2 2 雌二醇8 0 3 ;雌三醇7 8 6 。见表3 。1 0o瓷52 5 7 53 1 7 t l m i n己烯雌酚8 5 6 ;双烯雌酚8 7 4 ;雌酮9 0 O I O弋瓷52 5 8 53 1 鹋“m i a图16 种雌激素标准的总离子流色谱图图26 种雌激素在保健品中添加回收的总离子流色谱图参考文献: 1 李薇,张娟 2 林奕芝,张世英,4 1 1 - 4 8 - - 高效液相色谱法测定儿童保健食品中己烯雌酚的方法 J 江苏预防医学,2 0 0 1 ,等H P L C 法同时测定肉与肉制品中五种雌激素残留量 J 中国卫生检验杂志,1 2 ( 1 ) :6 5 2 0 0 2 ,1 2 4 :第6 期分析测试学报增刊T h eS t u d yo fM e t h o df o rt h eD e t e r m i n a t i o no ft h eE s t r o g e n si nt h eF e e d sb yG C M SY A N GJ i n g - x i a n l ,L IB e l ,C H E N GY i q i n 9 2 ,X UJ u n 3 ,Z H A OJ u n h o n 9 3( 1 S h a n g h a iE n t r y E x i tI n s p e c t i o nA n dQ u a r a n t i n eB u r e a u ,S h a n g h a i2 0 0 1 3 5 ,C h i n a ;2 S h a n g h a iJ i a o t o n gU n i v e r s i t y ,C o l l e g eo fA g r i c u l t u r ea n dB i o l o g y ,m a j o ri nF o o dS c j e n c ea n dE n g i n e e r i n g ,S h a n g h a i2 0 0 2 4 0 ,C h i n a ;3 S h a n g h a iF o o dR e s e a r c hI n s t i t u t e ,S h a n g h a i2 0 0 2 3 5 ,C h i n a )A b s t r a c t :T os t u d yam e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fh e x e s t r o l ,d i e t h y l s t i l b e s t r o l ,d i e n e s t r o l ,e s t r o n ,e s t r a d i e l ,e s t r i o lr e s i d u ei nf e e db yG C M S H e x e s t r o l ,d i e t h y l s t i l b e s t r o l ,d i e n e s t r o l ,e s t r o n ,e s t r a d i o l ,e s t r i o lw e r ee x t r a c t e df r o mf e e ds a m p l ew i t he t h e r ,t h e nc e n t r i f u g a la n daG C M Sm e t h o dw a su s e dt oa n a l y z ea f t e rt h ee x t r a c tc l e a n e db yO a s i sM A X ,a n dr a m i f i c a t i o n sw a sa p p e a r a n c e G o o ds e p a r a t i o nw a sa c h i e v e di nt h e6k i n d so fe s t r o g e na n dt h es t a n d a r dcurves h o w i n gad i r e c tr a t i ob e t w e e nt h ec o n c e n t r a t i o na n dt h ep e a ka r e aw e r eo b t a i n e dw i t hS I M ,
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