美国 Sutter 公司 P97 型拉制仪，为 Flaming/Brown 型水平拉制仪，优点是拉制参数固定后拉制的微电极一致性好；缺点是参数不易调节，一般要经过较长时间的试验才可得到满足要求的微电极。P97 微电极拉制仪的几个重要参数：1.Ramp Test 当更换了新的毛坯管或者铂金片后都要进行 Ramp Test，目的是得到在当前铂金片的加热下毛坯管在何时达到机内预置的柔软程度（即在预置拉力下的 Velocity） ，结果用Heat 表示，这是进行进一步拉制的基础。2.Heat 表示加热电流强度的一个无单位数，调节范围为 0999。此参数通常和 Ramp Test 值相关，在使用槽式（Trough）铂金片时为 Ramp+15，而使用盒式（Box）铂金片时直接用Ramp 值即可。Heat 越高，拉制出的电极越长而尖端口径越小。调节时一般每次改变 5 个单位。3.Pull 拉力，调节范围为 0255。需要注意的是，当毛坯管在拉制仪上固定好之后一直有一个很小的基础拉力作用在毛坯管两端，这个拉力不能调节，Pull 是在基础拉力的基础上施加的。与 Heat 类似，Pull 越大微电极越长而尖端口径越小。调节时每次改变 10 个单位。4.Velocity（trip point） 速度，调节范围为 0255。随着铂金片的加热，毛坯管在基础拉力下逐渐分开，分开的速度一直在拉制仪的监控下，一旦速度达到 Velocity 的设定值即停止加热，冷却（参数 Time 和 Delay 控制这个步骤，见下） ，然后施加 Pull 所设置的拉力将毛坯管拉断。Velocity 的范围一般在 10150 之间。对于 patch pipette,Velocity 的值不能设得太高，否则在最初的 1-2 个循环电极既被拉断，Velocity 的值越低，在设定的循环内所拉开的电极的长度越低，因此拉断电极所需的循环数就越高。循环数越多，所拉出的电极尖端越粗，颈部越短，但过多的循环数将导致稳定性下降，通常的循环数为 5 或更小。Velocity 与循环数的关系：VELOCITY，所需的循环次数，所拉出的电极尖端越细，颈部越长，VELOCITY，所需的循环次数,所拉出的电极尖端越粗，颈部越短。5.Time 调节范围为 0255。控制高压空气的冷却时间，当 Velocity 大于 0 时每个单位代表0.5ms，Velocity0 时每个单位代表 10ms。当毛坯管的分开速度达到 Velocity 所设置的值时，立刻开始用高压空气向铂金片吹风以冷却毛坯管，Time 即高压空气的作用时间。在使用 Time模式时，拉力在达到 Velocity 40ms 后开始施加，与 Time 的设定无关。对于 patch pipette，time 的值通常设为 200-250，以最大程度冷却电极，通常不用 delay 模式。6.Delay 调节范围为 0255。如果 Time 设置为最大值后仍然不能有效冷却毛坯管（使用厚壁毛坯管时经常遇到这种情况，表现为微电极尖端纤维化，即尖端飘） ，就要将 Time 改成Delay。在 Delay 模式中，冷却空气作用时间是固定的 300ms，而 Delay 规定达到 Velocity 后到施加 Pull 的时间。当 Velocity 大于 0 时每个单位代表 0.5ms，Velocity0 时每个单位代表10ms。P97 型拉制仪的拉制原理为：型拉制仪的拉制原理为：微电极毛坯管在铂金片的加热下逐渐软化而被基础拉力拉开，当毛坯管两端分开速度达到一定值的时候，停止加热，冷却极短的时间后施加一定的拉力将毛坯管拉断，如果毛坯管仍然未能拉断则重复以上步骤，最终拉断成为两个微电极。根据所需的微电极不同需要设置不同的拉制参数和选用不同的玻璃毛坯管。patch pipette 典型拉制参数（1.5mm O.D,1.1MM I.D,硅硼酸玻璃）HEATPULLVELOCITYTIMETrough filamentR+150*40200Box filamentR0*40200Pressure 的值：厚壁玻璃 500，薄壁玻璃 300，*Velocity 的值可根据需要进行调整，1电极拉制完后，拉制器将显示循环的次数及耗费的时间，薄壁玻璃 3-4 次为宜，厚壁玻璃3-5 次为宜。2 VELOCITY 的调整：每次 5-10 个单位增加或减少 VELOCITY，然后在显微镜下观察电极的形状。直到得到满意的电极为止，记下拉制器所显示的循环次数， （假如为 X） ，然后向下调整VELOCITY，使循环次数增加 1 次即（X+1） ，记下此时的 VELOCITY 的值， （假如为 a） ，然后向上调整 VELOCITY，使循环次数减少 1 次即（X-1） ，记下此时的 VELOCITY 的值， （假如为b）,最后将 VELOCITY 的值调整到 a 和 b 之间。这将有助拉制的稳定性和可重复性。3通常情况下，单行程序即可满足需要，如果需要仔细调节电极的形状，可采用多行程序，多行程序是以单行程序为基础的。记录下单行程序：HEATPULLVELOCITYTIMELoops 4 times 300045200可写成下面的多行程序形式：HEATPULLVELOCITYTIMELine 1300045200Line 2300045200Line 3300045200Line 4300045200推荐的调节方式：40ms1sPull valueTime valuePressure valueHeatPullGas FlowVelocityVelocity trip pointHeat value增大电极尖口径：降低最后一行的 HEAT 值减小电极尖口径：在程序的最后一行或倒数第二行增加 VELOCITY 5-10 个单位；或在最后一行小量增加 PULL 的值（10-20）以上这些步骤的目的是精密控制施加拉力时毛坯管的温度（玻璃的柔软程度）以及加热部位的粗细（余下多少玻璃） 。要拉制出形状、尖端都满意的微电极，需要仔细调节以上参数。细胞外玻璃微电极的拉制 采用美国 World Precision Instruments 公司生产的 M1B120F4 硼硅酸盐（borosilicate）微电极毛坯管（外径 1.2mm，内径 0.68mm，内有帮助充灌的玻璃丝，属于厚壁毛坯管） 。细胞外记录使用的微电极在充灌 2M NaCl 时阻抗一般在 110M 左右，较易拉制。因毛坯管管壁较厚，我们采用两步拉制法。第一步在基础拉力下先将毛坯管的中间部分拉细，以避免形成很长的微电极（易断且不易充灌） ，第二步再拉断毛坯管。拉制参数如下：Heat Pull Velocity Time1 530 20 20 1402 512 20 30 140可拉制出阻抗为 58M 的微电极，且形状令人满意。hejin1973 wrote:我使用 SUTTER 公司的 P-97 拉制仪,南京六合生产的外径是 1.6mm 的玻璃毛坯管来拉制玻璃微电极,拉制程序如下：1）heat=RAMP+20 pull=15 velocity=75 time=1502）heat=RAMP+20 pull=15 velocity=75 time=1503）heat=RAMP pull=20 velocity=80 time=100但是玻璃微电极的电阻只有 0.2M 欧。我想拉制 12M 欧的玻璃微电极进行细胞外记录，请教各位高手如何设置 P-97 拉制仪的拉制程序？非常感谢！我们实验室用的也是这一款仪器.根据你的数据来看,你的电极尖端有些粗。尖端细一些,电极电阻才会升高.以我的经验，你可以固定 heat，pull 和 time 不变，先考虑速度做些改变，速度减慢拉出来的电极尖端会细一些。速度的改变要缓慢调，以速度数值增减 1 为宜，有经验后。如果通过改变速度得不到均匀的电阻或理想的电阻，建议你可以调一下 HEAT 值，调高的幅度要适当，5 左右，不宜过大，以免烧毁加热丝。另外，三个循环的 HEAT 值可与第一个循环的值相同，不必要每个循环用不同的值。我们 PULL 用的是基础值，TIME 是 200MS。一般的参数调节只调节速度。你可以根据你们实验室的经验设定。