复旦人学硕 I . 学位论文侵袭性垂休腺瘤血管生成和 V E G F 表达的研究侵袭性垂体腺瘤血管生成和V E G F表达的研究中文摘要目的研究血管内皮生长因子 ( V E G F )及其受体在人垂体腺瘤中的表达，探讨其与侵袭性垂体腺瘤血管生成的关系;研究 P T T G ( 垂体肿瘤转化基因) 、V E G F m R N A表达与垂体腺瘤侵袭性的关系，探讨两者表达的相关性。方法 采用免疫组化技术检测 5 2例垂体腺瘤中血管内皮生长因子 ( V E G F ) 及其受体 等的表达水平，同时通过检测 C D 3 4的表达来测定垂体腺瘤的微血管密度( MV D) ， 采用逆转录一 聚合酶链反应( R T P C R ) 技术检测 1 4 例垂体腺瘤中V E G F 和P T T G的m R N A水平，比较上述表达水平在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤当中 的差异。 结果V E G F及其受体的表达、MV D ，在侵袭性垂体腺瘤中显著升 高 ( P 2 . 1 7 9 , P 0 . 7 8 0 , P 0 .0 0 1 ，有显著的正关联性。( 见表 5 )表 5 P T T G和V E G F 表达的线性相关表 ( P 为P T T G , V为V E G F )却1Sa o 0几 。 0 4 -0 . 0a o巨口， - 一 . 5讨论多年来， 对垂体瘤病理机制的大量研究发现， 垂体瘤中有突变癌基因的活化或抑癌基因的失活 1 : G蛋白的 突变可见于4 0 % 偶发性G H垂体腺瘤; 而r a s 突变、染色体1 1 q l 3 或染色体1 3 的 杂合性丢失、 n m 2 3 基国的丢失等与垂体瘤的 形成或其侵袭性相关; 但是，所发现的这些突变却仅见于少数垂体腺瘤，而垂体瘤发生的普遍机制仍不十分清楚。 近来， 用R N A差异显示聚合酶链反应( P o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n , P C R ) 从大鼠 G H 4垂体瘤中分离出的一个新的垂体瘤转化基因( p it u it a ry t u m o r t r a n s - f o r m in g g e n e , P T T G ) ， 并 发 现 其同 源 物 在人 类 垂 体 腺 瘤中 1泛高表达，与肿瘤的发生发展密切相关。P e i 等首次用R N A差异显示P C R方法分离出与目 前任何基因无同源性的一复口大学硕 I 学位论文侵袭性垂体腺瘤血管生成和 V E G F 表达的研究个3 9 6 5 p m R N A ， 以 此m R N A片 段为 探针在大鼠 垂体 瘤c D N A文库中 分离并定性了 一个 全长9 7 6 b p 的P T T G c D N A克隆; 发 现其有5 个外显子、 4 个内 含子， 编码 1 9 9 个氨基酸组成的一 2 5 k D a 蛋白。进一步的R T - P C R发现，鼠的 P T T G表达呈源于不同拼接的两个功能性 m R N A同形基因，其中一个 1 .3 k b同形基因在垂体瘤细胞显著表达。其后体外研究显示稳定转染并高表达 P T T G蛋白的克隆N I H 3 T 3 系成纤维细胞其生长率减低至未转染细胞的5 0 % - 7 0 %， 生长于琼脂中的转染细胞可发生集落形成、自 主性贴壁生长等特性转化; 将转化 P T T G基因的成纤维细胞做无胸腺裸鼠皮下注入则可在3 周内诱发其快速成瘤， 故而将此基因定名为 垂体瘤转化基因 2 ,3 1 。以鼠P T T G c D N A为探针用原位荧光杂交法， Z h a n g等的 研究表明 胎肝c D N A文库中的人P T T G ( h P T T G ) 基因定位于染色体5 8 3 3 ， 它含有 6 0 3 个碱基对组成的开放阅读框，预示h P T T G蛋白为由2 0 1 个氨基酸组成的2 6 k D a 蛋白，与鼠P T T G蛋白 有8 9 %的同源性; 其序列中有富含脯氨酸的两个P X X P“ 花图” 序列， 说明其在细胞信号传导中 有重要意义 4 , 5 1 0原位杂交研究表明P T T G仅表达于人垂体瘤而非正常垂体组织，R T P C R方法研究显示P T T G m R N A表达于所有垂体腺瘤及正常垂体，但肿瘤中m R N A水平显著增高， 在2 3 / 3 0 的非功能性腺瘤、1 3 / 1 3 G H , 9 / 1 0 P R L , IA C T H腺瘤中增高大于5 0 ， 部分肿瘤中增高达1 0 倍以上; 同时也发现P T T G的m R N A表达水平与功能性腺瘤的 级别或肿瘤侵袭程度一致 6 1 . Y u 7 总结了 人类P T T G诱导垂体腺瘤发生的 3个可能机制: P T T G与 b F G F形成正反馈环路并刺激肿瘤血管生成; P T T G 激活c - m y c 或其它脯氨酸增殖基因; OP T T G的过表达带来非整倍性细胞分裂，导致遗传不稳定性。 最近H e a n e y 8 1 论证人类垂体P T T G是由 雌激素及b F G F诱导表达的， 雌激素抗体在体外能减少P T T G表达， 并抑制实验肿瘤生长。M c C a b e 9 1 通过r e a l t i m e P C R和细胞转染技术得出: P T T G可以 通过上调V E G F和b F G F 的表达促进垂体腺瘤血管生成，且这两种途径是相互独立的。P T T G在多数人体恶性肿瘤、 特别是侵袭力强的恶性肿瘤及多数垂体腺瘤、特别是侵袭性者中高表达， P T T G的高表达是肿瘤侵袭性行为的分子标志。目 前认为， P T T G是第一个在多数垂体瘤中高表达的细胞转化基因，对垂体腺瘤的血管生成具有强烈的促进作用，与垂体瘤的形成和侵袭性密切相关【 1 0 - 1 2 1 。利用P T T G细胞转化效用的脯氨酸富含段依赖性特点， 无疑可作为垂体瘤治疗的一个复0 大学硕_ 二 学位论文侵袭性垂体腺瘤血管生成和 V E G F 表达的研究新靶标; P T T G的表达可作为侵袭性垂体瘤的预后判断指标，使其能得到早期的辅助放射治疗。本实验结果表明: 侵袭性垂体腺瘤的V E G F , P T T G m R N A表达较非侵袭性腺瘤增高非常显著; 非侵袭性垂体腺瘤的V E G F , P T T G m R N A表达较正常垂体增高非常显著， 其差异均具有统计学上的意义。 .P T T G m R N A表达与内分泌类型无明显相关性。 垂体腺瘤的V E G F 和 P T T G m R N A表达具有明显的相关性。上述实验结果，提示 P T T G可能通过刺激V E G F表达和细胞外分泌，促进血管生成和肿瘤的侵袭。因此， 我们认为， 垂体腺瘤侵袭性的发生， 与垂体肿瘤转化基因P T T G表达增高 及其上调血管生成正调节因子V E G F 表达、 促进血管生成有关。 P T T G S V E G Fm R N A表达的强度，可作为判断垂体腺瘤侵袭性的辅助指标。在临床上，同时结合影像学特点以及术中所见， 肿瘤癌基因和血管生长因子表达的情况， 结合前述的微血管密度检测， 可预测肿瘤的复发倾向。 如有时即使肿瘤体积处于侵袭与非侵袭性的临界状态，但肿瘤中血管增生显著，P T T G , V E G F表达增高，亦揭示有复发可能，术后应加强辅助治疗及随访。复以 大学硕 I 丁 学位论文侵袭r t 垂体腺瘤血管生成和 V E G F表达的研究参考文献1 . S h i m o n I , Me l m e d S. G e n e t i c b a s i s o f e n d o c r i n e d i s e a s e : p i t u i t a ry t u m o rp a t h o g e n e s i s . J G i n E n d o c r i n o l Me t a b , 1 9 9 7 ,8 2 ( 6 ) : 1 6 7 5 - 1 6 8 1 .2 . P e i L , N E l m e d S. I s o l a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t io n o f a p i t u i t a r y t u m o r - t r a n s f o r m i n gg e n e ( P T T G ) . Mo l E n d o c r i n o l , 1 9 9 7 ; 1 1 ( 4 ) :4 3 3 - 4 4 1 .3 . Mc C a b e C J , G i tt o e s N J . P T T G - a n e w p it u i t a r y t u m o r t r a n s f o r m i n g g e n e， JE n d o c r in o l o g y , 1 9 9 9 , 1 6 2 ( 2 ) : 1 6 3 - 1 6 6 .4 . L e e I A , S e o n g C , C h o e I S . B i o c h e m Mo l I n t , 1 9 9 9 ,4 7 ( 5 ) : 8 9 1 - 8 9 7 .5 . Z h a n g X ,H o r w i t z q P r e z a n t T R ,e t a l . S t r u c t u r e , e x p r e s s i o n , a n d f u n c t i o n o f h u m a np i t u i t a ry t u m o r - t r a n s f o r m i n g g e n e ( P T T G ) . M o l E n d o c r i n o l , 1 9 9 9 , 1 3 ( 1 ) : 1 5 6 - 1 6 6 .6 Z h a n g X , H o r w i t z G A , H e a n e y A P , e t a l . P i t u i t a ry t u m o r t r a n s f o r m i n g g e n e ( P T T G )e x p r e s s i o n i n P i t u i t a ry a d e n o m as. J G i n E n d o c r i n o l Me t a b , 1 9 9 9 , 8 4 : 7 6 1 - 7 6 7 .7 . Y u R , Me l m e d S . O n c o g e n e a c t iv a t i o n i n p i t u i t a r y t u m o r s . B r a i n P a t h o l ，2 0 0 1 , 1 1 ( 3 ) : 3 2 8 - 3 4 1 .8 H e a n e y A P， H o r w i t z G A , Wa n g Z , e t a l . E a r l y i n v o l v e m e n t o f e s t r o g e n - i n d u c e dp i t u i t a ry t u m o r t r a n s f o r m i n g g e n e a n d f i b ro b l a s t g r o w t h f a c t o r e x p r e s s i o n i np r o l a c t i n o m a p a t h o g e n e s i s . N a t M e d , 1 9 9 9 , 5 ( 1 1 ) : 1 3 1 7 - 1 3 2 1 .9