1 4 4 v e n t r i c u h rp r e s s u r e6 “ U l W e0 fe a c hc a r d i a cc y c l e 知mt h ea n a l o g u ee x p e r i m e n ta m 硝m n 口t ot h el e f ta n dt h er i g h tv e n t r i c u h rp r e s s u r eC l l l V ei nt h en o r m a lh u m m mp h y B i o l o g -i c a ls t a t e W h a p p r o x i m a f i n g l yo c c l u d i n ga vv a l v e s t h em a x i m u mn e g a t i v ep r e s s u r eo ft h er i 曲tv e n t r i c l ei nf i r et w oa n a l o g u ee x p e r i m e n t si s 一1 0 2 8m I I g ( 一1 3 7k P a ) o f ta v e r a g e ；t h el l t a x i m t n i ln e g a t i v ep r e s s u r e0 ft h el e av e n t r i c l ei s 一9 3 2 5m r l s ( 一1 2 4 0k P a ) ) o nw 一目a 固e T h ea n a l o g u ee x p e r i m e n ts h o w st h a tt h es u c t i o nc r e a t e db yt h ea c t i c no ft h ed i a s t d ei st h em a i np o w e rf o rv e n o u sb l o o d ”目m mt ot h eh e a r t A n d8 0 t h em e c h a n i s m so fp r o d u c i n gh e a r tp l 洲s h o u l db et h ed i a s t o l i cs u c t i o nf o rd m w i n gt h ev e n o t l 8b l o o db a c kt ot h eh e a r t A 1 u g ht h e r ei sc e r t a i np o s i t i v ep r e s s u r ew i t h i n t h ea t r i ap r i o rt ot h e 叩和I 】g0 ft h ea vv a l u e si l lt h ee a r l i e s td i a s t o l e ，y e tt h eV e l l O U Sb l o o dh a sn oe x t e n d i n gf u n c t i o nO nv e a t r i c u l a rm u s c l ef d ) c r si nt h ep o c e 0 fb e i J l gs u c k e dt ot h ev e n t r i d e s T h a t i s t os a y ，s k L d i I l g s l a w o f t h e h e a r th a sn od i a s t o l i cd y n 枷cb a s i s ( n l e i sn ov a l v ea tt h ej u n c t u m0 fa t r i aa n dl a r g eV e i l u t r a d e rn o m m lp h y s i o l o g i c a lc o n -d i t i o n t h ec o n t r a c t i o no ft h ea t r i aw i t hv e r yt h i nm u s c u l a rw a l la tt h ee n d 一出a s t o l ef o rv e n t r i c u l a r6 m 雌h a sn oi n f l u e n c eO nt h ee x t e n d i n ga n di n c r e a s ei nt h el g 【l lo fv e n r i c u l l Tm u s c l ef i b e r sw i t hv e r yt h i c km u s c u l a rw a l l W ea I e 跳t oV 商母t h i sv i e w p o i n tt I 砌f t l r t h e r p e r i m e n t s ) 人骨髓问充质干细胞的分离、培养和鉴定浙江大学医学院附属邵逸夫医院心内科3 1 0 0 1 6 王建安樊友启李长岭王崎目的评价人骨髓间充质干细胞移植于受伤心脏改善心脏功能的可能性。方法采用P e w o l l ( I 0 7 3 9 n 】1 ) 密度梯度离心法分离人骨髓中单个核细胞，用含1 0 的胎血清低糖D M E M 培养液体外培养扩增骨髓M s C ，并通过F C M对其纯度进行鉴定。结果P e r c o l l 液能成功分离出骨髓间充质干细胞，原代及传代培养显示，人骨髓间充质干细胞具有活跃的增殖倍增能力。体外扩增的人骨髓问充质干细胞表达c D 2 9 、C D l 6 6 等表面抗原，不表达C D 3 4 、C D 4 5 等表面抗原。结论人骨髓间充质干细胞作为一种多分化潜能的多能干细胞，具有强大的分裂增殖能力，体外培养无明显的分化倾向，其移植于受伤的- 0 脏改善心脏功能具有较强的可能性。关键词骨髓同充质干细胞骨髓心脏T h ei s o l a t i o n ，p u r i f i c a t i o na n di d e n t i f i c a t i o no fh u m a na u t o g e n o u sb o n em a r r o w - d e r i v e dm e s e n c h y -m a ls t e mc e l l sO b j e c l l v eT oe v a l u a t et h ef e a s i b i l i t yo fa u t o g e n o u sb o n eI L r I o w d e d v e d 目d l c h ，l a ls t 锄c e l l st r a n s p l a n t a t i o ni n t o 士m 护dh e a r tt Or e p a i rh e a r tf u n c t i o n M e t h o d sA u t o g e n o u sM S c 8mi s o l a t e df r o mb o n ea n dp m i f i e db yc e n 耐血g ea n di nv i t r oc u l t u r e T h ep r o l i f e r a t i o na n d 乎m m lc h a r a c t e r i s t i c sw e i eo t e r v e di np r i m a r ya n dp a s s a g ec u l t u r e T h eM S C sw mi d e n t i f i c a t i o nb yc e l l p 出i a lm 正g m R e s u l tA u t o 帮n o u sb o n em n n U w d e r i v e dM S Cs h o w e da c t i v ep r o l i f e r a t i v e p a c i t yi nv i t r op r i m a r ya n dp a s s a g ec u l t u r e C e l l I k C I Y 2 9C D l 6 6mp o s i t i v e b u tC D 3 4a n dC D 4 5 a mn e 自嘶v e C o h i o i lI tj 8p o s s i b i l i t yo ft r a n s p l a n t a t i o na u t o g e n o uM S C st oi m p r o v e 山a g e dh e a r tf u n c t i m a K e y w o r d sm e s e n c h y m a l8 c mc e l l sb o n e I a r I u wh e a r t骨髓中除含有造血千细胞外，还存在着另外一种具有向中胚层和神经外胚层组织细胞分化能力的多能干细胞。即间充质干细胞。它是一种具有多向分化潜能的原始骨髓细胞，在一定的条件下可以向成骨细胞，软骨细胞，心肌细胞，脂肪细胞等分化。因此，M S C 是移植于受伤的心脏修复心功能的重要的种子细胞。但与造血干细胞相比。骨髓间充质干细胞的数量少，成人骨髓平均1 0 万个有核细胞中含有一个M S C ，且随年龄的增加，M S C 的数量逐渐减少，本实验我们1 4 5 用改良的骨髓M S C 分离纯化、体外大量扩增的方法，并用代M 鉴定细胞的纯度，以期为M S C 移植于受伤心脏改造心脏功能的可能性应用提供依据。材料和方法人骨髓M S C 的分离从髂前上棘无菌抽取正常健康人骨髓1 0 m l ，加肝素抗凝( 2 0 0 u d ) ，将肝素化的骨髓与等体积的D M E M 培养液 内含D M E D 培养基( G I B C O 公司) ，1 0 胎牛血清( G I B C O 公司) ，1 0 0 u m l 青霉素钠，1 0 0 U m l 链霉素。 混合，用吸管吹打分散细胞，在室温下离心( 9 0 0 9 ，l O m b ) ；弃上清液，加人D M E M 培养液悬浮细胞，调节细胞密度至41 0 7 个m l ；在离心管中先加入密度为1 0 7 3 9 , n a的P e r c o l I ( S I G M A 公司) 溶液5 m l ，再将等体积的细胞悬液加于其上，离心( 9 0 0 9 ，3 0 r a i n ) ；收集界面上的细胞，加入D M E M I C 培养液清洗，离心，收集细胞；用D M E M L G 培养液重新悬浮细胞，计数，调节细胞密度至2 6 1 0 5 m l ；即可进行原代培养接种。 人骨髓鹏C 的原代培养将上述分离所得的单个棱细胞分为两组。A 组以1 6 1 驴F 的密度接种于玻璃培养瓶中，加入D M E M L G 培养液，于3 7 E 。5 C O z 条件下培养；于接种4 8 小时后进行全量换液。去出悬浮细胞，留下的是贴壁细胞，以后每3 4 d 换液一次。待细胞扩增到足够数量后用流式细胞仪进行细胞纯度鉴定。B 组，同期将所得的细胞按2 x l o , d 接种于2 4 孔培养板中，每孔加人删一I G 培养液1m l ，培养条件同前，每天随机抽取3 个培养孔用0 2 5 胰酶一0 0 2 E D T A 液将贴壁细胞消化分离( 3 7 、3 5 n f i n ) ，并做贴壁细胞计数，直至贴壁细胞铺满整个培养孔的底部；将3 孔M S C 每天的细胞计数取平均值，作原代细胞培养的生长曲线分析。倒置显微镜逐日观察细胞的生长状况。人骨髓M S C 的传代培养