第2 4 卷增刊分析测试学报V o l2 41 竺! 篁! ! ! 坚! ! ! ! 望! ! ! ! ! ! ! ! ! ! 些：竺望! 竺竺! 型! 唑竺! ! ! ：! 些牛奶中10 种F Q s 残留分析的L C M S 方法饶勇1 ，曾振灵1 ，陈杖榴1 ，杨桂香1 ，杨崇2( 1 广东省兽药研制和安全评价重点实验室华南农业大学兽医药理研究室，广东广州5 1 0 6 4 0 ；2 华南农业大学测试中心，广东广州5 1 0 6 4 0 )随着氟喹诺酮类( f l u o r o q u i n o l o n e s ，r Q s ) 在动物中大量使用，带来的直接后果包括：第一，微生物耐药性的迅速产生；第二，在食品中的大量残留“1 。迄今为止，虽然F Q s 残留还没有象氯霉素和克伦特罗等禁用兽药那样被高度关注，但它们在动物性食品中的残留是非常广泛的，这种情况肯定将会影响到我国动物性产品的出口。在国外，检测F Q s 在牛奶中的残留方法已有一些报道，主要是H P L C F I D U V D 方法1 “，也有L C M S 方法，但检测的药物一般较少”1 ；在我国，还没有L C M S 方法的报道。本文建立了牛奶中麻保沙星( M A R ) 、诺氟沙星( N O R ) 、氧氟沙星( O F L ) 、培氟沙星( P E F ) 、环丙沙星( C I P ) 、洛美沙星( L O M ) 、达氟沙星( D A N ) 、恩诺沙星( E N R ) 、沙拉沙星( S A R ) 、二氟沙星( D I F ) 等1 0 种氟喹诺酮类药物残留检测的L C M S 确证方法。1实验部分1 1设备液相色谱一质谱联用仪( F i n n i g a n ) ：L C QD e c a 离子阱质谱仪，液相系统为P 4 0 0 0 泵系统；多功能浓缩仪( Z y m a r k ) ；负压固相萃取装置( W a t e r s ) ；反相聚合物S P E 柱( P h e n o m e n e x ) ：S t r a t a X 。1 2 样品前处理牛奶1 0m L 加入提取液0 5m L ，离心，下层残余物重复提取一次，合并上清液，进行S P E 净化。S t r a t a - xS P E 柱以3 m L 甲醇活化，3 m L 2 0 甲醇磷酸和3m L 纯净水平衡，上样，3 m L 纯净水和3m L2 0 甲醇磷酸淋洗；3m L 甲醇洗脱，吹干，1 0m L 流动相溶解，0 2 0 岬过滤，L c M s分析。 1 3 测定液相色谱条件：色谱柱，O D S 2 ( 1 5 0x 2 0 m m ，5 肛m ) ；保护柱：C 1 8 ，2 0 1 1 1 1 1 1 1 D ；流动相：A ，0 0 5 三氟乙酸，B ，乙腈；梯度洗脱：0 1m i n ，2 0 B ；1 1 0r a i n ，7 0 B ；流速：0 3m L m i n ；进样量，加以。质谱条件：A P C I 正离子模式，气化温度：4 5 0 。c ，毛细管温度：1 6 0 ，壳气：N 26 5 。2 结果与讨论2 1S P E 净化方法S t r a t a - XS P E 柱使用的是一种新型聚合物反相填料，和传统的硅胶C 1 8S P E 柱相比，此种净化柱具有高保留效率、操作简便和能重复使用等优点。2 2L C M S ”确证分析实验进行了1 3 种Q N s 的确证分析，它们分别是M A R 、N O R 、O F L 、P E F 、c I P 、t O M 、D A N 、E N R 、S A R 、D I F 、O X O ( 嗯喹酸) 、N A L ( 萘啶酸) 和F L U ( 氟甲喹) ，其中O X O 、N A L 和F I U 不含哌嗪环，为酸性Q N s ，而其它1 0 种为两性的F Q 8 ，结果发现，用A P C I 一离子阱不能得到作为确证的子离子，只能检测到它们的母离子。因此，只有1 0 种F Q s 才具有足够的确证信息，而3 种酸性Q N s可以用母离子扫描方式进行筛选，而进一步的确证要采用其它方法。l o 种V Q s 的M S 2 主要是母离子脱羧( M H C O 。 + ) 和脱水( M H H 。O + ) 而产生的子离子，而M s 3 是二级离子进一步发生哌嗪环断裂重排( M H C 0 2 一N R + ) 及脱H F ( M H c 0 2 一H F + ) 而得到，结果见表1 。1 9 0 篁! 塑坌堑型堕兰塑望型一表1确证F Q s 的数据采集参数矗M S 2 、M S 3 离子F Q s保留时间t r a i nM S ”目标离子m z碰撞能t t l 碎片离子m zM A RN O R0 F Ll 皑F37 935 839 639 4M S 2M S 3M S 2M S 3M S 2M S 3M S 23 6 33 1 93 2 02 7 63 6 23 1 83 3 43 03 53 03 53 03 53 0M S 32 9 03 5M S 23 3 24 0M S 32 8 84 5M S 23 5 23 0M S 33 0 83 5M S 23 5 84 0M S 33 1 44 5M S 23 6 04 5M S 33 1 64 0M S 23 8 63 02 6 2 2 4 82 5 6 ，2 3 3 ，2 2 72 6 1 2 4 6 ，3 0 l2 4 5 。2 8 8 ，2 9 6M S 33 4 23 53 2 2 ，2 9 9 ，2 8 5D I F5 4 5M S 24 0 04 01 1：! 兰兰翌：! 堑：鲨2 3 方法评价2 3 1 回收率和精密度以5 0 、1 0 0 、2 0 0 、5 0 0 、1 0 0 0 、2 0 0 0 、5 0 0 0n g m L 系列药物浓度进行添加回收率和精密度测定，每一浓度包括5 个重复。回收率为4 8 8 11 0 o ；相对标准偏差小于1 8 5 。2 3 2 标准曲线和线性范围将混合标准工作液用流动相进行相应比例的稀释得到l o 种F Q s 的系列浓度( n g m L ) ：1 0 、2 0 、5 0 、1 0 0 、2 0 0 、5 0 0 、1 0 0 0 、2 0 0 0 、5 0 0 0 ，以1 0 种F Q 8 的脱羧离子( M H C O ： + ) 为定量离子，测得的N O R 、P E F 、E N R 、S A R 的标准曲线的线性回归方程，线性良好( r 2 0 9 9 0 ) 。参考文献： 2 3 V A ND E N B O G 从R DAE 耵O B B E R I N G HE EA n t i b i o t i cu s a g ei na n i m a l s ：i m p a c to nb a c t e r i a lr e s i s t a r t c ea n dp u b l i ch e a l t b D n 祭，1 9 9 9 ，5 8 ：5 8 9 6 0 7 M A R A Z U E L AMD M O R E N 0 - B O N D lMC M u h i r e s i d u ed e t e r m i n a t i o no ff l u o r o q u i n o | o n e si nm i l kb yc o l l l l l l , 1 1l i q u i dc h r o m a t o g r a p h yw i t ht l l l o l t 8 0 e f l c ea n du l t r a v i o l e ta b s o r b a n c ed e t e c t i o n JC h r o m a t o g r ，A ，2 0 0 4 ，1 0 3 4 ：2 5 3 2H O O FNV W A S C HKD ，O K E R M A NL ，e ta t V a l i d a t i o no fal i q u i dc h r o m a t o g r a p h y t a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r i cm e t b o df o r t h eq u a n t i f i c a t i o no fe i g l l fq u i n o l o n e si ab o v i n em u s c l e ，m i l ka n da q u a e u h u r e dp r o d u c t s A m dC h i mA c t a ，2 0 0 5 5 2 9 ：2 6 5 2 7 2 C o n f i r m a t i o no f1 0F l u o r o q u i n o l o n e si nM i l kb yL i q u i dC h r o m a t o g r a p h y T a n d e mM a s sS p e c t r o m e t r yR A OY o n 9 1 ，Z E N GZ h e n 1 i n 9 1 ，C H E NZ h a n g - l i u l ，Y A N GG u t x i a n 9 1 ，Y A N GC h o n 9 2( 1 G u a n g d o n gP r o v i n c i a lK e yL a b o r a t o r yo fV e t e r i n a r yP h a r m a e e u t i e sD e v e l o p m e n ta n dS a f e t yE v a l u a t i o n ，L a b o r a t o r yo fV e t e r i n a r yP h a r m a c o l o g y ，S o u t hC h i n aA g r l c a l t u r a lU n i v e r s i t y ，G u a n g r h a u5 1 0 6 4 0 ，C h i n a ；2 C e n t e ro fA n a l y s i sa n dR e s e a r c h ，S o u t hC h i n aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ，G u a n g z h o u5 1 0 6 4 0 ，C h i n a )A b s t r a c t ：Ac o n f i r m a t i o nm e t h o di sd e v e l o p e da n dv a l u a t e df o ra s s a y i n g1 0f l u o r o q u i n o l o n e s ( m a r b o f i o x a c i n( 下转第1 9 3 页)一1 9 l 一的畸弘34445PMNRR啪孝i第5 斯分析测试学报增刊表1主要碎片离子峰对应的碎片离子皿m1 0 92 6 127 42 9 25 ，1对应的离了砷片。c 、一节晦。2 2 结论由于五氟利多相对分子质量较大，因此程序升温的起始温度较高。在毒物鉴定中，由于目标物常常是未知的，其溶解性、挥发性也是未知的，因此在设定色谱条件时应尽量包含相对较多的毒物，以免漏检。在上述案例中，由于所送检材只有胃及内容物，没有血液或肝组织，定量的意义不大，因此，本工作中