3 8 2 3 对保存的1 6 株的洋葱霍尔德菌进行B 内酰胺酶诱导酶的检测：采用双纸片扩散法，以亚胺培南和头孢西丁为诱导剂贴在平皿中央，周围分别贴头孢噻肟、头孢他定、氨曲南、头 孢吡肟、头孢曲松、头孢哌酮绗巴坦。每种纸片与亚胺培南和头孢西丁的距离为1 5 M M ，3 5 C 培养1 8 2 4 H 观察结果，在C T X 、C R O 、A M P 、S ( 灌、F E P 、A T M 的任何一种纸片靠近亚胺培南或头孢西丁一侧出现药敏抑菌环直线相切现象为阳性。结果：1 6 株菌株1 6 株阳性，阳性率为1 0 0 。见表2 ，表3 表2 以K ) x 为诱导剂不同药物的诱导酶检测结果表3以I M P 为诱导剂不同药物的诱导酶检测结果4 对保存的1 6 株洋葱伯克霍尔德菌进行碳青酶烯酶测定：采用纸片扩散法：纸片二巯基乙酸( 2 一M A ) 贴于平皿中央， 四周依次贴纸片E D T A 、I M P 、C D 0 2 、C A Z 、S C F 、M E R 。二巯基乙酸纸片为在无菌的纸片上加入原液3 5 u l 。E D T A 纸片为在无菌纸片上加0 5 m o l AF 2 7 F A l o u l 。结果判断若C A Z 和 或I M P 和( 或M E R ) 与C A Z C L A V 和C S F 协同，说明此菌可完全或部分被c I 。A v ( 克拉维酸) 或S H L ( 舒巴坦) 抑制，这样 表现为产该酶菌的生长可被C L A V 或S H L 与I M P 和或M E R 联合作用时抑制，即2 种纸片间出现协同，为丝氨酸类 产碳青酶烯酶，若C A Z 和或I M P 和M E R 与E D T A 和( 或2 一 M A ) 协同，说明此菌可完全或部分被E D T A 或I M P 抑制，即 I M P 和或M E R 与E D T A 或2 M A 纸片间出现协同，为产金属类碳青酶烯酶。结果1 6 株菌未检测出阳性。讨论洋葱伯克霍尔德菌是一种环境微生物，广泛分布于自然界的士壤和植物中，在水中容易存活，可以在污染的消毒液及污染的仪器中分离，在植物、动物组织中有定植能力，是人类病原菌。可引起肺囊性纤维化病患者的下呼吸道感染和一些特殊人群的医院获得性感染，还可引起菌血症( 特别是内源性导管患者) 、尿道感染、脓毒性关节炎、腹膜炎和呼吸道感染等。洋葱伯克霍尔菌引起的医院感染近几年有增加的趋势。我国囊性肺纤维化的发病率极低，本实验的菌株来自非囊性肺纤维化的患者，主要以呼吸道分离率最高为7 0 ，其次为血液、动静脉动导管及引流液。免疫功能正常时吸入此菌不易造成感染，只有在免疫力低下、老人、患肿瘤等患者才会引起此菌感染。本实验的菌株来源主要为I C U 5 2 3 、肝移植病房1 3 4 、呼吸内科4 1 。由于I C U 患者接受创伤性治疗措施多，患者免疫力低下，故易被感染。诱导酶是由染色体介导和在抗菌素诱导下产生耐药，因 此在抗菌素应用中存在着潜在的耐药性常见能诱导产生B内酰胺酶的药物有头孢西丁、头孢美唑、亚胺培南。从本实验显示：对洋葱伯克霍尔德菌亚胺培南是比较好的诱导剂，比头孢西丁的诱导酶检测率高，目标底物以头孢曲松和头孢哌酮 舒巴坦为佳。曾有文献报道洋葱伯克霍尔德菌产金属酶，但本文对保存的1 6 例菌株用纸片协同试验并未检出。洋葱伯克霍尔德菌对多种抗菌药物具有较高的耐药性已证实洋葱伯克霍尔菌产生B 内酰胺酶，B e c k m a n 和L e s s i e指出该菌产生的青霉素酶的特性与其他革兰阴性菌不同，它 的活性物质能水解青霉素并利用B 一内酰胺类抗生素的化合物作为碳源，因而表现为对青霉素耐药。本文中青霉素类包括氨苄西林、替卡西林呈高度耐药达 7 0 。另外该菌天然 耐B 内酰胺类和氨基糖苷类抗生素除拥有B 内酰胺酶，产诱导酶、产氨基糖苷类钝化酶、核糖体改变或胞壁屏障受阻外，其外膜上的膜孔蛋白能阻止亲水性抗生索通过。据文献报道洋葱伯克霍尔德菌的对头孢硝噻吩外膜通透性比大肠埃希菌低l O 倍，与铜绿假单胞菌相似。本文所测1 8 种抗菌药物中除复方新诺明1 1 6 、头孢哌酮他唑巴坦1 4 1 、头孢他定2 2 2 、头孢吡肟2 9 、头孢噻肟2 8 9 、头孢哌酮舒巴坦2 1 4 、头孢啦松2 6 4 敏感性较高外，环丙沙星3 4 5 、左氧氟沙星5 3 4 ，其余抗菌药物的耐药率均高于7 0 。包括青霉素类、一、二代头孢菌素类、头霉素类、氨基糖苷类、单环B 内酰胺类、碳青酶烯类。洋葱伯克霍尔德菌是一种多重耐药菌，天然耐药多种抗生素，一旦感染治疗困难。从体外药敏结果显示，复方新诺 明，三代头孢菌素，头孢哌酮加酶抑制剂可作为由洋葱伯克霍尔德菌引起的感染。但三代头孢菌素、舒普深与头孢西丁或亚胺培南联用会产生诱导酶，导致诱导耐药，应该引起重视。液体染色培养基用于白色念珠菌的快速鉴定魏莲花张俭邹凤梅刘刚我们研制了一种液体染色培养基，用来进行白色念珠菌作者单位：7 3 0 0 0 0 兰州，甘肃省I 临床检验中心芽管和厚膜孢子的诱导，3 0 r a i n 可以查到白色念珠菌芽管， 2 4 h 可以查到白色念珠菌厚膜孢子。用于快速鉴定白色念珠菌效果较好。报道如下。材料和方法一、材料1 培养基组成：葡萄糖5 9 ，蛋白胨1 0 9 。硫酸胺 ( N H 4 ) 2 S 0 4 0 0 5 9 , 磷酸二氢钾( K H 2 P 0 4 ) 2 9 ，氯化钙( C a C l 2 )0 0 5 9 ，硫酸镁( M g S 0 4 ) 0 0 5 9 ，吐温一8 02 0 9 ，淀粉1 Og ，氯霉素0 0 5 9 ，p H6 0 - - 6 8 。加蒸馏水1 0 0r r d 。高压灭菌 后，加入经过滤灭菌的1 M 尿素0 0 3 d 。贮存备用。临用前 在试管中滴加1 美蓝0 5 m l 。2 菌株：白色念珠茵A r I x ；1 4 0 5 3 ，由广州乐通泰公司惠赠。白色念珠菌1 3 2 株，热带念珠菌1 0 株，克柔念珠菌2 株， 光滑念珠菌2 株，季也蒙念珠菌1 株，异常汉逊酵母菌1 株，由甘肃省临床检验中心微生物室从住院部患者标本中分离， 均经A P I 一2 0 C A U X 鉴定卡鉴定证实。3 人血清：从医院检验科生化室收集。二、方法1 菌液准备：将白色念珠菌、热带念珠菌、光滑球酵母菌、克柔念珠菌及异常汉逊酵母菌分别接种沙保弱琼脂，3 5 孵育4 8 h ，挑取菌落，加入2 m l 无菌蒸馏水中，在浊度仪上调整菌液浓度为4 麦氏单位( 约8 1 0 8 C F U m 1 ) 。2 芽管检测：在试管中分别加入0 5 r r d 液体培养基、人血 清，每管加入1 0 0 u l 各种菌液，置于3 5 孵箱孵育。3 0 n f i n 、6 0 m i n 、1 2 0 m i n 、1 8 0 m i n 后，分别取菌液1 0 0 u l 至载玻片上，高倍镜计数1 0 0 个念珠菌中所产生的芽管数。3 厚膜孢子检测：继续孵育2 4 h 后，取样滴于载玻片上，加盖玻片在光学显微镜下观察厚膜孢子。4 培养基特异性检测：将白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌分别接种于液体染色培养基中，观察芽管及厚膜孢子。三、结果：1 生长试验观察：培养基中的葡萄糖、蛋白胨即为液体沙保弱的基本成分，为念珠菌生长繁殖提供必需的营养成分，因此，选择液体沙保弱作为液体染色法的基础培养基，在此基础上，添加了能刺激白色念珠菌芽管快速形成的C a C l 2 、尿素成 分，试验用1 4 8 株各种念珠菌在液体染色培养基中均生长良好。可见该培养基不影响念珠菌的生长。2 C a C l z 浓度的：0 0 1g A 、0 0 2g A 、0 0 5g A 三个浓度培 养基用于白色念珠菌A T C C l 4 0 5 3 和1 3 2 株分离白色念珠菌进行芽管形成试验观察，6 0 m i n 时芽管形成率均值为1 2 、2 1，6 0 m i n 时为3 2 ，最终选择C a C l 2 浓度为0 0 5 9 l 。3 尿素浓度的：2 浓度为宜。丛生丝孢酵母菌的生物学特性鉴定3 8 3 4 菌液浓度的影响：将实验用白色念珠菌用无菌蒸馏水调成1 1 0 5 C F U m l 、5 1 0 5 C F U m l 、8 1 0 S C F U m l ，接种于0 5 m l 液体染色培养基中，诱导3 0 m i n ，芽管形成率均值分 别为1 0 - - 1 2 、1 6 - - 2 0 、1 5 2 0 ，诱导6 0 r n i n ，均值分别为1 3 1 6 、2 1 - - 2 6 、2 8 3 1 ，因此，0 5 r r d 液体培养基中接种菌液浓度以8 1 0 8 C F U m l 为宜。5 孵育温度：选择3 5 为宜。6 液体染色培养基与人血清诱导能力的比较：在液体培养基中，白色念珠菌3 0 m i n1 2 0 m i n 内芽管形成率高于人血清，可见该培养基诱导芽管形成能力较人血清强。7 液体染色培养基诱导芽管和厚膜孢子特异性检测：在该培养基中，3 0 m i n 1 8 0 m i n 内，白色念珠菌形成芽管，热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌等不形成芽管。2 4 - 7 2 h 内上述念珠菌在培养基中不形成厚膜孢子。讨论白色念珠菌感染症占念珠菌感染症的8 0 9 0 以上，临床医生迫切要求微生物实验室对该茵能给予快速鉴定，以便及时用药治疗。白色念珠菌的鉴定方法很多，有A P I 一2 0 C 鉴定卡、液体培养基、科码熹琼脂、仪器、同化试验、分子生物学、血清学等诸多方法，但这些方法或价格昂贵、或鉴定需时长、或操作烦琐，导致难以作为常规实验推广应用。白色念珠菌在动物血清中能形成芽管，在玉米一吐温8 0 琼脂中能形成厚膜孢子，利用此特性可对白色念珠菌进行快速推断性鉴定。由于人血清来源方便，大多数微生物实验室基本都采用人血清来检测白色念珠菌芽管，采用玉米吐温琼 脂检测其厚膜孢子。但人血清中可能含有抑制芽管形成的因 子，并且具有肝炎、A I D S 甚至S A R S 等传染性病毒的潜在危险，容易造成工作人员自身感染或周围环境的污染。因此，一 般实验室人员往往不愿意接受利用人血清进行白色念珠菌芽管检测的方法。国内外微生物工作者研究发现了许多替代血清检测白色念珠菌芽管的方法，有用牛奶代替的、有用米汤代替的等等。本文报告的液体染色培养基适合各种念珠菌生长，尤其 在孵育3 0 m i n 后即可观察到芽管的形成。白色念珠菌在该培养基中经3 5 孵育3 0 m i n 、6 0 m i n 、1 2 0 m i n ，芽管产生率分别为2 0 、3 1 、3 6 ，高于人血清中芽管的形成率，适合白色念珠菌快速检验。继续孵育2 4 h 4 8 h ，还可以观察到白色念珠菌的厚膜孢子形成。热带念珠菌、克柔念珠茵、光滑念珠菌等其他念珠菌在该培养基上不产生芽管，因此该培养基特异性较强。苏明权樊新岳乔红杨柳张建芳丁振若郝晓柯丛生丝孢酵母菌( T r i e h o s p o r o np L d l u l a l 】s ，T p u n u k 蟠) 是一种酵母样真菌，属于丝孢酵母属。T p u l l u l a n s 引起的临床感染多见于插管、皮肤软组织和肺部感染，由T p u l l u l a n s 引作者单位：7 1 0 0 3 2 西安，第四军医大学西京医院检验科起的泌尿道感染较为罕见，现将我们分离的一株T p u l l u l a m的生物学鉴定特性报道如下。材料和方法一、材料1 菌种来源：2 0 0 3 年9 月，从我院一例元痛性血尿患者尿液