蔬菜质量安全快速检测技术与应用蔬菜质量安全快速检测技术与应用本文由 gxtdingx 贡献ppt 文档可能在 WAP 端浏览体验不佳。建议您优先选择 TXT，或下载源文件到本机查看。蔬菜质量安全快速检测技术与应用无公害蔬菜基地的认证过程蔬菜质量安全快速检测技术的检测指标农药残留量 有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药) (有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药) ? 硝酸盐 ? 亚硝酸盐 ? 吊白块：目前主要在我国北方已经发 吊白块： 现有一些不法商贩使用漂白粉漂白一 些蔬菜，但情况尚不严重， 些蔬菜，但情况尚不严重，其主要污 染物为甲醛。 染物为甲醛。我国现行的主流检测技术体系检测技术体系的要求： 满足有关标准对检测方法及设备的要求； 操作简便，稳定度高； 检测结果能够与其它分析机构比对。 ? 目前全国最大的检测体系： 由农业部蔬菜品质监督检验测试中心（北京）和农业 部药检所创建，并常年进行检测，具有技术成熟以及结果可 靠等特点。 ? 设备： 电子天平、电热恒温水浴锅、调速多用振荡器、TU18 00/1810 紫外可见分光光度计 ? 要求： 同时对蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐和农药残留量进行 检测，需要时检验吊白块。农药残留量快速检测方法传统的农药残留量分析技术的一般过程分析步骤 1、采集样品 2、称取样品 3、捣碎样品 4、样品的提取 5、样品的净化 6、样品的浓缩 7、样品的定性、定量检测所需设备分析天平 高速组织捣碎机 分液漏斗等 SPE、SPME 等 氮吹仪、旋转蒸发器等 GC、HPLC、GC-MS、HPLC-MS 等传统的农药残留量分析技术的优缺点优点 能够对每一种农药进行准确的定性和定量缺点 检验分析周期长 检验费用高 需要消耗大量的有机溶剂，容易造成环境污染 需要使用 GC、HPLC 等昂贵的大型仪器设备 对检验分析人员的化学分析水平有较高的要求 检验分析过程繁琐，影响因子复杂，不易掌握传统的农药残留量分析技术存在的问题?能对农产品的生产、运输、批发、零售环节农药残留量分析 作出快速响应，无法满足农产品生产、流通环节的需要 ? ?检测费用太高，如果在农产品的生产、运输、批发、零售各 个环节普遍使用，社会可能无法承担 ? ?检验缺乏针对性，在农产品的生产、运输、批发、零售各个 环节普遍使用传统的农药残留量分析技术，可能会带来一定 程度的浪费 ? ?检验需要专业的检测机构来完成，现有的社会检测机构及检 验能力无法承担社会各个环节的所有检测任务 ? ?检验需要配置大量的仪器设备，造成了传统的农药残留量分 析技术无法在商场、农产品生产基地等场所进行推广使用国内外现行的农药残留量快速检测方法生化检测法（胆碱酯酶/酶抑制法） 生化检测法（胆碱酯酶/酶抑制法） ? 免疫分析法 是将抗体抗原反应与现代测试手段相结合的微量分析法。具 有高灵敏度和高效能等优点，仅需要很少的仪器设备和专业 培训，是农药残留量快速检测及测定致癌物的好方法。但该 方法开发费用高，开发时间长约 1 年，而且只适用于分析一种 农药或一类农药。 ? 活体生测法 安达市植保植检站利用敏感家蝇对蔬菜低残毒生产区的蔬菜 进行大面积多点次检测，查出严重超标的蔬菜比率为 0.15%。 该法测定时间需 3 小时，但必须具有专用养虫室并常年饲养昆 虫。我国现行的农药残留量分析的总体解决方案检测方法 速测卡法 酶抑制法 传统法应用范围 快速筛选 快速筛选并提供总量抑制率指标 农药残留量的准确定性、定量方法精度 低 中 高检测速度 快 中 很慢农药残留量快速检测技术的优缺点缺点 无法对每一种农药进行准确的定性 无法定量或定量准确度不高 能够检验的农药种类范围较窄缺点 检验分析周期短 检验费用低 无需要消耗大量的有机溶剂，不会造成环境污染 不需要使用 GC、HPLC 等昂贵的大型仪器设备 对检验分析人员的化学分析水平要求较低 检验分析过程简便，容易掌握我国现行的农药残留量快速检测技术方法 速测卡法（纸片法） 酶抑制法标准编号 GB/T 5009.1992002 NY/T 4482001 GB/T 5009.1992002 GB/T 186252002 GB/T 186262002 GB/T 186302002适用范围 蔬菜 蔬菜 蔬菜 茶 肉 蔬菜（最新有关标准）GB/T5009.199-2002，由卫生部制 订，是目前使用最广泛的标准。农药的分类农药残留量快速检测技术的检测对象有机磷类农药 ? 氨基甲酸酯类农药 ? 以上两类农药的有毒代谢产物蔬菜农药残留量危害程度评估及取样方法评估原则： 危害性（Hazard）=毒性接触程度（Exposure） ? 评估方法： 危害性越大，采样频次越高，样本数量越大，监管等级越高 ? 蔬菜中农药残留量样品采集原则： 蔬菜品种数量越大，采样频次越高，样本数量越大。 蔬菜抽样数量在生产基地和流通环节（如：市场）均使用 货物“货批”数来衡量。 产地检验原则：以同一品种、同一田块、同期采收的蔬菜， 以 1hm2 为一抽样批次，不足 1hm2 也视为一个货批。 市场检验原则：以同一产区、同一品种、同一销售单位为 一个货批。产地蔬菜样品采集方法原则： 对每一货批按 5 点抽样法取样，将样品缩分后抽取2kg， 取 1kg 样品作为备样，备样应低温保存。产地蔬菜样品采集方法原则： 从每一货批中随机抽取 2kg 样品，取 1kg 样品作为备样，备样应低温保存。 ? 注意：随机 随机随意常见蔬菜农药残留量的采集对象及检测部位采集对象： 蔬菜基地：上市前的蔬菜 市场：正在售卖的蔬菜 检测部位样品名称 番茄、茄子 黄瓜 萝卜、胡萝卜 大白菜、小白菜 检测部位 去蒂供测 去果柄供测 叶、根（用水轻轻洗去根泥、稍晾干）分别供测 去根、去外测腐叶、供测蔬菜农药残留量快速检测结果判定基本原则农药残留量按简易测定方法进行测定时，从 每一货批中随机抽取 3 个样品进行现场测定。对 于一次检验出现阳性时允许复测。若复测仍呈阳 性者，应进行色谱测定，以色谱测定法测定的结 果为判定依据。速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002）原理速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002）1、试剂 ? 速测卡：固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片。? 洗脱液（pH7.5 缓冲溶液）：取 15.0g 磷酸氢二钠Na2HPO412H2O 与 1.59g 无水磷酸二氢钾KH2PO4，用 500mL 蒸馏水溶解。 2、仪器 ? 常量天平 ? 372恒温装置（选配）速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002）整体测定法 1、选取有代表性的蔬菜样品，檫去表面泥土，剪成 1cm 左右见方 碎片，取 5g 放入带盖瓶中，加入 10mL 缓冲溶液，振摇 50 次， 静置 2min 以上。 2、取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置 10min 以上进行 预反应，有条件时在 37恒温装置中放置 10min。预反应后的 药片表面必须保持湿润。 3、将速测卡对折，用手捏 3min 或用恒温装置恒温 3min，使红色 药片与白色药片迭合发生反应。 4、每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002）表面测定法（粗筛法） 1、檫去蔬菜表面泥土，滴 23 滴缓冲溶液在蔬菜表面，用另一 片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。 2、取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。 3、放置 10min 以上进行预反应，有条件时在 37恒温装置中放置 10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 4、将速测卡对折，用手捏 3min 或用恒温装置恒温 3min，使红色 药片与白色药片迭合发生反应。 5、每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002）结果判定：检测结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制（阳性） 、 未抑制（阴性）表示，具体见下表：判定结论 强阳性结果 弱阳性结果 阴性结果判定依据 速测卡白色药片不变色，说明农药残留量较高 速测卡白色药片显浅蓝色，说明农药残留量相对较低 速测卡白色药片显天蓝色或与空白对照卡相同速测卡法测定结果阳性结果 阴性结果速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002）部分常见农药的检出限及最大残留限量（单位：mg/kg）农药名称 甲胺磷 对硫磷 水胺硫磷 马拉硫磷 久效磷 乙酰甲胺磷 检出限 1.7 1.7 3.1 2.0 2.5 3.5 残留限量 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 0.2 农药名称 敌敌畏 敌百虫 乐果 西维因 好年冬 呋喃丹 检出限 0.3 0.3 1.3 2.5 1.0 0.5 残留限量 0.2 0.1 1.0 2.0 不得检出 不得检出速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002）速测卡法的使用注意事项葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶 有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整 株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也 可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。 ? 当温度条件低于 37，酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的 时间应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用（体温）手指捏 3min 时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡 放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因：一是药片表面 缓冲溶液加得过少、预反应后的药片表面不够湿润，二是温度太低。 ? 速测卡对农药非常敏感，测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀虫剂， 以及操作者和器具沾有微量农药，都会造成对照和测定药片不变蓝。 ? 红色药片与白色药片叠合反应时间以 3min 为准，3min 后的蓝色会逐渐加 深，24h 后颜色会逐渐褪去。酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001）原理酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001）1、试剂 ? pH8.0 缓冲溶液：取 11.9mg 无水磷酸氢二钾与3.2mg 磷酸二氢 钾，用 1000mL 蒸馏水溶解。 ? 显色剂：取 160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和 15.6mg 碳酸 氢钠，用 20mL 缓冲溶液溶解，在 4冰箱中保存。 ? 底物：取 25.0mg 硫代乙酰胆碱加8.0mL 蒸馏水溶解，摇匀后置 于 4冰箱中保存，保存期不超过一周。 ? 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，但吸 光度值应控制在 0.3 以上。 2、仪器 ? 常量天平 ? 372恒温水浴或恒温箱 ? 分光光度计或快速测定仪酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001）? 分析步骤 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，檫去表面泥土，剪成 1cm 左右见方碎片，取 1g 放入烧杯或提取瓶中，加入 5mL 缓冲溶液浸没菜 叶，每 3min 摇动一下烧杯，于 10min 后吸取 2.5mL 提取液于试管，待 测。 测定： 对照溶液测试：于试管中加入 2.5mL 缓冲溶液，再加入 0.1mL 酶液、0. 1mL 底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中， 于 410nm 波长下比色，记录反应 3min 的吸光度变化值或仪器记录值 A0。 样品测试：于试管中加入 2.5mL 样品提取液，其它操作与对照溶液测 试相同，记录反应 3 min 的吸光度变化值或仪器记录值 At。 结果的表述计算： 注意：使用速测仪可以直接读出抑制率值，而无须手工计算。 注意? ?酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001）结果判定判定依据 抑制率50 抑制率50 注意： 注意 抑制率与农药残留量正相关，测定值越高，说明农药残留量越高。 说明 合格 超标，说明蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯农药酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、