甘截玻组氨陇放氮酸 WH O 的液相含成及其醉促降解南京大学申请硕士学位论文(2 2 1 ， 和 胎盘培 养组织(x 11 的 生 存能 力， 因 此 在细胞培 养中 它 可替 代血清(2 4, 2 5 7 ; 促 进 血管生成(m l : 加 速 伤口 愈 合IV , m , 29 1 和骨骼修复(3 0 1 ; 抑制 神经胶 质生长 和L 9 2 9( 鼠C 3 H / A n结缔 组织的 成 纤维细 胞M o u s e C 3 H / A n c o n n e c t i v e t i s s u e f i b r o b l a s t ) 的 生 长， ; 增 加 针对寄 生虫 ( S c h i s t o s o m a m a n s o n i ) 的 抗体 细胞的 毒性(3 2 1 。 刺激细胞 合 成胶原3 3 1有类似于超氧化物岐化酶活性1x 1能结合肝素(3 5 1 ; 能与血管紧张素H A T 1 受体相互作用 m l第三节 阳K和的生物学功能1 . G H K 和G H K - C u 在组织再生中的作用( 1 ) G H K - C u 可诱导组织再生G H K - C u 和其他与C u 离子鳌合的肚能加快多种哺乳动物组织的再生和修复， 如: 加速伤口 愈合 ( 人、大鼠、小鼠、 猪和狗)(37 , 3 9 1 ; 促进皮肤上皮细胞的再生 ( 人和动物) (39 1 : 逆转 皮 肤变厚的 老化 效 应 ( 人) ， 增 加弹性 和 皮下 脂肪 层(3 9 1 ; 提高 皮 肤移 植( 猪) 的 存 活率(39 1 : 提高毛发 移植 ( 人)的 存 活率4 0 1 ; 促 使骨 骼愈 合 ( 猪和 兔) 130 1还能愈合受损的肠内 层 ( 人和大鼠) (3 9 1 ; 愈合胃 溃烂 ( 大鼠) 139 1阻断组织内 的 氧化 损 伤 z11( 2 ) G H K - C u :一种组织保护和再生的反馈信号G H K 存在于血浆、唾液和尿中的数量足以产生多种生理活性。 有证据表明 在组织受损后产生G H K 作为生物化学反馈信号。它可能具有以 下两种功能:a首先作为有效的组织保护和抗发炎剂来限制组织受损后的氧化破坏。b作为激活组织再生的信号， 除去损坏的蛋白 质、 疤痕组织、 并沉积正常的组织。因 而， G H K - C u 把除去坏死的疤痕组织和再生组织的聚集这两个过程连结起来。在受 损组织处产生的 G H K 的浓度约为1 Q - 0 m o l / L会直接加快某些愈合作用， 。 这种G H K 加快愈合作用可能是由 两种不同的作用共同 产生: a G H K 从白蛋白 获得C u 离子直接介导愈合作用;b G H K - C u 可能是吸引伤口 处的巨 嗜细胞和与愈合相关的免疫细胞，从而促进这些细胞释放蛋白 质生长因子用于修复受损组织。M a q u a r t 的实验却有不同的看法 1 11 。 他认为 G H K - C u 作为组织再生过程的诱导物应该是在愈合的第二个阶段发挥作用。 因为G H K - C u 诱导产生的胶原的分子量远远小于伤口 修复早期产生的胶原分子童。 这表明， G H K - C u 在愈合的早期没有发挥作用， 而是在甘氮酸组氨酞软氨酸 ( G H K ) 的液相合成及其醉促降解南京大学申请硕士学位论文愈合的第二个阶段诱导胶原的 合成， 并且在细胞培养( 正常的纤维原细胞和疤痕瘤产生的纤维原细胞) 中 减少了 产生蛋白 质T G F - H - 1 的疤痕分泌以 加速胶原的分解4 z 。 而且 实 验 表明 G H K - C u 通过调 节金属蛋白 酶( M m e s ) 的 合 成 来调节 胶原的 分 解4 3 1 。 因 此，结合到G H K - C u 促进愈合的活性， 表明去疤痕的组织愈合需要金属蛋白酶 ( M M P s ) 的激活和T G F - H 一 1 的减少。( 3 ) G H K 和G H K - C u 与组织保护和再生的相关生化性质a在组织损坏后， G H K 和G H K - C u 的浓度上升到具有生物活性的有效水平 ( 1 0 - 10m o l / L ) 】 。b在人血浆和受损伤组织，G H K 是以G H K 和G H K - C u 混合物的形式存在。G H K 与C u 离子具有较强的亲和力 ( p K =1 6 . 2 ) ，该亲和力很接近白 蛋白 与C u 离子的亲和力。 G H K与白 蛋白 竞争 C u 离子。 在生理条件下仅有5 9 6 到2 0 % 的 G H K 分子以 G H K - C u 的 形式存在3 , 4 。对于巨 大细胞、 伤口处巨嗜细胞、多形核细胞以 及所有能 释放刺激组织修复的蛋白 质生长因子的细胞而言， G H K 的浓度为 1 0 “ Z m o l / L 时，是非常有效的化学引诱物( c h e m o a t t r a c t a n t ) “ od G H K 连结了除去坏死的疤痕组织和沉积新组织这两个过程。在细胞培养体系和大鼠 体内， G H K - C u ( 1 0 - 9 m o l / L ) 直接地作用于纤维原细胞， 增加胶原、 弹性蛋白 、蛋白 聚糖、 粘多 糖和核心蛋白 聚糖 ( P G - 4 0 ) m R N A 的产生 和蛋白 质的合成3 3 W e g r o w s k i 等人发 现G H K - C u 可 诱导 人正常成纤 维 细胞分 泌 粘多 糖4 5 1 。 这 种刺激效果，有两个最大效应浓度为1 0 - m o l / L , 1 0 - e m o l / L 。在更高浓度时，合成的速度下降迅速。 对合成的粘多糖电泳分析表明: G H K - C u 偏向于刺激胞外硫酸皮肤素和与细胞层相关的硫酸乙酞肝素的合成; 而对透明质酸没有影响。G H K - C u 能同时 刺激金属蛋白 酶原 ( p r o M M P s ) 及其抑制物T I M P - 1 和T I M P - 2 m R N A 的表达 及蛋白 质合 成“ “ . G H K - C u 不是 增加了 伤口 位置的 细 胞数量， 而是 增加了 每 个细 胞产生p r o M M P s 的数目 。有可能是在转录水平上增加了 表达， 但不排除是通过增加m R N A的寿命。 M M P S 及其抑制物T I M P - 1 和T I M P - 2 两者负责了除去坏死蛋白质。 同时， 实验显示仅有G H K 不能表现这样的作用， 而仅有C u 离子则仍能刺激p r o M M P s 及其抑制物T I M P - 1和T I M P - 2 m R N A 的表达及蛋白 质合成。这种金属蛋白 酶能降解多种产生于疤痕组织的胞外基质成分，如:胶原、蛋白多糖、弹性蛋白 等。这样G H K - C u 通过刺激成纤维细胞合成多种疤痕愈合成分和M rs ， 把除去坏死的疤痕组织和沉积新组织这两个过程连结起来。甘氮酷组氮酸翰氮酸 ( G x x ) 的液相合成及其醉促降解南京大学申 请硕士学位论文2 . G H K - C u 抗溃疡的作用G H K - C u 分子与H 2 受体拮抗剂的三维结构非常相似， H 2 受体拮抗剂可作为抗溃疡药物如c i m e t i d i n e( 甲佩咪肌)、r a n i t i d i n e , f a m o t i d i n e 和 n i z a t i d i n e 。有趣的是，大多数抗溃疡药物都与C u 离子有较强的亲和力。 这些让人很容易联想到G H K - C u 也可能有相似的作用。而且G H K - C u 是唾液正常成分之一，浓度大约为4 0 n g / m l , 这更加表明它有可能具有保护胃和肠内层的功能。在 P i c k a r t 的 专 利中 0 , G H K - C u 能愈合胃 溃 疡、 肠炎 和肠损 坏 ( 鼠 ) 。 L e v i n e 等人报道对1 6位重度肠炎的患者用G H K - C u 直接作用于直肠进行治疗，经过1 2周的治疗后， 通过内 窥镜检查、 组织病理检验和临 床症状发现减轻了 近6 0 % 4 7 1 . 3 . G H K - C u 和G H K 的抗氧化及抗发炎作用G H K - C u 和G H K 保护受损组织的抗氧化作用可能有很多种， 如:a G H K - C u 复 合 物 直 接 抗发 炎 39 1b阻断F e 蛋白 释放F e 离子。 1 9 9 0 年M i l l e r 等为了研究G H K - C u 促使伤口 愈合的功能是否与它影响F e 的代谢有关，检测了G H K - C u 对F e 离子催化的类脂过氧化反应的影响7 7 ; 。 因 为 受 损组织处的 F e 复合物 是有害的， 它能导 致 发炎， 又能 介导 微生 物的 感染。发现只有当F e 来源于铁蛋白时， G H K - C u 会抑制这个反应。 然而， G H K - C u 抑制铁蛋白 F e离子的 释放并不显示出明显的类似过氧化物岐化酶和血浆铜蓝蛋白的活性。 他们的假设是G H K - C u 结合到铁蛋白 释放F e 离子的通道，从而阻断了F e 的释放。因此，G H K - C u的 一种与伤口 愈合可能相关的生物活性， 也许就是抑制铁蛋白 F e 离子在受损组织的释放，防止了 伤口的发炎和微生物感染。 1 0 - 0 m o l / L 的 G H K - C u 阻断干扰素1 的作用。干扰素1 是在组织受损或遭破坏后产生， 它可以 抑制胰腺细胞释放胰岛素。 V i n c i 等人9 9 1 在小鼠 胰岛细胞培养体系中 加入5 0 U / m l 干扰素I - P ，并且加入浓度不等的G H K - C u 或C U S 0 4 ( 1 -1 0 0 0 n g / m l ) 。在加入5 0 U / m l 千扰素1 - 0 的培养体系 ( 荀萄糖诱导型) 中， 胰岛素的分泌只有空白 对照中的1 0 0 6 左右。 然而在5 0 U / m l 干扰素1 - 5 和G H K - C u( 最佳浓度为0 . 4 m m o l / L ) 一起时， 胰岛素的分泌与空白 对照相同。 但C U S 0 4对胰岛 素的分泌没有任何作用。d阻 断 依 赖C u 离子的 低密 度脂蛋白( L D L ) 的 氧化作用。 T h o m a s 等 人4 9 1 对在磷酸 缓冲溶液 ( P B S ) 或H a m s F - 1 0 培养基中的L D L 用C u 离子处理1 8 小时， 氧化程度通过硫代巴比 妥酸反应底物( T A B O R S ) 的 含量来测定。结果是， 在P B S 中氧化效应完全被G H K甘氮豉组氮跳较氮酸 ( G 袱) 的液相合成及其醉促降解南京大学申请硕士学位论文阻断。而过氧化物岐化酶仅阻断了 2 0 % 。这表明 G H K - C u 能阻断L D L 的 氧化作用。 4 . G H K - C u 的抗动脉硬化症作用:G H K - C u 和G H K 也许可以阻止动脉硬化症的发展。 尽管动脉粥样硬化的过程是很复杂的， G H K - C u 和G H K 抑制了一系列导致动脉粥样硬化的进程。 其实， G H K 也是在寻找减少血浆纤维蛋白原的方法时被发现的。血管紧张素1 1 能够加速动脉粥样硬化的发展。G a r c i a - S a i n z 等人36 发 现在分离的 大鼠 肝 细胞中 G H K 能 刺激磷酸化 酶 A 的 活 性。 这种作用与工 P 3 和C a 离子的增加相关。 但一种非肤的血管紧张素1 1 受体拮抗剂 ( 选择性A T 1 ) 一一l o s a r t a n 能阻