1 5 9出，减少细菌及毒素易位；( 2 ) 抗炎抑菌作用；( 3 ) 减少过量细胞因子的产生，降低过度免疫反应；( 4 ) 改善微循环，增加血流量；( 5 ) 脏器保护支持作用。但是，在临床工作中我们发现患者应用抗炎灵后最显著的变化就是 排便次数的增加，因而提示我们抗炎灵对M O D S 的作用是从胃肠道开始的。抗炎灵方荆中促进胃肠运动的主要药物为大黄。国内许多学者已经对大黄和寒下代表方剂大承气汤做过系统研究。吴咸中等认为大承气汤具有直接兴奋肠道平滑肌，增加胃动素的释放，改善内脏血流，并能控制血管活性肠肽及P 物质。陈德昌等认为大黄能提高胃肠道平滑肌的兴奋性并能保护胃肠粘膜。这些研究仅从组织水平阐述了大黄和以大黄为主要收缩物质的下法方剂对胃肠的作用。为了更深入阐述中药抗炎灵对胃肠平滑肌的作用，我们从细胞 生物学角度来研究其作用机制。对二组结肠平滑肌细胞分别应用乙酰胆碱和氯化钾刺激，发现M O D S 组胞浆钙离子浓度较治疗组低。说明抗炎灵促进胃肠运动则与起升高平滑肌胞浆钙离子浓度密不可分。那么抗 炎灵又是如何升高钙离子的呢? 我们通过放射免疫分析方法检测M O D S 组和抗炎灵治疗组平滑肌细胞内 码含量发现抗炎灵治疗组平滑肌细胞内I P 3 含量高于M O D S 组。说明抗炎灵组钙离子水平高于M O D S 组与 抗炎灵升高该组平滑肌细胞内B 含量有一定的关系。这也是抗炎灵改善M O D S 状态下胃肠动力障碍，进而缓解M O D S 的机制之一。、是受体一G 蛋白一肌醇脂质信号系统中的第二信使，由磷脂酶C ( P L C ) 水解P I P 2生成，并与肌质网上的专一受体受体( 、R ) 结合。取R 由四个2 6 0 k D 的相同亚基非工价结合而成，这四 个亚基组成一个跨膜孔道，每个亚基都有、结合部位，当3 4 个部位被飓占据时，受体复合物构象发生改变，打开离子通道，钙离子就被释放出来，使胞浆游离c a 2 + 升高。 我们又用硝酸还原酶法检测二组血清N O 含量的变化，发现抗炎灵组低于M O D S 组。由此可推断出抗炎灵增加胃肠动力的又一机制是减少N 0 的生成量。一氧化氮合酶( N O S ) 在体内分布很广，在胃肠壁全层均 有分布，从内到外粘膜层、粘膜下层、肌层、浆膜层以及粘膜下层和肌间神经丛，其中以环行平滑肌中最多。体内多种细胞如胃肠平滑肌细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞等均可在N O S 的催化下，使左精氨酸生成胍氨酸 和N O 。所以N o 在调节胃肠功能中具有广泛作用。目前，认为N o 可能参与的功能有：( 1 ) 胃肠粘膜血流调节；( 2 ) 胃肠道分泌功能调节；( 3 ) 胃肠粘膜免疫防护屏障；( 4 ) 胃肠粘膜炎症；( 5 ) 胃肠动力调节。它是非肾上腺素能非胆碱能( n o n a d r e n e r g i c n o n c h o l i n e r g i c ，N A N C ) 神经的一个抑制性调节递质，从抑制性神经元释放出来 后，弥散入平滑肌细胞后激活鸟苷酸环化酶( G c ) 引起c G M P 增加。c G M P 通过对P 啦水解的抑制使峨生成 减少；还可通过c G M P 依赖性蛋白激酶对钙离子、镁离子一A T P 酶( 钙泵) 的活化引起胞浆钙离子浓度降低，进而影响胃肠动力。总之，抗炎灵促进胃肠动力机制是同时启动c A M P 、c G M P 和肌醇脂质两套信号传导系统，即升高平滑肌 细胞胞浆钙离子浓度和平滑肌细胞飓和降低N O 来实现的。复方参七汤对人结肠癌细胞株接种裸鼠肝转移 n m 2 3 一H 及其血C K 2 0 m R N A 表达影响的实验研究沈洪薰陆飞钱晶晶陈莉陈瑞新于秀陈玉泉 江苏省南通医学院附属医院普外科( 2 2 6 0 0 1 )摘要目的：建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型，研究复方参七汤对裸鼠肝转移组织n m 2 3 一H l 及其血C K 2 0 m R N A 表达影响。方法：对2 4 只B A L B C 裸鼠，腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉，经脾脏注入指数生长期的人结肠癌( 低分化腺癌) 细胞悬液( L s l 7 4 t ) 0 i m L ，合细胞数lx1 0 6 个，切除脾脏，分成实验组和对照组各1 2只。实验组每天喂以含0 6 m L 2 0 9 体重复方参七汤颗粒饲料，对照组裸鼠喂以颗粒饲料，记录裸鼠体重、神 志、摄食。喂养3 w k 后，抽取各组裸鼠心脏血后处死，观察腹腔内肿瘤生长情况，检查肝转移癌灶数目，挖出 各个癌结节并称重。标本作病理组织学检查。采用免疫组化( s P ) 方法检测肿瘤转移抑制基因r i m 2 3 H i 1 6 0N D P K 表达，同时采用巢式逆转录聚合酶链反应( R T P c R ) 法，检测裸鼠血中C K 2 0 m R N A 表达。结果：建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型，肝转移率1 0 0 。病理组织学证实肝转移癌细胞具有人结肠癌( 低分化腺癌) 特征。实验组裸鼠实验前后体重增长( 4 1 2 0 5 3 ) g 明显高于对照组( 3 2 14 - 0 5 9 ) g ，P o 0 5 ) ；实验组裸鼠的癌结节重( 6 3 6 74 - 2 1 2 9 ) r a g 明显小于对照组( 9 4 3 2 3 7 8 6 ) r a g ( P O 0 5 ) ；实验组的癌重肝重为8 9 3 i 明显小于对照组1 3 2 5 3 ，( P 0 0 5 ) 。见表3表3 复方参七汤对裸鼠肝转移癌灶重豆癌重肝重的影响( m g 互S注：P = o 6 5 2 7 ，P = o0 2 3 8 ，P = 0 0 2 4 12 4 病理组织学变化实验组肝转移癌组织有凝固性坏死，组织结构不清，伴有炎细胞浸润，部分癌结节边缘存留少量癌组织，小片状癌巢等。对照组的肝转移癌细胞呈团块状分布。细胞体积较大，核大不规则，核仁1 6 2明显，问有小腔样结构，癌组织无坏死性改变，。两组均星人结肠癌低分化腺癌表现，其它脏器未发现转移病灶。2 5 复方参七汤对裸鼠肝转移组织中肿瘤转移抑制基因n m 2 3 一H 1 的影响。实验组裸鼠肝转移癌组织中n m 2 3 H l N D P K 阳性表达率为6 6 7 ( 8 1 2 ) 明显高于对照组n m 2 3 H l N D P K 阳性表达为1 1 1 ( 2 1 2 ) ，P 0 0 5 ，提示复方参七汤抑制裸鼠结肠癌肝转移的发生与发展，促使肿瘤转移抑制基因n m 2 3 H ，一N D P K 阳性表达率高达6 6 7 。见表4 。表4 复方参七汤对裸鼠肝转移组织中r i m 2 3 一H I 的影响2 6C K 2 0 m t L N A 的阳性表达实验组裸鼠肝转移血中C K 2 0m R N A 阳性表达率为9 1 6 ( 1 1 1 2 ) ，对照组为1 0 0 ( 1 2 1 2 ) ，f 检验( F i s h e r 确切概率法) 无统计学意义。另外，1 0 只正常裸鼠血中C K 2 0 r r u R N A 均呈阴性表达。随后对实验组和对照组裸鼠血中C K 2 0m R N A 采用半定量法，计算出C K 2 0m R N A 表达的相对值，实验组0 3 9 8 0 1 4 3 明显低于对照组0 5 1 8 0 0 9 0 ，P = 0 0 2 3 5 ，提示复方参七汤可抑制裸鼠结肠癌肝转移血中C K 2 0m R N A 阳性表达，见表5 。表5 两组外周血中C K 2 0 m R N A 表达的相对量比较( x4 - S )3 讨论3 1 建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型实验性结肠癌肝转移模型按动物种类分为裸大鼠、裸小鼠、大鼠和小鼠等；按细胞来源分为人癌细胞株和动物癌细胞株；按接种瘤细胞株途径分为脾内、门静脉内、回结肠静脉、盲肠壁内、肝脏注入等；脾脏接种瘤细胞株后是否保留脾脏，可分为脾切除和脾保留法。本研究经脾脏注入L s l 7 4 t 细胞株脾切除法，成功地建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型。肝转移率达1 0 0 。无论在对照组或实验组裸鼠肝表面均不等( O 2 0 7 e m ) 的灰白色肝转移癌结节，病理组织学显示裸鼠肝转移癌灶有人结肠癌( 低分化腺癌) 表现( 图I ，2 ) 。3 ，2 n m 2 3H l N D P K 可作为人结肠癌裸鼠肝转移预测基因n m 2 3 基因是肿瘤转移抑制基因，由S t e e g P S 等从K 1 7 3 5 鼠黑色素瘤细胞株分离出来的。n m 2 3 基因的等位基因缺失、突 变和低表达与多种人类肿瘤转移相美。n m 2 3 基因定位人染色体1 7 q 2 1 2 3 区域。n m 2 3 基因包括n m 2 3 H l 和 n m 2 3 H 2 两亚型。n m 2 3 H l m R N A 水平与肿瘤转移更为密切，其编码产物二磷核苷激酶( N D P K ) 。关于r i m 2 3 基因在结直肠癌肝转移发生的作用和重要性尚有争论。S R r i i s ，一M ；L e e ，一( 2 3 认为r i m 2 3 基因在肿瘤转移发生的作用和重要性是令人怀疑的；而B e m e y ，一C R ；F i s h e r ，一R J ：Y a n g ，一J 认为r i m 2 3 可作为结直肠肝转移 的预测因子，研究发现结直肠癌患者肝转移发生的危险性与n m 2 3 N D P K 表达有关。N m 2 3 的价值仅仅有助于确定结直肠癌根治性切除患者，特别是D l l k e s B 期患者肝转移发生危险性增加，对这些患者应考虑辅助化疗。影响结直肠癌预后或是人染色体1 7 q 2 1 2 3 基因组变化或是n m 2 3 N D P K 表达。Y a m a g u e h i ，A 研究“结 直肠癌肝转移基因变化和它们的临床应用”一文中指出r i m 2 3 可能在抑制肝转移起作用。本实验研究把n m 2 3 H ，一N D P K 作为人结肠癌细胞株裸鼠肝转移的预测基因，其一，本实验研究对象为人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型，对照组1 2 只裸鼠均有肝转移癌灶，其病理组织学显示有人结肠癌( 低分化癌) 表现，具备了实验研究的条件；其二，对照组人结肠癌细胞株裸鼠肝转移n m 2 3 H 1 一N D P K 呈低表达，阳性表达率仅为1 6 6 ( 2 1 2 ) ，而低表达率为8 3 4 ( 1 0 1 2 ) ，这符合r i m 2 3 基因低表达与多种人类肿瘤转移相关的实验要求。 3 3 裸鼠肝转移血中C K 2 0 m R N A 阳性表达可作为人结肠腺癌细胞存在于循环的指标C K 2 0 为c K 中一种亚型，具有严格的上皮组织特异性。C K 2 0 m R N A 的表达在癌细胞发生、生化、衰变、肿瘤转移、体外培养等改变均呈阳性表达。本实验建立人结肠腺癌细胞株裸鼠肝转移模型，应用人的结肠腺癌细胞, s 1 7 4 t ，在裸鼠肝】6 3转移中并不改变原人结肠癌细胞的生物学特性。曾有人把裸鼠比作“试管”，应用R T P C R 检测裸鼠外周血中C K 2 0 m R N A 表达是否阳性，即表示裸鼠血中是否存在肿瘤细胞。基于这样的认识，本实验研究把裸鼠肝 转移血中C K 2 0 m R N A 表达作为人结肠癌细胞存在于循环的指标。本实验结果证实，1 0 只正常裸鼠血中C K 2 0 m R N A 为阴性表达，表示不存在人结肠癌细胞；而实验组和对照组裸鼠肝转移率分别为1 0 0 ( 1 2 1 2 ) 和1 0 0 ( 1 2 】2 ) ，实验组和对照组裸鼠肝转移血中C K 2 0 m R N A 阳性表达率分别为9 1 6 ( 1 1 1 2 ) 和1 0