第五届全国环境与职业医学研究生学术研讨会( 论文集)热化疗对肿瘤细胞生长影响的研究+王琳1 ，杨继要2 ，吴逸明1摘要：【目的】研究热化疗联合对肿瘤细胞生长的影响。 方法】构建人谷胱甘肽硫转移酶P 1 ( g l u t a t h i o n e s - t r a n s f e r a s eP 1 ，G S T P I ) 基因的真核表达载体，转染A 5 4 9 细胞，然后采用化疗及热化疗联合的方法处理传染前和转染后细胞，用噻唑蓝比色法( M T T 法) 和流式细胞术( F C M )检测转染前后A 5 4 9 细胞在不同条件下的生长和细胞周期分布，并进行比较。【结果】两种细胞在不同浓度的紫杉醇作用下，除2 0 0pg l 组外，各组比较差别均有统计学意义( P O 0 5 ) 。表1 转染与未转染细胞增殖率的比较( )T a b l e lC o m p a r i s o no ft h ep r o l i f e r a t i o nr a t eo ft r a n s f e c t e da n dn o n - t r a n s f e c t e dc e l l s2 5 常用肿瘤治疗方法对转染和非转染细胞生长的影响第五届全国环境与职业医学研究生学术研讨会( 论文集)2 5 1 化疗药紫杉醇对转染和非转染细胞生长的影响以不同的药物浓度作用于两种细胞，M T T 法测定其增殖率，结果见表2 ，除2 0 0l ag 1 组外，其余各组细胞增值率比较，差别均有统计学意义( 尺0 0 5 ) ，且未转染细胞增殖率低于转染细胞。表2 不同药物浓度下转染与未转染细胞增殖率的比较( )T a b l e 2C o m p a r i s o no f t h ep r o l i f e r a t i o nr a t eo ft r a n s f e c t e da n dn o n t r a n s f e c t e dc e i l su n d e rd if f e r e n td r u gc o n c e n t r a t i o n s2 5 。2 热化疗联合对转染和非转染细胞生长的影响4 3 “ C 力H 热下，不同的药物浓度作用于两种细胞，M T T 法测定其增殖率，结果见表3 ，各组细胞增殖率比较，差别均有统计学意义( P O 0 5 ) ，且未转染细胞增殖率高于转染细胞。2 6 热化疗联合对转染和非转染细胞周期的影响综合以上实验结果，选取4 3加热联合1 2 5l ag 1 紫杉醇作用于两种细胞，流式细胞仪检测其生长周期，结果见表4 ，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) ，且G O G 1 期和G 2 M 期延长，S 期缩短。3 讨论G S T s 是一组多功能蛋白质，是较大的超基因家族，具有催化各种化学物质及其代谢产物与谷胱甘肽的巯基共价结合的功能，保护细胞免受急性化学物质攻击和抑制细胞癌变，G S T P l 活性的减低可引起肺癌危险性的增高“1 ，使职业人群对作业环境中的致癌物敏感。第五届全国环境与职业医学研究生学术研讨会( 论文集)表34 3 加热不同药物浓度下转染与未转染细胞增殖率的比较( )T a b l e 3C o m p a r i s o no ft h ep r o l i f e r a t i o nr a t eo ft r a n s f e c t e da n dn o n - t r a n s f e c t e dc e l l su n d e rd i f f e r e n td r u gc o n c e n t r a t i o n sw i t h4 3 “ Ch e a t i n g未转染转染5 3 3 0 0 06 7 4 0 0 08 8 2 0 01 9 6 0 0 03 7 9 0 0 0 1 8 0 6 l0 0 0 01 3 0 0 0 0线粒体在凋亡过程中起中心控制作用，而线粒体因子如细胞色素C 的释放则是支配细胞命运的关键因素。由于细胞色素C 具有亚铁血红素基团，它可以在呼吸链复合酶I I I ( 细胞色素还原酶) 和工V ( 细胞色素氧化酶) 之间传递电子，当其缺乏时，电子传递链被阻断，A T P 合成减少，不完全氧化造成活性氧( R O S ) 生成过度，而R O S 是诱导凋亡的重要因素。R O S 可以直接参与细胞的损伤过程，还可以作为凋亡信号在细胞与细胞之间相互传递、相互作用3 ，在激活细胞内的凋亡通路的同时，激活更多的细胞凋亡发生。此外，R O S 还参与细胞分化、增殖、肿瘤发生、基因表达调控等多种分子事件，肿瘤化疗过程中也有活性氧参与发挥作用H 一1 。与正常细胞相比，癌细胞的一个显著特征是细胞内抗氧化酶活力低下，大量研究证明低浓度的活性氧可以促进一系列正常或癌变细胞的生长，是细胞维持生存和生长不可缺少的因子，缺少了它们，细胞将无法增殖，甚至会死亡阳3 ，所以转染与未转染细胞在没有外界刺激的情况下，增殖没有发生变化( 见表1 ) 。G S T P I 能保护细胞，防止化学致癌物诱导的细胞恶性转化，也是造成其对化疗药4 5第五涡全国环境与职业医学研究生学术研讨会( 论文集)物耐药的原因。而化疗是非小细胞肺癌临床治疗的首选方法，紫杉醇是目前临床上常用的化疗药物，选用临床常用的剂量处理细胞后，发现转染前后细胞生长发生了变化( 见表2 ) ，未转染细胞增殖率低于转染组细胞，这主要是由于G S T P l 导致细胞耐药性增高。肿瘤热疗是一种新的肿瘤治疗方法，能够在有效的温度范围内提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本文采用临床常用的4 3 这个热疗剂量，观察热疗对化疗的促进作用，得到了较为明显的结果( 见表3 ) ，未转染细胞增值率反而高于了转染细胞。同时细胞周期也发生了变化( 见表4 ) 。R O S 的升高也可以影响酶蛋白的活性，从而导致高剂量组G S T 呈下降趋势t l t ) 在未应用热疗时，高剂量药物( 2 0 0p pg L 1 ) 作用下，两种细胞的增殖率比较，差别没有统计学意义( P = O 3 1 ) ，而加热后高剂量组的两种细胞增殖率比较，差别有统计学意义( 尺0 0 5 ) 。G S T P l 的解毒与耐药，及其与R O S 、凋亡的关系仍需研究，它们在职业肿瘤中预防和治疗的作用，需要进一步探讨。本实验在河南省分子医学重点实验室和郑州大学公共卫生学院预防医学实验中心完成。参考文献：【1 】夏英，张翠兰C Y P 4 5 0 和G S T P l 基因多态性与肿瘤易感性研究进展中华放射医学与防护杂志，2 0 0 3 ，1 0 ，2 5 ( 5 ) ：3 8 5 - 3 8 6 【2 X i aC ，H uJ ，K e t t e m rB ，e ta 1 T h eo r g a n i z a t i o no ft h eh u m a nG S T P1 1g e n ep r o m o t e ra n di t sr e s p o n s et or e t i n o i ca c i da n dc e l l u l a rr e d o xs t a t u s B i o e h e mJ ，1 9 9 6 ，3 1 3 ( 1 ) ：1 5 5 1 6 1 3 P l e t j u s h k i n aO YF e f i s o v aE K , e ta 1 H y d r o g e nP e r o x i d eP r o d u c e dI n s i d eM i t o c h o n d r i aT a k e sP a r ti nC e l l - t o C e l lT r a n s r n i s s i o no f A p o p t o t i cS i g n a l B i o c h e m i s t r y ( M o s t ) ，2 0 0 6 ，l ，71 ( 1 ) ：6 0 6 7 4 A r a i 互Y a s u d aZT a k a y a 互e ta 1 I m r n u n o h i s t o c h e m i c a le x p r e s s i o no fg l u t a t h i o n eS - t r a n s f e r a s e P1i nu n t r e a t e dp r i m a r yn o n - s m a l l - c e l ll u n gc a n c e r J 】C a n c e rd e t e c tP r e v , 2 0 0 5 ，5 ，2 4 ( 3 ) ：2 5 2 - 2 5 7 【5 F i g u e r a sJ ，G e n eM ，G o m e z - C a t a l a nJ ，c ta 1 L u n gc a n c e rs u s c e p t i b i l i t yi nr e l a t i o nt oc o m b i n e dp o l y m o r p h s m ao fm i c r o s o m a le p o x i d eh y d r o l a s ea n dg l u t a t h i o n eS - t r a n s f e r a s e P1 C a n c e rL t t ，2 0 01 ，9 ，2 8 ；1l3 ( 2 ) ：15 5 6 2【6 S a n e rH ，W a r t e n b e r gM R e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sa ss i g n a l i n gm o l e c u l e si nc a r d i o v a s c u l a rd i f f e r e n t i a t i o no fe r n b r y o n i cs t e mc e l l sa n dt u m o r - i n d u c e da n g i o g e n e s i s A n t i o x i dR e d o xS i g n a l ，2 0 0 5 。N o v D e c ，7 ( 1 l - 1 2 ) ：1 4 2 3 1 4 3 4 【7 A l e x a n d r eJ ，B a a e u xF ，e ta 1 A c c u m u l a t i o no fh y d r o g e np e r o x i d ei sa ne a r l ya n dc r u c i a ls t e pf o r第五届全国环境与职业医学研究生学术研讨会( 论文集)p a c l i t a x e l i n d u c e dc a l e e r c e l l d e a t h b o t h i n v i t r oa n d i n v i v o h a tJ C a n c e r ，2 0 0 6 ，l ，3 1 ；E p u ba h e a d o fp r i n t 【8 】顾有方，陈会良，刘德义，等自由基的生理和病理作用动物医学进展，2 0 0 5 ，2 6 ( 1 ) ：9 4 - 9 7 9 N e l s o nW GD eM a r z oA M ，D e e e s eT L ，e ta 1 P r e n e o p l a s t i ep r o s t a t el e s i o n s ：a no p p