O n f i t n e s sL 。d r i v e - D i gD i sS c i ，1 9 8 1 ，2 6 ( 7 ) ：6 2 29A k i h a r uW a t a n a b e ，T a k a h i r oS a k a i S h u n l c h lS a t O e tah e p a t c 蚰c 8 p h a l 。p 8 t h yH e p a t o l o g y ，19 9 7 z 6 ( 6 ) 1 4 1 0m 季智，张慧芬洪院生，等乳果糖措疗亚临床肝性脑病的疗教观察中西医结台肝病杂志1 9 9 9 ，9 ( 2 ) ；1 3 - - 14l lR i g g i oO ，R a l d u c c iG ，A r i o s t oF ，e te lL a c d t oLi nt h et r e a t m e n to fc h r o n i ch e p a t i ce n c e p h a l o p a t h yar e a d o m i dr o ”。v e rc o m p a r i s o nw i t hJ a c t u l o s eH e p a t o - - g a s t r o e n e r o J o g y ，1 9 9 0 。3 7 ：5 2 45 3 6海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤及其 免疫作用的实验研究盛国光谭大琦李秋华李卫星湖北省中医院( 4 3 0 0 6 1 )摘要海珠益肝胶囊临床用于治疗乙型病毒性肝炎患者取得良好疗效。本文采用B C G + L P S 所致小鼠免疫性肝损伤模型和氢化可的松或环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下模型。观察海珠肝胶囊对免疫性肝损伤及其免疫作用的影响。结果显示：1 、海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤肝保肝降酶作用。能降低血清A I 。T 、A S T活力单位( P 0 0 1 ) ，减少肝脾肿大及其脏器系( P 0 0 1 ) 和减轻肝组织的病理性损害( P 0 0 1 ) 。2 、海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤小鼠的免疫亢进状态，有明显抑制作用，与免疫抑制剂地塞米松的作用相似。使腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数下降( P o 0 5 o 0 1 ) ，血清溶血素H C 5 0 降低( P 0 0 1 ) ，C o n A 诱导的脾T 淋巴细胞增殖反应的0 D 值下降( P o 0 1 ) 。4 、海珠益肝胶囊对免疫功能低下小鼠有免疫促进作用，其作用与左旋咪唑相似。提高腹腔巨噬细胞碳粒廓清指数( P 0 0 1 ) ，提高腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数( P 0 0 5 0 ，0 1 ) ，提高血清溶血素H C 5 0 值( P 0 0 1 ) 提高C o n A 诱导的脾淋巴细胞增殖反应0 D 值( P 00 1 ) 和提高P H A 刺激外周淋巴细胞转化的淋巴母细胞的百分率( P 0 0 1 ) 。综上所述，海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤有保肝降酶作用。海珠益肝胶囊对免疫应答的各个环节，如巨噬细胞功能，B 细胞和T 细胞免疫均有明显作用。对免疫亢进状态有免疫抑制作用，在免疫低下状态则有免疫促进作用。本药物具有的双向免疫调节作用，认为是治疗乙型病毒性肝炎的重要机理之一。本实验研究采用B C G + I 。P S 所致免疫性肝损伤，氢化可的松( 或环磷酰胺) 所致免疫低下模型小鼠，观察中药复方海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤及其免疫作用的影响，现将实验结果报告如下。实验材料1 实验动物昆明小鼠，雌雄均用，由同济医科大学实验动物部提供，台格证号：医动字第19 0 5 2 。B A I 。B C 近交纯系雄性小鼠，1 8 - - 2 2 9 ，购自湖北医学科学院实验动物中心。2 主要试验药品及试剂2 1 受试药物海珠益肝胶囊浸膏液( 以下简称海珠益肝) 每毫升浸膏液含复方生药量分别为0 3 7 5 9 、0 7 5 9 、1 5 9 ( 即3 7 5 、7 5 、1 5 0 ，由湖北中医学院肝病脏象研究所提供。2 2 阳性对照药地塞米松片( 抑制免疫作用对照药) 广东省制药工业公司华南制药厂生产；左旋咪唑片( 增强免疫作用对照药) 广东江门制药厂生产。5 5 2 3 其它药品及试剂氢化可的松注射液( 以下简称氢可) 天津市氨基酸公司人民制药厂生产；注射用环磷酰胺Y ) 上海华联制药有限公司生产；冻干卡介苗制剂( B C G ) 卫生部兰洲生物制品研究所生产；植物血凝素( P H A ) 广州医药工业研究所生产；C o n A 、I 。P S 、M T T 均购自美国S i g m a 公司。实验方法和结果l ，对B C G + L P S 所致小鼠免疫性肝损伤的影响方法：取雄性昆明小鼠7 2 只，体重2 4 2 6 克，随机分成6 组，每组1 2 只。第1 组为正常对照组。第2 6 组分别为免疫性肝损伤模型组，海珠益肝7 5 9 k g 、1 5 9 k g 、3 0 9 k g1 和地塞米松6 m g k g _ 1 组，第2 6 组小鼠于实验第l 天尾静脉注射B C G 2 0 0 m g k g ，第1 2 天尾静脉注射L P S 0 4 m g k g 。第1 2 组小鼠在实验第1 天开始灌服N S 2 0 m l k g ，第3 5 组小鼠分别灌服3 7 5 、7 5 和15 0 海珠益肝2 0 m lk g1 ，第6 组灌服0 0 3 地塞米松2 0 m i k g ，每日1 次，连续1 2 天。于实验第1 2 天尾静脉注射L P S 后8 小时( 末次给药1 小时) 取血，离心，用全自动生化分析仪测定血清中A L T 、A S T 活力单位，同时处死小鼠，称体重以及肝脏重量和脾脏重量计算其肝、脾组织脏器系数( g 1 0 9 “体重) ，并取肝组织进行病理组织学检查。病理组织学损伤程度分级：“一”未见明显病理损伤；“+ ”部分肝细胞浊肿伴有散在的点状坏死，汇管区少许炎性细胞浸润；“十+ ”肝细胞浊肿有点状坏死及小灶性坏死，可见散在的肉芽肿形成，汇管区有大量炎性细胞浸润；“+ + + ”肝细胞浊肿并有大片状坏死灶，肉芽肿形成，汇管区及其周围有大量炎性细胞浸润。结果：( 1 ) B C G + L P S 致免疫性肝损伤模型小鼠血清中A L T 、A S T 活力单位较正常对照组明显升高，肝、脾脏器系数增大，肝组织有明显的病理性损伤，表明B C G + I ，P S 能建立小鼠免疫性肝损伤模型。( 2 ) 用B C G + L P S 造模，灌服海珠益肝7 5 9 k g 一、1 5 9 k g 、3 0 9 k g - - 1 和地塞米松6 m g k g _ 1 后，小鼠血清中A f ，T 、A S T 活力单位均较免疫性肝损伤模型组低，脏器系数减小，病理性肝损伤程度减轻，提示药物对免疫性肝损伤小鼠有保肝降酶作用。( 见表1 、表2 、表3 )5 6 表1 海珠益肝对B C G + L P S 致免蹙肝损伤小鼠血清A L T 、A S T 古影响( n = 1 2 )各组与模型组比较* * P 0 0 1裹2 海珠盘肝对B C G + L P S 致免疫性肝掼伤小肝、脾脏叠系数的影响( n 一1 2 )各组与模型组比较* * P o 0 1裹3 海珠盐肝对B C G + L P S 致免疫性肝掼伤小肝姐觑宿理改变的影响2 对免疫性肝损伤小鼠的免疫功能影响2 1 腹腔巨噬细胞吞噬功能试验方法：腹腔巨噬细胞吞噬鹃红细胞( C R B C ) 吞噬试验。取雄性小鼠6 0 只，体重2 0 2 4 克。动物分组、B C G + I ，P S 致免疫性肝损伤模型方法、药物给药方法、剂量、途径和天数同上。于实验第1 2 天，尾静脉注射I ，P S 后3 小时，每只小鼠腹腔注射1 0 “C R B C0 5 m l ，然后在3 小时后再腹注N S2 m l ，轻揉腹部，处死小鼠，剖吸腹腔液、离心、涂片、染色、计算腹腔巨噬细胞吞噬C R B C 百分率和吞噬指数。结果：( 1 ) 免疫性肝损伤模型组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和眷噬指数较正常对照组明显增加( P 0 0 1 ) ，提示B C G + I 。P S 所致免疫性肝损伤小鼠的非特异性免疫吞噬功能亢进。( 2 ) B C G + L P S 造模，用悔珠益肝7 5 9 k g 1 5 9 k g 、3 0 9 k 9 1 和地塞米松6 r a g k 9 1 组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬C R B C 百分率和吞噬指数较模型对照组低，表明药物能降低免疫性肝损伤小鼠的非特异性免疫吞噬功能亢进状态。结果见表4 。裹4 诲珠盏肝对B C G + L P S 致免疫性肝摄伤小番虐功睫的影响( n ；1 0 )各组与模型L Ns ) 组比较* P 0 0 5 * * P O 0 I2 2 抗绵羊红细胞抗体一血清溶血紊测定试验方法：雄性昆明种小鼠6 0 只，体重2 2 2 6 克动物分组，B C G + L P S 致免疫性肝损伤造模方法、药物给药剂量、方法、途径和天数同上。于实验第7 天每只小鼠腹腔注射3 ：5 绵羊红细胞( s R B C ) 0 g m l 进行免疫，实验第1 2 天，尾静脉注射I 。P S 后8 小时( 柬次给药l 小时) 取血，分离血清，按血清溶血索测定法“，测定小鼠血清的半数溶血值( H C 5 0 ) 。结果：( 1 ) 免疫性肝损伤模型小鼠比正常对照组小鼠血清H C 5 0 高。提示B C G + L P S 所致免疫性肝损伤小鼠血清中特异性体液免疫即抗S R B C 抗体水平明显升高。( 2 ) B C G + L P S 造模，海珠益肝7 5 9 k g 、1 5 9k g1 、3 0 9 k g - 1 和地塞米松6 m g k g 。组小鼠与模型对照组比较，血清中H C 5 0 降低，表明药物对免疫性肝损伤小鼠特异性体液免疫功能亢进有一定抑制作用。结果见表55 7 寰5 海珠盏肝对B C G + L P S 致免瘦肝插伤小鼠血清溶血素的影晌23 对C o n A 诱导的脾淋巴细胞的增殖实验“方法：取雄性B A L B C 近交纯系小鼠6 0 只，体重1 8 2 2 克，动物分组，B C G + L P S 致免峻性肝损伤造模方法，药物给药剂量，途径和天数同上。于实验第1 2 天，尾静脉注射L P S 后8 小时( 柬次给药l 小时) 处死小鼠，无菌取脾，置入2 m lH a n k s 液中，轻轻挤压数次，制成细胞悬液，经2 0 0 目筛网过滤，用H a n k s 液洗三次，然后用培养液调整细胞浓度为2 i 0 6 m l 。将细胞悬液分为两组，每组平行3 孔，加入9 67 b 培养板中，每孔0 I m l 。一组加入C o n A ，另一组不加C o n A 作对照，置人5 C Oz 培养箱培养7 2 小时，在培养结束前4 小时，每孔轻轻吸去上清液，加人不含小牛血清的D M E M 液，同时每孔加入M T T 5 0 u l 继续培养4 小时，培养结束后，每孔加入0 i m l 酸性异丙醇，吹打混匀。用酶联免疫检测仪，以波长5 7 0 n m 测定O D 值。结果：( 1 ) 免疫性肝损伤模型组小鼠对C o n A 诱导脾淋巴细胞增殖反应O D 值较正常对照组高，表明免疫性肝损伤时小鼠T 淋巴细胞功能增强。( 2 ) B C G + L P S 造模，用海珠益肝7 5 9 k g 一、1 5 9 k g 、3 0 9 虹“和地塞米松6 m g k g “组小鼠对C o n A 诱导脾淋巴细胞增殖反