百合叶片离体不定芽发生和快繁技术研究。张艺萍“屈云慧( 云南省农业科学院花卉研究所，昆明，6 5 0 2 0 5 )摘要以百合叶片为材料，建立了百台叶片不定芽发生、植株再生和微繁的技术体系。研究了不同消毒时间、不同激素 及其组各对叶片不定芽发生、增殖和生根的效应。结果显示，用o 1 的氯化汞对叶片消毒5m i n 效果较好，污染率为3 6 ，萌动率为7 5 ，诱导率为6 8 8 。M S + 6 - B A 2 0 m g L + N A A 0 5 m s L 是叶片不定芽发生的适宜培养基；M s + 6 - B A l 0 m g L + N A A 0 1 叫L 是不定芽增殖的适宜培养基；M S + N A A 0 1 “I 以是生根的适宜培养基。关蕾词百合；叶片；不定芽；快繁R e s e a r c hO i la d v e n t i t i o u ss h o o tr e g e n e r a t i o na n dm i c r o p r o p a g a t i o nf r o ml e a v e so fl i l yZ h a n sY i p m g Q uY u n h u i( F l o w e rR e s e a r c hi n s t i t u t eo fY u n n a nA c a d e m yo fA g r i c u l t u r a lS c i e n c e s ，K u n m i I l g ，6 5 0 2 0 5 )A b s t r a c tA d v e n t i t i o u ss h o o tf o r m a t i o n 。p l a n tr e g e n e r a t i o na n dm i e m p r o p a g a t i o nw e r ee s t a b l i s h e di n l vl e a f E f f e c t0 fd m r e n ts t e r i l i z e dt i m e ，k i n do fh o r m o n ea n d 沁c o m b i n a t i o nO na d v e n t i t i o u ss h o o tf o t m a t i o n ，p l a n tr e g e n e r a t i o na n dr o o tr e g e n e r a t i o nw s t u d i e d 1 1 l er e s u l ts h o w e d l a te x p l a n ts t e r i l i z e di n0 1 0 a q u e o u sn l e r c u r i ec h l o f i d ef o r3r a i nh a sb e t t e re f f e c ta n d3 6 o fc o n t a m i n a t i o nr a t e ，7 5 o f g e r m i n a t i n gm t e ，6 8 8 o f i n d u c e m e n tr a t e ，M S + B A2 0 m g L + N A A 0 5 m g Lw 船s u i t a b l e f o ra d v e n t i t i o u ss h o o t f o r m a t i o n f m m t h e l e a f t h es h o o t sg r e w w e l l i i t M S + B A1 0 m g L + N A A0 1 m s Ln l e d i l l m M S + N A A0 1 m s L t h eb e s t m e d i t u n f o rr o o tr e g e n e r a t i o n K e yw o r d sL i l y ；L e a v e s ；A d v e n t i t i o u ss h o o t ；M i c r o - p r o p a g a t i o n百合( L i l y ) ，学名L i l i u m ，为百合科百合属多年生球根类草本植物。百合花大，花姿优美，特别 是东方百合( O r e n t d 扣概) 还具有浓郁的芳香，深受人们的喜爱。百合切花是目前世界上发展最 快的花卉之一，市场前景广阔。百合以有性方式( 种子繁殖) 和无性方式进行繁殖，而以无性繁殖为主，生产上主要靠扦插繁殖和分球繁殖等方式繁殖。而组织培养的方法也是目前运用较多的方法之一。组织培养中常用的是百合的鳞片作为外植体，还有用花丝、花梗、花托、花柱、花葶、柱头、带叶茎段、子房、珠芽、根、茎尖等作为外植体培养成功的【2 。 ，而用叶片为外植体进行直接再生体系的研究较少，所报道的多是用组培苗的叶片进行诱导u ”“J 。本研究直接用采自田间的百合叶片为外植体来进行再生体系的研究，为百合优良株系扩繁和野生百合资源的保存奠定了基础，并建立了快繁体系。1 材料与方法1 1 材料品种“A c a p u l c o ”，田间叶片。 1 2 方法将叶片在流水下冲洗1 2 m i n ，然后用7 5 的酒精棉球擦洗叶片表面，再用o 1 的氯化汞溶液消云南省自然科学基金( 2 0 ( B C 0 0 2 8 Q ) * - 作者简介：张艺萍( 1 晰一) ，女，云南大理人，硕士，主要从事组培技术和病害方面的研究。百台叶片离体不定芽发生和快繁技术研究1 0 7毒3 9 m i n ，用无菌水洗4 遍，将叶片放在滤纸上吸干水分后切成2 r a n 2 e m 的小块，平放接种于诱导培 养基M l 、M 2 、M 3 和M 4 上，每处理5 瓶，每瓶5 块；随后将诱导出的不定芽转接至M s + 2 3 叫L6 - B A + 0 1 0 5 m e V L N A A + 3 一8 糖的培养基上，摸索适宜不定芽增殖的培养基；将苗高为2 c m 左右的苗转接至M s + o 0 5 0 1 5 m g L N A A 的培养基中，探求适宜的生根培养基。培养室温度2 4 l o c ，光照强度2 0 0 0 L x ，1 0 h d 。2 结果与分析2 1 不同消毒时间对百合叶片再生植株的影响从表1 可以看出，用0 1 氯化汞对百合叶片消毒5 m l n 时获得较好效果，其污染率为3 6 ，萌动率为7 5 ，诱导率为6 8 8 。当消毒时间为7 m i n 时，污染率较低，但由于消毒时间长，不仅杀死了微生物，同时也导致外植体损伤，使萌动率、诱导率降低，而消毒9 m i n 时，则全部外植体褐化死亡。裹1 不同消毒时问对百合叶片不定芽产生的影响萌动率= 萌动外植体数未污染的外植体数1 0 0 2 2 不同培养基对百合叶片再生植株的影响表2 的分析结果表明，M 2 培养基较适宜诱导百合叶片的再生植株，再生率为5 5 。高浓度的6 - B A 比较容易诱导出芽。表2 不同培养基对百合叶片不定芽产生的影响2 3 不同培养基对百合不定芽增殖的影响表3 可以看出，1 号培养基的增殖效果最好，增殖倍数达2 9 5 ，1 2 号培养基的增殖效果最差，增殖倍数为1 2 8 。6 - B A 和N A A 的浓度与比例是影响增殖的主要因素，6 - B A 浓度越高，越不利于不定芽的增 殖，而6 - B A 和N A A 的比例为1 0 ：1 时较有利于不定芽的增殖。2 4 在不同蔗糖比例培养基上百合不定芽的增殖情况从表4 可以看出，3 的蔗糖比例最适宜不定芽的增殖，增殖率为2 7 0 。随着蔗糖比例的提高， 增殖率降低。1 0 8中国球根花卉年报2 5 不同培养基对百合不定芽生根的影响从表5 可以看出，在2 号培养基上生根效果最佳，生根率达9 0 o ，最大根长为2 3 0 较适宜后期 的栽培，且根健壮。衰5 不同培养基对百合不定芽生根的影响培养基编号( 粉)接种数专黔生根率最大根长生长情况1仉0 63 01 96 3 31 8 9根较粗壮，生根量少20 1 03 02 79 0 023 0根健壮，生根量多30 1 53 02 58 3 32 9 6根粗壮，生根量多3 讨论百合育种工作中选育出来的优良株系和野生的百合资源数量有限，很难进行下一步的筛选和资源保存+ 所以采用叶片作为外植体是较好的选择。其优点是取材容易，繁殖周期短，节省培养基。氯化汞是植物组织培养中常用的一种外植体消毒剂，其使用浓度和消毒时间对外植体的萌动有很大的影响。本试验以O 1 0 氯化汞对百合叶片消毒5 m i n 为最佳。消毒时间过短，达不到抑菌效果；消毒百合叶片离体不定芽发生和快繁技术研究1 0 9时间过长，又会对外植体产生一定的伤害，从而使萌动率降低。百合不定芽的产生受6 B A 和N A A 的影响，当6 - B A 2 0 m g L ，N A A 0 5 m g L 时，最适宜诱导百合不定芽的产生，6 B A 的影响较N A A 大，这与其他植物组织培养相同【”“。罗凤霞用新铁炮百合的叶片作为外植体，其诱导率为1 1 4 3 【l “。而本研究中的诱导率为6 8 8 ， 说明消毒的时间和所用的培养基有利于百合叶片的诱导。马纯艳用有斑百合的叶片培养植株成功mJ ，但未建立起快繁体系。本研究筛选出了适宜百合增殖和生根的培养基，建立了工厂化生产的快繁体系。这对百合优良株系的快繁和百合资源的保存具有重要意义。参考文献 1 郑爱珍，张峰百合的繁殖方法 J 北方园艺，2 0 0 4 ( 4 ) ：4 3 2 姚连芳，周俊国殷桂琴百合组织培养试验研究 J 贵州农业科学，1 9 9 9 ，2 7 ( 3 ) ：4 7 4 8 3 唐东芹，钱虹妹，黄丹枫百合基因转化胚性愈伤组织受体系统的建立 J 浙江林学院学报，2 0 0 3 ，2 0 ( 3 ) ：2 7 3 2 7 6 4 吴若菁，阮少宁百合胚状体形成途径及植株的再生研究 J 福建林学院学报，7 0 0 3 ，2 3 ( 4 ) ：3 2 2 ，3 2 5 5 J 白美发青山百合的组织培养与快速繁殖 J 贵州农业科学，2 0 0 3 ，3 1 ( 6 ) ：2 5 。2 6【6 李睿曙香百合的组织培养与快速繁殖【J 甘肃林业科技，2 0 0 3 ，2 8 ( 2 ) ：1 3 。1 4 7 林天照，张春镇，危天进麝香百合花梗的离体培养研究 J 福建热作科技，2 0 0 3 ，2 8 ( 3 ) ：5 6 8 丁兰，赵庆芳，谢晖泰伯百合的离体快繁 J 西北师范大学学报，2 0 0 3 ，3 9 ( 3 ) ：6 5 6 7 9 赵庆芳，李巧峡，丁兰西伯利亚百合的组织培养和离体快繁 J 甘肃科学学报，2 0 0 3 ，1 5 ( 4 ) ：5 2 5 5 1 0 马惠，郭扶兴，周俊彦百合叶片愈伤组织的诱导和植株再生 J 植物生理学通讯，1 9 9 2 ，2 8 ( 4 ) ：2 8 4 。2 8 7 1 1 张君，武丽敏，王雷麝香百台组培快繁技术初步研究 J 吉林农业大学学报，2 0 0 2 ，2 4 ( 1 ) ：5 3 5 4 ，8 1 1 2 胡国富，李风兰，袁强北青兰( 醣脚，帅，- h m 哪印蜘钾) 叶片组织培养的研究 J 东北农业大学学报，2 0 0 4 ，3 5 ( 2 ) ：1 9 5 1 9 8 1 3 臧运