南京大学硕士学位论文:盐胁迫下雨生红球裁 ( H a e m a c o c c a s P l n v i a l i s )生长和虾青素积累的研究毕业论文题目:植物学专业2 0 0 0级 硕士生性名:指导教师 ( 姓名、职称 ) :中文摘要本文 对盐 胁迫下雨 生红 球藻的 生长、 . .T v I D A S * - 量、 抗氧 化酶( S O D . C A T ) 活性及虾青素含量进行了 研究.结果 表明: 在实 验范围内， 藻的生长随着N a C l 浓度的升高受到明显抑制。 0 . 7 5 % 的盐度是对该藻生长造成较小影响的上限， 1 .2 5 %的盐度造成处理第8 天时的生物量仅为对照的1 8 .6 %，处理第1 0 天时藻体变为灰白色，细 胞消融死亡. 杭氧化酶活性的变 化情况为:随着盐 度的 升高， S O D .C A T 酶活性与M D A含量均先升高 后下降， 除S O D酶活性在盐度为。 .7 5 % 时达到最大 值外， 其余均在盐度为1 . 0 % 时达到最大。 各盐 度处理的S O D酶活性、 C A T酶活性与M D A含量均随着时间的推移下降，1 . 2 5 % 盐度下的S O D酶活性除外。在雨生红 球藻的盐 度耐受范围( 小于 1 %) 以内， 虾青素的含量随着N a C l 浓 度的升高而升高，I %时达到最高 值，与对照相比，增加幅度为7 2 .2 %,采用分光光度分析方法和 H P L C反相色 谱法对雨生红球藻提取液中的虾青素进行了 定性、 定量分析， 建立了 雨 生红球藻中 虾青素含量的测定方法.高 效液相反相色 谱法采用 C h r o m as i l C 1 8 柱， 4 .6 m m x 2 5 0 m m .以甲醉一乙 睛一 水-四氢吠喃 = 7 4 巧: 6 : 5 为流动 相， 流量为。 . 5 m l/ m i n 泄测波长4 7 4 n m . 实 验结果证明了雨生红球藻 提取液中 虾青素的 存在。同时 显示虾青素浓 度在 4 .0 - 2 0 .0 u g / m l 范 围 内 线 性 关 系良 好， 产 = 0 .9 9 9 9 . 分 光 光 度 法 检 测 结 果 表明 以 甲 醇一 氛仿二 1 : 9 的混 合溶剂 提取虾 青素 效果 较 好， 虾青素浓 度在0 一 1 0 .0 u g / m l 之间 线 性关系良 好， 产 = 0 .9 9 8 2 。 对同 一样品， 两 种方法 分析得出 的 虾青 素浓 度分别为4 .5 8 p 创 m l 和8 3 .3 6 p g / m l ， 分别占 藻 粉干重的0 .0 7 3 % 和1 . 3 3 % . 这一结果 证实了 雨生红球藻中 虾青素的单醋和双醋形式占9 8 % 以 上， 游离 虾青素只占1 % 左右的报道.关 健词 盐 胁迫 ; 雨 生红 球藻; 虾青素; 生长 速率; 抗氧化 酶; 分光 光度法;高效液相反相色 谱南京大学硕士学位论文:盐胁迫下雨生红球藻 ( H a e m a 。二。P l u v i a l i s ) 生长和虾青素积累的研究T H E S I S : S t u d y o n t h e t h e g r o w t h a n d a c c u m a l a t i o n o f a s t a x a n t h i n o fHa e m a c o c c u s p l u v i a l i s u n d e r s a l t s t r e s sS P E C I A L I Z A T I O N: B o t a n yP O S T G R A D U A T E : Q i u y i C h e nMENTOR: P r o f . Zh i l i Li uAb s t r a c tT h e e f f e c t o f Ha e ma c o c c u sa c t i v i t y o f S u p e r o x i d e d i s m u t a s ep l u v i a l i s g r o w t h( S O D ) , c a t a l a s ec u r v e , t h e c o n t e n t o f MD A , t h ea n d a s t a x a n t h i n w a s i n v e s t i g a t e du n d e r s a l t s t r e s s . O u r r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e g r o w t h o f H a e m a c o c c u s p l u v i a l is w a ss i g n i fi c a n t l y i n h i b i t e d w h e n N a C l c o n c e n t r a t i o n w a s h i g h e r th a n 0 . 7 5 % , w h i c ha p p e a r e d a s a n u p p e r l im i t o f l e s s h a r m f u l f o r g r o w t h o f H a e m a c o c c u s p l u v ia l is u n d e r s a lts t r e s s . A d d i t i o n 1 .2 5 % N a C l t o t h e n i e d i a c a u s e d a g r e a t d e c r e a s e i n b i o m a s s o fH a e m a c o c c u s p l u v i a l i s , o n l y 1 8 . 6 % c o m p a r e d t o C K a f t e r 8 d a y s m e d i a c u l t u r e . I t w e n tfr o m b a d t o w o r s e u p t o t h e t e n t h d a y , w i t h c e l l b o d y b e c o m i n g o ff w h i t e , c e l l l y s i sa n d d e a d . A p a tt e rn o f d y n a m i c a c t i v i t y o f a n t i - o x i d a s e w a s a s f o l l o w s :T h e a c t i v i t y o f S O D , C A T a n d MD A c o n t e n t i n c r e a s e d f ir s t l y t h e n d e c r e a s e dw i t h t h e r i s e o f N a C l c o n c e n t r a t i o n . S O D a c t i v i t y r e a c h e d i t s m a x i m a l v a l u e a t 0 .7 5 %w h i l e C A T , MD A k e p t t h e i r h i g h o n e s a t 1 % N a C l . A l l t h e c h a r a c t e r s ( S O D , C A T ,MD A ) d e c r e a s e d e x c e p t t h e S O D a c t i v i t y a t 1 .2 5 % l e v e l . I f t r e a t m e n t d u r a t i o ne x t e n d e d w i t h i n t h e t o l e r a n t l i m i t o f s a l t s t r e s s ( 1 % ) . , t h e c o n t e n t o f a s t a x a n t h i ni n c r e a s e d a s N a C l c o n c e n t r a t i o n w e n t u p w h i c h r e a c h e d i t s m a x i m a l c o n t e n t a t 1N a C l l e v e l a n d i n c r e a s e d a b o u t 7 2 . 2 % c o m p a r e d w i t h C KQ u a l i t a t i v e a n d q u a t i t a t i v e a n a l y s e s w e r e c a r r i e d o u t b y e m p l o y in g H P L C a n ds p e c t r o p h o t o m e t ry . T h u s , w e s e t u p a m e t h o d o f m e a s u r e m e n t o f a s t a x a n t h in i nH a e m a c o c c u s p l u v ia l is . P e a k a re a d i s p l a y e d b y H P L C i s l i n e a r w i t h t h e c o n t e n t o fa s t a x a n t h i n u s i n g o u r a p p r o a c h ,K e y w o r d s : s a l t s t r e s s ; H a e m a c o c c u s p l u v i a l is ; a s t a x a n t h i n ; g r o w th r a t e ; a n t i - o x i d a s e ;s p e c t r o p h o t o m e t r y ; H P L C.2.南京大学硕士学位论文:盐胁迫下雨生红球藻 ( H a e m a c o c c u s P l u v i a l i s )生长和虾青素积累的研究第一部分综述雨生红球藻 ( H a e m a t o c o c c u s 川 u v i a l i s) 是一种单细胞微藻， 隶属绿藻门、团藻目、红球藻科、红球藻属。雨生红球藻对极端环境具有适应能力，当处于营养缺乏，或者诸如光照度，高温等不适宜条件下时， 藻体便由运动的营养细胞转变为静止的厚壁抱子， 同时大量积累红色的虾青素而呈现红色，故名。1 .雨生红球藻的一般特征1 . 1 形态结构尽管雨生红球藻体仅由 一个细胞构成， 但是生活史呈现多样性， 存在游动和不动两个阶段的相互转化。见图1 .雨生红球藻的游动细胞在光境下呈椭圆形或卵形，大小从 5 微米左右到 2 0-3 0微米不等，有时甚至更大些。原生质体和细胞壁间存在较大的空间，二者通过很多分支或不分支的细胞质连丝相连， 但是在细胞前端没有细胞连丝， 原生质体前端常常呈乳头状突起， 伸缩泡数个至数十个，不规则的分散于原生质体中。 在原生质体和细胞壁之间的间隙内充满透明胶样物质。 细胞具有两条等长鞭毛， 鞭毛通过前端的叉状胶质管伸出细胞壁， 在体外的程度约等于细胞体长。 鞭毛的摆动推动细胞自由 游动， 细胞核位于中央位置， 核附近有一个眼点。 叶绿体呈杯状、 复杂的网状或颗粒状， 并且具有典型的绿藻蛋白核。 游动细胞多呈绿色，有时也成红色。在透射电镜下， 游动细胞近细胞一侧切面可见发达的周缘位网状叶绿体， 其